不同產(chǎn)地苦蕎的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究

賓 婕 張 郴 晏 通 胡建林

1.紅河衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，云南 紅河 661199；2.昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650500

苦蕎[Fagopyrumtartaricum(Linn)Gaench]屬蓼科蕎麥屬雙子葉植物，多產(chǎn)于云貴高原、黃土高原兩地[1]。其根、莖、葉、花、種子及籽殼中都含有大量黃酮類化合物，如蘆丁、槲皮素、肌醇。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)都證實(shí)苦蕎具有降血糖、降血脂、降尿糖、防便秘等功效[2-3]，被權(quán)威專家稱為“三降食品”和“21 世紀(jì)人類的健康食品”。因此苦蕎中蘆丁、槲皮素及肌醇含量是評(píng)價(jià)苦蕎功能性優(yōu)劣的重要指標(biāo)之一。此外，苦蕎中蛋白質(zhì)含量也較高，有極高的營養(yǎng)和醫(yī)藥價(jià)值[4]。蕎麥蛋白除能顯著降低血液膽固醇濃度，其效果優(yōu)于大豆蛋白質(zhì)[5]，還具有抗衰老、抑制大腸癌的發(fā)生等作用。隨著其臨床研究和應(yīng)用越來越廣泛，制訂苦蕎的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)迫在眉睫。由于水分過多會(huì)導(dǎo)致霉變，引入安全性問題，且影響食藥價(jià)值。有效成分的含量多少也直接影響療效。且有專家提出：重金屬、農(nóng)藥殘留量檢查是中藥材走向世界，創(chuàng)立綠色中藥名牌產(chǎn)品的中藥標(biāo)志之一[6]。為此，本試驗(yàn)對(duì)苦蕎中有效成分進(jìn)行測定，及對(duì)水分，浸出物，重金屬、砷鹽和農(nóng)藥殘留進(jìn)行了檢查，旨在為制訂苦蕎的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-2010型高效液相色譜儀(包括四元梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、紫外檢測器和蒸發(fā)光散射檢測器，日本島津)，ODS柱(4.6 mm×150 mm，5μm，島津)， Luna C18柱(4.6 mm×150 mm, 3μm，Phenomenex公司)，SK3200H超聲提取器(上海儀器制造廠)，CP-224S電子天平(德國賽多利斯)。

1.2 材料 甲醇(色譜純，美國TEDIA天地試劑公司)，乙腈(色譜純，美國Mallinckrodt Baker公司)，水(娃哈哈飲用純凈水)，其余試劑均為分析純。蘆丁(批號(hào)：09072231)、槲皮素(批號(hào)：09120411)對(duì)照品購自上海同田生物技術(shù)有限公司，肌醇對(duì)照品(純度>98%，鼎瑞化工(上海)有限公司)?？嗍w樣品分別來自云南和四川。

2 方法與結(jié)果

為了對(duì)苦蕎的內(nèi)在質(zhì)量有個(gè)全面的認(rèn)識(shí)，分別對(duì)產(chǎn)自于云南及四川的16個(gè)樣品進(jìn)行了系統(tǒng)性研究，方便對(duì)我們的生產(chǎn)使用提供一定的參考依據(jù)。

2.1 蘆丁、槲皮素、肌醇的含量測定

2.1.1 色譜條件

2.1.1.1 蘆丁與槲皮素 島津ODS柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，以乙腈-水(含2%的冰醋酸)為流動(dòng)相，洗脫梯度為：0～18 min，乙腈濃度17%～40%，流速：1 mL/min，柱溫：25 ℃，檢測波長：360 nm。

2.1.1.2 肌醇 HPLC：甲醇- 水(含0.1%的冰醋酸)為流動(dòng)相， 洗脫梯度為：0～5 min，甲醇濃度10%～30%，色譜柱：Luna C18柱(4.6 mm×150 mm, 3μm)，流速：1 mL/min，進(jìn)樣量：6 μL，室溫操作。ELSD: 漂移0；管溫度5 ℃，載氣壓力40 psi。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備

2.1.2.1 蘆丁與槲皮素 精密稱取蘆丁對(duì)照品4.6 mg，槲皮素對(duì)照品4.0 mg，分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，再分別取1 mL至10 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得蘆丁和槲皮素對(duì)照品溶液濃度分別為0.046 mg/mL和0.04 mg/mL。

2.1.2.2 肌醇 精密稱取肌醇對(duì)照品6.7 mg置于25 mL容量瓶中，用超純水溶解并定容至刻度，搖勻，再精密移取0.5 mL至10 mL的容量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液濃度為13.4 μg/mL。進(jìn)樣前取適量溶液用0.22 μm微孔濾膜過濾。

2.1.3 供試品溶液的配制

2.1.3.1 蘆丁供試品溶液的制備 取苦蕎粉末(過60目篩)約100 mg，精密稱定，置于25 mL容量瓶中，加入80%乙醇5 mL，在常溫下超聲(59 KHz)提取30 min，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。進(jìn)樣前取適量溶液用0.45 μm微孔濾膜過濾。

2.1.3.2 槲皮素供試品溶液的制備 取苦蕎粉末(過60目篩)約100 mg，精密稱定，置于25 mL容量瓶中，加入50%乙醇4 mL，在常溫下超聲(59KHz)提取30 min，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。進(jìn)樣前取適量溶液用0.45 μm微孔濾膜過濾。

2.1.3.3 肌醇供試品溶液的制備 取苦蕎粉末(過60目篩)約100 mg，精密稱定，置于25 mL容量瓶中，加入40%甲醇溶液4 mL，在常溫下超聲提取20 min，用相應(yīng)的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。進(jìn)樣前取適量溶液用0.22 μm微孔濾膜過濾。

