LT4、Ki67蛋白表達與卵巢癌淋巴結轉移、腫瘤分化、臨床分期的關系

郭 瑩 徐 毅 杜德奇

免疫球蛋白樣轉錄子4(LT4)的異常表達，能夠通過影響自身免疫功能的紊亂，促進局部癌細胞轉錄活性的加劇，導致癌細胞生物學特征的改變，增加癌細胞的浸潤風險[1-2]；細胞增殖核抗原67(Ki67)蛋白的異常表達，能夠通過提高癌細胞增殖過程中紡錘體分裂速度的改變，影響到腫瘤的早期發(fā)生過程[3]。部分研究揭示了Ki67或者LT4蛋白在宮頸癌或者子宮內膜癌中的表達情況，認為高表達的LT4、Ki67蛋白是促進相關婦科惡性腫瘤患者生存預后惡化的重要因素。本次研究選取90例上皮性卵巢癌組織學標本，探討了Ki67或者LT4蛋白的表達及其與患者臨床病理特征的關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年3月至2019年6月收集的90例上皮性卵巢癌組織學標本(卵巢癌組)、60例符合要求的卵巢癌旁組織標本(對照組)。卵巢癌組，患者年齡35～67歲，平均(50.0±12.4)歲，病理學類型：漿液性囊腺癌45例、黏液性囊腺19癌、子宮內膜樣癌15例、透明細胞癌11例；臨床分期(FIGO分期標準)：Ⅰ期14例、Ⅱ期31例、Ⅲ期28例、Ⅳ期17例；組織病理學分化檢查結果：低分化40例、中分化32例、高分化18例；經(jīng)病理學檢查發(fā)現(xiàn)淋巴結轉移陽性48例。對照組，患者年齡32～65歲，平均(49.1±11.3)歲。卵巢癌組和對照組的年齡對比均衡可比(P>0.05)。

1.2 納入排除標準

1.2.1 納入標準 ①卵巢癌的診斷標準參考中華醫(yī)學會制定的標準；②所有患者均經(jīng)過病理學檢查證實；③在我院接受腫瘤細胞減滅術及盆腔和腹主動脈旁淋巴結清掃術；④癌旁組織標本為距離腫瘤病灶邊緣>3 cm的正常卵巢組織；⑤術后對清掃的淋巴結進行病理檢查。

1.2.2 排除標準 ①伴有其他部位惡性腫瘤；②手術前患者具有放化療病史；③伴有凝血功能障礙。

1.3 免疫組化染色檢測方法

石蠟切片采用二甲苯進行脫臘至水，5%的雙氧水常溫下孵育10 min，采用磷酸鹽緩沖液孵育5 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，5%的山羊血清抗體封閉10 min，不沖洗，滴加一抗(購自abcum公司 批號：20119304濃度：1∶500)，4 ℃冰箱孵育過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，滴加生物素標記好的二抗(購自北京康泰生物 批號：20104856 濃度：1∶1000)，37 ℃孵育30 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，滴加第二代辣根酶標記的工作液體，37 ℃孵育10 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，顯色之后采用酒精脫水、二甲苯透明、樹膠封片，鏡下觀察。

1.4 免疫染色讀片評分標準

讀片評分判斷：LT4蛋白、Ki67蛋白在光鏡下觀察，主要定位在卵巢癌細胞的細胞質和細胞核，其陽性為黃色、棕黃色、褐色顆粒。①按照陽性細胞染色強度：無顏色0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、褐色或者黑色為3分；②依據(jù)免疫染色陽性細胞所占比例：陽性染色細胞占比≤10%為1分、>10%～50%為2分、>50%～75%評價為3分、>75%評價為4分。細胞占比評分及染色評分相乘<3分則判斷為陰性、如果≥3分則判斷為為陽性。免疫組化染色總分<3分：評定為“-”；評分3～5分，評定為“+”；評分6～9分，評定為“++”；評分>9分，評定為“+++”。

1.5 統(tǒng)計學方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)的組間比較采用χ2檢驗；P<0.05為比較差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 卵巢癌組織標本、對照組中的LT4蛋白、Ki67蛋白陽性表達率比較

卵巢癌組的Ki67蛋白陽性表達率為71.11%(64/90)，高于對照組的6.67%(4/60)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=37.755，P<0.001)。LT4蛋白陽性表達率卵巢癌組為55.56%(50/90)，高于對照組的3.33%(2/60)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=25.109，P<0.001)。見表1。

