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    VITEK MS細(xì)菌質(zhì)譜儀臨床應(yīng)用及效益分析

    2020-11-20 06:29:34馬憲禮梁建仲輝李真周林成定勝
    現(xiàn)代儀器與醫(yī)療 2020年3期
    關(guān)鍵詞:質(zhì)譜儀生化質(zhì)譜

    馬憲禮 梁建 仲輝 李真 周林 成定勝

    (江蘇省蘇北人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)工程部,江蘇 揚(yáng)州 225001)

    基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF MS)是目前微生物鑒定領(lǐng)域革命性的新技術(shù),與常規(guī)鑒定方法相比,其具有快速準(zhǔn)確、檢測(cè)樣本用量少、檢測(cè)成本低等優(yōu)點(diǎn)。MALDI-TOF質(zhì)譜儀不僅可準(zhǔn)確鑒定臨床細(xì)菌和酵母菌屬,還可用于分枝桿菌屬、絲狀真菌的鑒定以及微生物分類(lèi)學(xué)和流行病學(xué)的研究[1-2]。2013年,美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(U.S.Food and Drug Administration,U.S FDA)首次承認(rèn)MALDI-TOF可用于對(duì)微生物的臨床鑒定。我院臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)中心于2016年購(gòu)入一臺(tái)法國(guó)梅里埃公司生產(chǎn)的全自動(dòng)快速微生物質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)VITEK MS,該儀器采用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF MS),已使用4年左右,在臨床使用過(guò)程中對(duì)該儀器逐漸熟悉了解,本文主要介紹該儀器的檢測(cè)原理,臨床使用操作過(guò)程,相比較傳統(tǒng)細(xì)菌鑒定方法的快速性及準(zhǔn)確性,使用該儀器所能節(jié)約的成本和創(chuàng)造的經(jīng)濟(jì)效益,以及目前質(zhì)譜儀的臨床應(yīng)用現(xiàn)狀等。

    1 VITEK MS質(zhì)譜鑒定系統(tǒng)的基本原理

    激光照射生物分子與基質(zhì)結(jié)合形成的共結(jié)晶時(shí),基質(zhì)吸收能量并將其轉(zhuǎn)移到生物分子使之電離成碎片離子,離子經(jīng)電場(chǎng)加速,由于質(zhì)荷比(m/z)以及信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度的不同,在磁場(chǎng)中飛行時(shí)間不同而被檢測(cè),形成特有的指紋圖譜,其與數(shù)據(jù)庫(kù)中的標(biāo)準(zhǔn)圖譜經(jīng)對(duì)比即可鑒定細(xì)菌。有學(xué)者報(bào)道,相比DNA測(cè)序鑒定,VITEK MS快速鑒定96%的苛養(yǎng)革蘭陰性菌到種水平,其也可準(zhǔn)確鑒定85%的需氧革蘭陽(yáng)性菌[3]。因而,質(zhì)譜方法比傳統(tǒng)生化表型鑒定、分子生物學(xué)鑒定更快速準(zhǔn)確。儀器主要由3個(gè)部分構(gòu)成:①樣本電離室,在該區(qū)域激光將樣本進(jìn)行汽化;②飛行時(shí)間質(zhì)量分析器;③粒子探測(cè)器。VITEK MS原理分析見(jiàn)圖1。