分別取10 μL進(jìn)高效液相色譜儀，記錄峰面積，由線性方程計(jì)算各自含量，結(jié)果見表1。

2.1.4 線性關(guān)系考察

2.1.4.1 蘆丁與槲皮素 分別精密吸取2.1.1項(xiàng)下的蘆丁和槲皮素對(duì)照品溶液0.5、1、5、10、15、20、25 μL和0.5、1、5、10、15 μL, 注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積，以進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)，色譜峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，蘆丁和槲皮素的回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為：Y= 1703415X+9229.6,r=0.9996；Y=3833824X-11994.2,r= 0.9999。

2.1.4.2 肌醇 精密吸取2.1.2項(xiàng)下的肌醇對(duì)照品溶液2、4、6、8、10 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖， 測定其峰面積，以進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)，色譜峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得：Y=156739X+43.2,r=0.9997。

2.1.5 樣品含量測定 取不同來源的苦蕎粉末適量，精密稱定，分別按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，分別記錄蘆丁、槲皮素及肌醇的峰面積，由線性方程計(jì)算各自含量，測定結(jié)果見表1。

2.2 水分的測定 按照《中國藥典》(2020年版)中水分測定法(四部通則0832)第二法[7]，根據(jù)減失的重量，計(jì)算苦蕎樣品含水量(%)，結(jié)果見表1。

2.3 浸出物的測定 按照《中國藥典》(2020年版)中浸出物測定法(四部通則2201)[7]，分別計(jì)算苦蕎樣品中水溶性浸出物及醇溶性浸出物的含量(%)，結(jié)果見表1。

2.4 重金屬、砷鹽殘留 按照《中國藥典》(2020年版)中重金屬檢查法(四部通則0821)[7]第二法檢查重金屬；按砷鹽檢查法(四部通則0822)[7]第二法檢查砷鹽，檢測結(jié)果見表1。

2.5 農(nóng)藥殘留 本試驗(yàn)結(jié)合蕎麥生長期的病害特點(diǎn)和針對(duì)性的用藥，發(fā)現(xiàn)吡蟲啉和多菌靈是種植蕎麥最常用的農(nóng)藥，故本試驗(yàn)對(duì)吡蟲啉和多菌靈進(jìn)行殘留量檢查，用液-質(zhì)聯(lián)用方法進(jìn)行檢測。液相條件：Waters ACQUITY UPLC -MS/MS(API 3200)，色譜柱為ACQUITY UPLC ODS柱(2.1 mm× 100 mm，7 μm)，以乙腈-水為流動(dòng)相梯度洗脫：0～2 min，乙腈濃度為15%，2～6 min，乙腈濃度15%～90%，柱溫30 ℃，流速0.3 mL/min，進(jìn)樣1 μL。質(zhì)譜條件：氣體為高純氮?dú)?，離子源：電噴霧離子源，掃描方式：正離子掃描，檢測方式：多重反應(yīng)監(jiān)測，電噴霧電壓：5500 V，霧化氣壓力：0.414 MPa，輔助加熱氣壓力：0.345 MPa，氣簾氣壓力：0.069 MPa，離子源溫度：600 ℃。

對(duì)照品和供試品的定性結(jié)果見圖1，檢測結(jié)果見表1。

A

BA.對(duì)照品；B.供試品；1.多菌靈；2.吡蟲啉圖1 定性離子對(duì)色譜圖

(n=3)

3 討論

研究考察了16個(gè)產(chǎn)地苦蕎樣品的有效成分，其中蘆丁含量最高，在1.02%～2.55%，肌醇含量最低，在0.15%～0.51%；且不同產(chǎn)地苦蕎中蘆丁、槲皮素及肌醇含量有一定差異，說明產(chǎn)地的氣候、土壤特性等生態(tài)因子及產(chǎn)地加工方式對(duì)藥材質(zhì)量影響很大。同產(chǎn)地的苦蕎，因加工方式不同含量也有明顯差異。根據(jù)測定情況和一般養(yǎng)護(hù)經(jīng)驗(yàn)，規(guī)定本品水分不得過10%。浸出物含量反映了植物體內(nèi)生物活性物質(zhì)的積累情況，與藥材質(zhì)量密切相關(guān)[8]。按照測定結(jié)果適當(dāng)下浮來設(shè)定指標(biāo)限度比較符合實(shí)際情況，規(guī)定本品水溶性浸出物不得少于10%，醇溶性浸出物不得少于5%。

按照國際市場對(duì)無公害綠色藥材的要求，對(duì)不同產(chǎn)地的苦蕎進(jìn)行了重金屬、砷鹽及農(nóng)藥殘留檢測，結(jié)果表明，苦蕎樣品符合《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》[9](中華人民共和國對(duì)外貿(mào)易經(jīng)濟(jì)合作部)規(guī)定，及中國藥品生物制品檢定所《中藥中鉛、鎘、砷、汞測定方法起草說明》[10]中提出的四元素的限量標(biāo)準(zhǔn)，即鉛不高于5 ppm，鎘不高于0.5 ppm，砷不高于2 ppm，汞不高于0.2 ppm。

本實(shí)險(xiǎn)對(duì)云南及四川地區(qū)苦蕎的蘆丁、槲皮素、肌醇含量、水分、浸出物、重金屬、農(nóng)殘進(jìn)行測定，為科學(xué)評(píng)價(jià)苦蕎內(nèi)在質(zhì)量積累了科學(xué)資料，提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。