表1 2組Ki-67、LT4蛋白表達情況/例

2.2 卵巢癌組織標本中LT4蛋白、Ki67蛋白陽性表達與患者臨床分期、淋巴結轉移、腫瘤分化的相關性

低分化、發(fā)生淋巴結轉移的卵巢癌組織中Ki67蛋白陽性表達率較高分化和中分化、未發(fā)生淋巴結轉移的卵巢癌組織高且差異顯著(P<0.05)。Ⅲ期和Ⅳ期、低分化、發(fā)生淋巴結轉移的卵巢癌組織中LT4蛋白陽性表達率較Ⅰ期和Ⅱ期、高分化和中分化、未發(fā)生淋巴結轉移的卵巢組織高且差異顯著(P<0.05)，見表2。

3 討論

長期的臨床隨訪觀察分析發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者的無瘤生存時間不足30個月，同時患者遠期多器官功能衰竭的發(fā)生率也明顯上升。對于卵巢癌患者臨床病理特征的評估具有一定的臨床價值，其能夠在卵巢癌的整體性病情評估或者臨床預后的預測方面發(fā)揮作用。雖然CA125或者CEA等腫瘤指標能夠在卵巢癌的病情評估過程中發(fā)揮作用，但依靠CA125或者CEA評估卵巢癌患者病情的可靠性較低，其對于卵巢癌患者臨床病理特征評估的一致性率不足30%[4]。LT4蛋白通過對于絡氨酸的磷酸化效應，能夠通過影響到細胞的增殖、凋亡抑制或者癌細胞紡錘體的分離等過程，最終影響到上皮來源惡性腫瘤細胞的異常發(fā)生過程[5-6]。LT4蛋白的異常表達能夠通過促進癌細胞的CD4+T淋巴細胞的激活，促進TH1/TH2T淋巴細胞免疫紊亂的發(fā)生，加劇癌細胞對于基底膜突破的風險；Ki67蛋白是重要的癌細胞增殖相關抗原，其表達濃度的改變能夠通過促進癌細胞內的轉錄基因的結合，提高腫瘤干細胞增殖活性的維持[7-8]。部分研究揭示了Ki67蛋白在卵巢癌中的異常表達，認為Ki67的表達增強能夠導致患者治療預后的惡化，影響患者的綜合性放化療治療結局，但對于LT4蛋白的分析研究不足。

表2 Ki67、LT4蛋白陽性表達與卵巢癌患者臨床分期、淋巴結轉移、腫瘤分化的相關性(例，%)

本次研究通過免疫組化相關分析研究發(fā)現(xiàn)，在卵巢癌患者病灶組織中，Ki67蛋白或者LT4蛋白的表達明顯上升，高于卵巢正常組織，差異具有統(tǒng)計學意義，提示Ki67蛋白或者LT4蛋白均可能參與到卵巢惡性腫瘤的病情進展過程中，二者的高表達能夠通過下列幾個方面促進卵巢癌的發(fā)生及遠期臨床病情的進展過程[9-10]：①Ki67蛋白的高表達，能夠導致轉錄因子cyc的激活，促進癌細胞轉錄上游啟動子的激活，增加癌細胞的增殖風險；②LT4蛋白的高表達，能夠導致卵巢癌生發(fā)上皮細胞內的NOTCH或者AKT等信號通路的激活，導致腫瘤蛋白P16或者P56的高表達，影響惡性腫瘤的病理進程。Mahadevappa等[11-12]在探討了65例樣本量的卵巢癌患者的腫瘤相關蛋白的表達后發(fā)現(xiàn)，Ki67的陽性表達率可平均上升25%以上，同時患者的放化療效果越差，病死率越高，Ki67蛋白的陽性表達率越高。在探討Ki67蛋白或者LT4蛋白的表達與卵巢癌患者臨床病理特征的關系過程中發(fā)現(xiàn)，發(fā)生了淋巴結轉移或者癌細胞分化程度較差的人群中，Ki67蛋白或者LT4蛋白的表達陽性率較高，提示相關指標的表達與卵巢癌患者的病情較為密切，其機制主要考慮與二者的異常表達可影響卵巢生發(fā)上皮細胞浸潤能力的改變，促進了癌細胞對于淋巴結內皮細胞粘附能力的增強，提高了淋巴結轉移的風險。同時卵巢癌患者的臨床分期越晚，Ki67蛋白或者LT4蛋白的陽性表達率越高，臨床分期的變化與不同生物學因子的表達關系，主要考慮與相關指標的改變對于卵巢癌浸潤盆腔組織、腹膜組織或者肝臟組織等有關，進而影響到了臨床分期的進展[13]。

本次研究探討了LT4蛋白的表達與卵巢癌患者臨床病理特征的關系。綜上所述，卵巢癌組織中LT4蛋白、Ki67蛋白較正常組織表達上調，并且與腫瘤臨床分期、淋巴結轉移、腫瘤分化程度關系密切。