血清GROβ、TK1水平變化與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系

李 琴 彭翠蘭 汪紅英

結(jié)直腸癌的病死率較高，在不同人群中均具有較高的發(fā)病率，部分研究者認(rèn)為，結(jié)直腸癌的基礎(chǔ)發(fā)病率可超過758/10萬人以上[1]，同時其年平均發(fā)病人數(shù)也有明顯的上升[2]。不同的病理生理性因素，均能夠影響到結(jié)直腸癌的病情變化過程，促進腫瘤細(xì)胞的異常增殖和凋亡，其中胸苷激酶1(TK1)能夠通過誘導(dǎo)癌基因的異常激活，增加癌細(xì)胞內(nèi)DNA的持續(xù)性異常分裂速度，最終增加腫瘤細(xì)胞的增殖調(diào)控失常風(fēng)險[3]。生長相關(guān)癌基因產(chǎn)物β(GROβ)能夠通過誘導(dǎo)生長因子的激活，增加新生腫瘤血管的形成速度，提高腫瘤病灶組織的血流灌注水平，促進結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展[4]。本研究探討了GROβ、TK1的表達與結(jié)直腸癌患者的病情關(guān)系，報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年3月至2018年4月經(jīng)病理學(xué)檢查確診的結(jié)直腸癌患者90例(腫瘤組)、90例結(jié)直腸鏡檢正常的志愿者作為對照組。診斷及入選標(biāo)準(zhǔn)：①結(jié)直腸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華外科學(xué)會制定的標(biāo)準(zhǔn)[5]；②所有結(jié)直腸癌患者均經(jīng)過病理學(xué)檢查證實；③在獲取患者的血清標(biāo)本前，患者無放化療病史；④對照組為我院經(jīng)腸道鏡檢正常的患者；⑤本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關(guān)醫(yī)學(xué)倫理規(guī)定，經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他部位惡性腫瘤、感染疾病；②既往手術(shù)后復(fù)發(fā)的結(jié)直腸癌患者；③未經(jīng)病理學(xué)檢查證實；④肝腎、造血系統(tǒng)疾??；⑤免疫系統(tǒng)疾病。

腫瘤組男性52例、女性38例，年齡42～76歲，平均(61.2±10.2)歲；TNM分期：Ⅰ期20例、Ⅱ期34例、Ⅲ期28例、Ⅳ期8例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47例；組織學(xué)分化程度：高分化21例、中分化39例、低分化30例；浸潤達到肌層51例。對照組男性48例、女性42例，年齡39～75歲，平均(60.8±9.4)歲。2組患者的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

采用ELISA法進行TK1、GROβ的檢測，采用十字交叉的方法進行抗原濃度的測定，采用碳酸鹽緩沖液進行抗原稀釋，加入96孔的酶標(biāo)板中，蓋好酶標(biāo)板蓋后置于4 ℃冰箱過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，輕輕叩擊酶標(biāo)板甩干。每孔中加入5%的脫脂牛奶200 μl，置于4 ℃冰箱過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，加入稀釋好的抗體(購自abcum公司 濃度1∶800)，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，每孔中加入100 μl的底物，顯色后在酶標(biāo)儀上進行吸光度的檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 腫瘤組和對照組的血清TK1、GROβ水平比較

腫瘤組患者的血清TK1、GROβ水平均高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；見表1。

表1 腫瘤組和對照組的血清TK1、GROβ水平比較

2.2 結(jié)直腸癌患者血清TK1、GROβ水平與腫瘤TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度及浸潤深度的關(guān)系

不同TNM分期、不同浸潤深度的結(jié)直腸癌患者血清GROβ水平比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、不同組織學(xué)分化程度的結(jié)直腸癌患者血清GROβ水平組間比較，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表2。不同TNM分期、不同組織學(xué)分化程度、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者血清TK1水平比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；不同浸潤深度的結(jié)直腸癌患者血清TK1水平組間比較，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 結(jié)直腸癌患者血清GROβ、TK1水平與腫瘤TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度及浸潤深度的關(guān)系