    圖1 VITEK MS原理分析

    2 VITEK MS 質(zhì)譜儀臨床應(yīng)用

    可用于分析多種類(lèi)型的樣本,包含核酸、蛋白質(zhì)、微生物,后兩者對(duì)于臨床微生物領(lǐng)域非常有用。樣本鑒定之前,先準(zhǔn)備樣本,將所要鑒定的樣本涂布在靶板上,然后在樣本點(diǎn)位加上基質(zhì)。基質(zhì)要具有以下幾點(diǎn)特性:易于升華、在儀器激光的波長(zhǎng)范圍內(nèi)具有強(qiáng)吸光度。其中α-氰基-4-羥基肉桂酸(α-Cyano-4-hydroxy-cinnamic acid)是在微生物鑒定中常用的基質(zhì)。靶板上涂布上樣本和基質(zhì)后,靶板加載入樣本電離室,在激光的作用下進(jìn)行電離。MALDI-TOF MS儀器一般選用紫外氮激光器(337nm)。激光輻射導(dǎo)致基質(zhì)的震動(dòng)和激發(fā),分析物分子排出(解析)。一旦分析物分子被解析出來(lái),基質(zhì)分子就傳送質(zhì)子給分析物,導(dǎo)致產(chǎn)生氣相的帶正電荷的分析物陽(yáng)離子。這些氣相分析物陽(yáng)離子在樣本電離室中經(jīng)過(guò)電場(chǎng)的加速,獲得一個(gè)初速度,其初速度的大小與其質(zhì)荷比(m/z)相關(guān),然后離子離開(kāi)電離室進(jìn)入飛行時(shí)間質(zhì)量分析器進(jìn)行分離,通過(guò)分析器末端的微粒探測(cè)器來(lái)測(cè)量其飛行時(shí)間,從而推算出微粒的質(zhì)荷比(m/z),樣本的質(zhì)譜圖也由此生成[4-5]。

    每一種微生物都有一張?zhí)禺愋缘馁|(zhì)譜圖,其中包含豐富的可溶性蛋白,如核糖體蛋白、熱擊蛋白等。將未知的微生物質(zhì)譜圖與由已知微生物種圖譜建立起來(lái)的數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì),最佳的匹配則推薦為該未知微生物的鑒定結(jié)果。這一技術(shù)的成功應(yīng)用,其關(guān)鍵因素是微生物體全蛋白質(zhì)譜圖足夠的豐富與獨(dú)特,可以使鑒定結(jié)果確定到屬、種水平,個(gè)別種類(lèi)可以鑒定到菌株水平,即使只應(yīng)用了蛋白質(zhì)組中只有一小部分[7]。

    VITEK MS質(zhì)譜儀臨床應(yīng)用具體操作步驟見(jiàn)圖2~5。

    3 質(zhì)譜儀效益分析

    3.1 直接經(jīng)濟(jì)效益

    使用質(zhì)譜儀以后醫(yī)院可以停止使用目前用于VITKE 2上的鑒定板;醫(yī)院目前每天100個(gè)標(biāo)本,陽(yáng)性率為30%,則每天鑒定的標(biāo)本在30個(gè)左右,目前所用鑒定板的價(jià)格是每個(gè)標(biāo)本48元,使用質(zhì)譜鑒定成本在2元左右,所以就直觀而言,每年鑒定細(xì)菌直接節(jié)省成本為496 800元[8]。

    3.2 綜合效益

    圖2 涂靶板

    圖3 加1ul CHCA基質(zhì)

    圖4 MS檢測(cè)

    圖5 查看結(jié)果

    使用質(zhì)譜鑒定以后能夠減少TAT時(shí)間,減少患者住院時(shí)間,對(duì)于病床的周轉(zhuǎn)率有很大的提高,因此可以提高醫(yī)院的綜合收入。此外,使用質(zhì)譜儀以后,由于目前使用的鑒定藥敏儀和質(zhì)譜儀的無(wú)縫連接,可以縮短報(bào)告時(shí)間,大部分的常見(jiàn)細(xì)菌能在6~8h出藥敏結(jié)果,所以對(duì)臨床的指導(dǎo)幫助提高,臨床因此會(huì)有更多的標(biāo)本送檢,因此可以提高醫(yī)院的綜合收入。

    3.3 社會(huì)效益

    因?yàn)橘|(zhì)譜儀本身存在的快速鑒定、鑒定結(jié)果準(zhǔn)確等特點(diǎn),因此可以提高醫(yī)院病患的治愈率和診療水平,還可以減少病人的死亡率,提高醫(yī)院的社會(huì)地位[9]。

