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    LT4、Ki67蛋白表達(dá)與卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化、臨床分期的關(guān)系

    2020-11-24 04:50:56杜德奇
    實(shí)用癌癥雜志 2020年11期

    郭 瑩 徐 毅 杜德奇

    免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄子4(LT4)的異常表達(dá),能夠通過影響自身免疫功能的紊亂,促進(jìn)局部癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄活性的加劇,導(dǎo)致癌細(xì)胞生物學(xué)特征的改變,增加癌細(xì)胞的浸潤風(fēng)險(xiǎn)[1-2];細(xì)胞增殖核抗原67(Ki67)蛋白的異常表達(dá),能夠通過提高癌細(xì)胞增殖過程中紡錘體分裂速度的改變,影響到腫瘤的早期發(fā)生過程[3]。部分研究揭示了Ki67或者LT4蛋白在宮頸癌或者子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況,認(rèn)為高表達(dá)的LT4、Ki67蛋白是促進(jìn)相關(guān)婦科惡性腫瘤患者生存預(yù)后惡化的重要因素。本次研究選取90例上皮性卵巢癌組織學(xué)標(biāo)本,探討了Ki67或者LT4蛋白的表達(dá)及其與患者臨床病理特征的關(guān)系。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料

    選取我院2015年3月至2019年6月收集的90例上皮性卵巢癌組織學(xué)標(biāo)本(卵巢癌組)、60例符合要求的卵巢癌旁組織標(biāo)本(對(duì)照組)。卵巢癌組,患者年齡35~67歲,平均(50.0±12.4)歲,病理學(xué)類型:漿液性囊腺癌45例、黏液性囊腺19癌、子宮內(nèi)膜樣癌15例、透明細(xì)胞癌11例;臨床分期(FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)):Ⅰ期14例、Ⅱ期31例、Ⅲ期28例、Ⅳ期17例;組織病理學(xué)分化檢查結(jié)果:低分化40例、中分化32例、高分化18例;經(jīng)病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性48例。對(duì)照組,患者年齡32~65歲,平均(49.1±11.3)歲。卵巢癌組和對(duì)照組的年齡對(duì)比均衡可比(P>0.05)。

    1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

    1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①卵巢癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn);②所有患者均經(jīng)過病理學(xué)檢查證實(shí);③在我院接受腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)及盆腔和腹主動(dòng)脈旁淋巴結(jié)清掃術(shù);④癌旁組織標(biāo)本為距離腫瘤病灶邊緣>3 cm的正常卵巢組織;⑤術(shù)后對(duì)清掃的淋巴結(jié)進(jìn)行病理檢查。

    1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①伴有其他部位惡性腫瘤;②手術(shù)前患者具有放化療病史;③伴有凝血功能障礙。

    1.3 免疫組化染色檢測(cè)方法

    石蠟切片采用二甲苯進(jìn)行脫臘至水,5%的雙氧水常溫下孵育10 min,采用磷酸鹽緩沖液孵育5 min,蒸餾水沖洗3次,每次5 min,5%的山羊血清抗體封閉10 min,不沖洗,滴加一抗(購自abcum公司 批號(hào):20119304濃度:1∶500),4 ℃冰箱孵育過夜,蒸餾水沖洗3次,每次5 min,滴加生物素標(biāo)記好的二抗(購自北京康泰生物 批號(hào):20104856 濃度:1∶1000),37 ℃孵育30 min,蒸餾水沖洗3次,每次5 min,滴加第二代辣根酶標(biāo)記的工作液體,37 ℃孵育10 min,蒸餾水沖洗3次,每次5 min,顯色之后采用酒精脫水、二甲苯透明、樹膠封片,鏡下觀察。

    1.4 免疫染色讀片評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

    讀片評(píng)分判斷:LT4蛋白、Ki67蛋白在光鏡下觀察,主要定位在卵巢癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核,其陽性為黃色、棕黃色、褐色顆粒。①按照陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度:無顏色0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、褐色或者黑色為3分;②依據(jù)免疫染色陽性細(xì)胞所占比例:陽性染色細(xì)胞占比≤10%為1分、>10%~50%為2分、>50%~75%評(píng)價(jià)為3分、>75%評(píng)價(jià)為4分。細(xì)胞占比評(píng)分及染色評(píng)分相乘<3分則判斷為陰性、如果≥3分則判斷為為陽性。免疫組化染色總分<3分:評(píng)定為“-”;評(píng)分3~5分,評(píng)定為“+”;評(píng)分6~9分,評(píng)定為“++”;評(píng)分>9分,評(píng)定為“+++”。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    所有數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)的組間比較采用χ2檢驗(yàn);P<0.05為比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 卵巢癌組織標(biāo)本、對(duì)照組中的LT4蛋白、Ki67蛋白陽性表達(dá)率比較

    卵巢癌組的Ki67蛋白陽性表達(dá)率為71.11%(64/90),高于對(duì)照組的6.67%(4/60),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=37.755,P<0.001)。LT4蛋白陽性表達(dá)率卵巢癌組為55.56%(50/90),高于對(duì)照組的3.33%(2/60),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=25.109,P<0.001)。見表1。

    表1 2組Ki-67、LT4蛋白表達(dá)情況/例

    2.2 卵巢癌組織標(biāo)本中LT4蛋白、Ki67蛋白陽性表達(dá)與患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化的相關(guān)性