3 討論

部分地區(qū)流行病學(xué)報道，結(jié)直腸癌的年平均發(fā)病率具有顯著的上升趨勢，同時結(jié)直腸癌的年平均病死率也明顯增加[6]。通過對于結(jié)直腸癌患者發(fā)病過程中腫瘤調(diào)控因子的分析，能夠為臨床上結(jié)直腸癌的診斷提供潛在的參考指標(biāo)，同時還能夠為結(jié)直腸癌的免疫靶向治療提供新的作用靶點。雖然現(xiàn)階段臨床上多數(shù)研究者認(rèn)為在結(jié)直腸癌患者中，癌胚抗原或者糖鏈抗原199的表達濃度明顯上升，但二者與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系不足。本次研究能夠在揭示TK1、GROβ蛋白在結(jié)直腸癌患者血清中表達情況的同時，分析TK1、GROβ的表達與臨床病理特征的關(guān)系。

GROβ能夠通過誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，促進新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)再生，最終提高腫瘤血管的數(shù)量和密度?；A(chǔ)方面的研究還認(rèn)為，GROβ能夠誘導(dǎo)纖維生長因子及胰島素生長因子的激活，促進其對于癌細(xì)胞核DNA的分裂維持作用；TK1是胸苷酸激酶因子，其對于胸苷酸激酶的調(diào)控作用，能夠提高癌基因的激活程度，促進癌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因的上調(diào)程度。TK1對于癌細(xì)胞膜上跨膜轉(zhuǎn)運蛋白受體的激活，能夠提高癌細(xì)胞內(nèi)多種多樣腫瘤信號通路的激活程度[7]。有部分研究發(fā)現(xiàn)在結(jié)直腸癌患者中TKI蛋白的表達與患者病情進展速度有關(guān)[8]，但對GROβ的分析不足。

對于結(jié)直腸癌患者血清中GROβ、TK1的表達分析研究可見，在結(jié)直腸癌患者中，GROβ、TK1蛋白的表達濃度明顯高于正常組，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，表明在結(jié)直腸癌患者中，GROβ、TK1存在顯著的高表達趨勢，提示二者在結(jié)直腸腫瘤的病情進展過程中發(fā)揮了重要調(diào)控作用。GROβ、TK1對于結(jié)直腸癌的病情進展影響，主要在于二者能夠影響癌細(xì)胞增殖速度、提高癌基因修飾激活水平、促進腫瘤血管分支的形成。有其他研究者也發(fā)現(xiàn)，GROβ蛋白的高表達具有顯著的預(yù)后相關(guān)性，在結(jié)直腸癌惡病質(zhì)較為明顯或者短期內(nèi)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險較高的患者中，GROβ蛋白的表達濃度或者陽性率可持續(xù)上升[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，在TNM分期較晚或者浸潤深度較深的患者中，GROβ蛋白的表達陽性率較高，提示GROβ蛋白的高表達能夠顯著促進結(jié)直腸癌的臨床病情的進展。GROβ對于結(jié)直腸癌臨床病理特征的促進作用，主要由于其能夠提高腫瘤細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換過程，提高了腫瘤細(xì)胞的浸潤風(fēng)險，最終促進了TNM分期等的進展。但在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，GROβ蛋白的表達并無明顯的差異，推測GROβ并不會影響到腫瘤細(xì)胞對于淋巴結(jié)組織的粘附能力。不同TNM分期、不同組織學(xué)分化程度、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，血清TK1水平具有顯著差異，表明TKI與結(jié)直腸癌的臨床病理特征同樣密切相關(guān)，這主要由于TKI能夠促進癌細(xì)胞核酸結(jié)構(gòu)的磷酸化，導(dǎo)致癌細(xì)胞生物學(xué)特征的持續(xù)惡化，并影響到了結(jié)直腸黏膜上皮細(xì)胞的分化成熟過程[10]。

綜上所述，結(jié)直腸癌患者血清GROβ、TK1水平升高，與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展具有密切關(guān)系。