    4 質(zhì)譜儀在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用現(xiàn)狀

    4.1 質(zhì)譜儀在微生物鑒定中的應(yīng)用

    近幾年,隨著科技的發(fā)展質(zhì)譜技術(shù)已成為微生物鑒定分類(lèi)的主流技術(shù),質(zhì)譜儀具有操作簡(jiǎn)便、快速準(zhǔn)確、低成本、微生物數(shù)據(jù)庫(kù)及分析軟件可以不斷更新升級(jí)等優(yōu)點(diǎn),質(zhì)譜技術(shù)是通過(guò)對(duì)微生物表面蛋白分子的檢測(cè),得出該微生物獨(dú)特的蛋白質(zhì)指紋圖譜及圖譜峰值,與數(shù)據(jù)庫(kù)中已知微生物指紋圖譜進(jìn)行對(duì)比,從而得出被檢微生物的品種,由于質(zhì)譜技術(shù)是對(duì)微生物表面特異蛋白進(jìn)行檢測(cè),其準(zhǔn)確性極高,能夠區(qū)別相似或相近的微生物,隨著數(shù)據(jù)庫(kù)的不斷更新升級(jí),質(zhì)譜儀不但可以鑒別已知微生物,還可以發(fā)現(xiàn)新種類(lèi)的微生物。目前質(zhì)譜儀已可以快速準(zhǔn)確鑒定酵母菌屬、分枝桿菌屬、厭氧菌、絲狀真菌、革蘭陽(yáng)性菌、革蘭陰性菌等[10]。

    4.2 質(zhì)譜儀在生化檢測(cè)中的應(yīng)用

    在生化檢測(cè)方面,相對(duì)于傳統(tǒng)檢測(cè)方法,質(zhì)譜技術(shù)具有明顯的優(yōu)勢(shì),一些質(zhì)譜技術(shù)使用較早的國(guó)家,已將化學(xué)發(fā)光方法、免疫學(xué)方法和質(zhì)譜技術(shù)共同列為最主要的三大生化檢測(cè)方法,越來(lái)越多的生化項(xiàng)目正逐漸使用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行檢測(cè),目前在生化檢測(cè)方面已開(kāi)展較為成熟的項(xiàng)目有:類(lèi)固醇激素檢測(cè)、營(yíng)養(yǎng)成分檢測(cè)、毒素檢測(cè)、臨床用藥效果監(jiān)測(cè)等,內(nèi)分泌科中許多類(lèi)固醇激素分泌濃度較低,相比于傳統(tǒng)免疫法檢測(cè),液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LCMS/MS)具有標(biāo)本需求量低,高特異性等優(yōu)點(diǎn),近幾年國(guó)外許多臨床檢測(cè)中心已將質(zhì)譜技術(shù)列為類(lèi)固醇檢測(cè)的首要方法,隨著質(zhì)譜技術(shù)的不斷發(fā)展完善,質(zhì)譜技術(shù)也將成為生化檢測(cè)領(lǐng)域的發(fā)展方向[11-12]。

    5 小結(jié)

    綜上所述,VITEK MS質(zhì)譜儀經(jīng)過(guò)多年快速的發(fā)展技術(shù)已經(jīng)相當(dāng)成熟,相比于傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)優(yōu)勢(shì)明顯,樣本需求量少,操作簡(jiǎn)單明了,高特異性質(zhì)譜圖所得鑒定結(jié)果快速準(zhǔn)確,低成本能為醫(yī)院帶來(lái)更好的經(jīng)濟(jì)效益。隨著質(zhì)譜技術(shù)的不斷發(fā)展,質(zhì)譜技術(shù)今后會(huì)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域和高新技術(shù)科研中得到更廣泛的應(yīng)用[13]。

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