    低分化、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌組織中Ki67蛋白陽性表達(dá)率較高分化和中分化、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌組織高且差異顯著(P<0.05)。Ⅲ期和Ⅳ期、低分化、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌組織中LT4蛋白陽性表達(dá)率較Ⅰ期和Ⅱ期、高分化和中分化、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢組織高且差異顯著(P<0.05),見表2。

    3 討論

    長期的臨床隨訪觀察分析發(fā)現(xiàn),卵巢癌患者的無瘤生存時(shí)間不足30個(gè)月,同時(shí)患者遠(yuǎn)期多器官功能衰竭的發(fā)生率也明顯上升。對(duì)于卵巢癌患者臨床病理特征的評(píng)估具有一定的臨床價(jià)值,其能夠在卵巢癌的整體性病情評(píng)估或者臨床預(yù)后的預(yù)測(cè)方面發(fā)揮作用。雖然CA125或者CEA等腫瘤指標(biāo)能夠在卵巢癌的病情評(píng)估過程中發(fā)揮作用,但依靠CA125或者CEA評(píng)估卵巢癌患者病情的可靠性較低,其對(duì)于卵巢癌患者臨床病理特征評(píng)估的一致性率不足30%[4]。LT4蛋白通過對(duì)于絡(luò)氨酸的磷酸化效應(yīng),能夠通過影響到細(xì)胞的增殖、凋亡抑制或者癌細(xì)胞紡錘體的分離等過程,最終影響到上皮來源惡性腫瘤細(xì)胞的異常發(fā)生過程[5-6]。LT4蛋白的異常表達(dá)能夠通過促進(jìn)癌細(xì)胞的CD4+T淋巴細(xì)胞的激活,促進(jìn)TH1/TH2T淋巴細(xì)胞免疫紊亂的發(fā)生,加劇癌細(xì)胞對(duì)于基底膜突破的風(fēng)險(xiǎn);Ki67蛋白是重要的癌細(xì)胞增殖相關(guān)抗原,其表達(dá)濃度的改變能夠通過促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄基因的結(jié)合,提高腫瘤干細(xì)胞增殖活性的維持[7-8]。部分研究揭示了Ki67蛋白在卵巢癌中的異常表達(dá),認(rèn)為Ki67的表達(dá)增強(qiáng)能夠?qū)е禄颊咧委燁A(yù)后的惡化,影響患者的綜合性放化療治療結(jié)局,但對(duì)于LT4蛋白的分析研究不足。

    表2 Ki67、LT4蛋白陽性表達(dá)與卵巢癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化的相關(guān)性(例,%)

    本次研究通過免疫組化相關(guān)分析研究發(fā)現(xiàn),在卵巢癌患者病灶組織中,Ki67蛋白或者LT4蛋白的表達(dá)明顯上升,高于卵巢正常組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示Ki67蛋白或者LT4蛋白均可能參與到卵巢惡性腫瘤的病情進(jìn)展過程中,二者的高表達(dá)能夠通過下列幾個(gè)方面促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生及遠(yuǎn)期臨床病情的進(jìn)展過程[9-10]:①Ki67蛋白的高表達(dá),能夠?qū)е罗D(zhuǎn)錄因子cyc的激活,促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄上游啟動(dòng)子的激活,增加癌細(xì)胞的增殖風(fēng)險(xiǎn);②LT4蛋白的高表達(dá),能夠?qū)е侣殉舶┥l(fā)上皮細(xì)胞內(nèi)的NOTCH或者AKT等信號(hào)通路的激活,導(dǎo)致腫瘤蛋白P16或者P56的高表達(dá),影響惡性腫瘤的病理進(jìn)程。Mahadevappa等[11-12]在探討了65例樣本量的卵巢癌患者的腫瘤相關(guān)蛋白的表達(dá)后發(fā)現(xiàn),Ki67的陽性表達(dá)率可平均上升25%以上,同時(shí)患者的放化療效果越差,病死率越高,Ki67蛋白的陽性表達(dá)率越高。在探討Ki67蛋白或者LT4蛋白的表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系過程中發(fā)現(xiàn),發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者癌細(xì)胞分化程度較差的人群中,Ki67蛋白或者LT4蛋白的表達(dá)陽性率較高,提示相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)與卵巢癌患者的病情較為密切,其機(jī)制主要考慮與二者的異常表達(dá)可影響卵巢生發(fā)上皮細(xì)胞浸潤能力的改變,促進(jìn)了癌細(xì)胞對(duì)于淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞粘附能力的增強(qiáng),提高了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)卵巢癌患者的臨床分期越晚,Ki67蛋白或者LT4蛋白的陽性表達(dá)率越高,臨床分期的變化與不同生物學(xué)因子的表達(dá)關(guān)系,主要考慮與相關(guān)指標(biāo)的改變對(duì)于卵巢癌浸潤盆腔組織、腹膜組織或者肝臟組織等有關(guān),進(jìn)而影響到了臨床分期的進(jìn)展[13]。

    本次研究探討了LT4蛋白的表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系。綜上所述,卵巢癌組織中LT4蛋白、Ki67蛋白較正常組織表達(dá)上調(diào),并且與腫瘤臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度關(guān)系密切。

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