特異性靶抗原的抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體的臨床價值研究*

溫 陽，翟建昭，胡 靜，黃卓春，李貴星，唐鴻鵠，蘇林沖，武永康△

(1.四川大學(xué)華西醫(yī)院實驗醫(yī)學(xué)科，四川成都 610041；2.四川大學(xué)華西醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，四川成都 610041；3.湖北民族大學(xué)附屬民大醫(yī)院風(fēng)濕免疫科/風(fēng)濕性疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點實驗室,湖北恩施 445000)

抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(ANCA)是一組以人中性粒細(xì)胞胞質(zhì)成分為靶抗原的自身抗體[1]。ANCA推薦采用間接免疫熒光法檢測，觀察結(jié)果可顯示出不同的熒光模型[2]，之后通常采用中性粒細(xì)胞中的蛋白純化后作為靶抗原，通過免疫法檢測特異性靶抗原結(jié)合的ANCA[3]。ANCA對應(yīng)的靶抗原較多，主要包括髓過氧化物酶(MPO)、蛋白酶3(PR3)、乳鐵蛋白(LF)、殺菌/通透性增加蛋白(BPI)及彈性蛋白酶(EL)等[4-6]。對于上述具體的靶抗原抗體的臨床價值研究不多，為了研究特異性靶抗原ANCA與臨床疾病的關(guān)系，本課題組回顧性分析近2年四川大學(xué)華西醫(yī)院不同特異性靶抗原的ANCA陽性患者與疾病種類的相關(guān)性，為指導(dǎo)臨床疾病的診斷和治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集四川大學(xué)華西醫(yī)院2017年1月至2019年1月ELISA檢測不同靶抗原ANCA結(jié)果為陽性的患者652例(無重復(fù)病例)作為研究對象，男女比例為0.64∶1.00，平均年齡(55.50±17.52)歲。男性患者發(fā)病年齡1～94歲，平均(59.30±16.59)歲；女性患者發(fā)病年齡13～91歲，平均(53.00±17.69)歲。收集患者最終診斷進行分析。

1.2儀器與試劑 ANCA相關(guān)靶抗原[MPO、PR3、EL、LF、BPI、組織蛋白酶G(Cat-G)]抗體檢測采用ELISA，試劑盒購自德國Euroimmun公司,儀器型號為：EUROIMMUN Analyzer 1。本實驗室該檢測項目已通過美國病理協(xié)會認(rèn)可，檢測項目使用德國Euroimmun公司質(zhì)控品，每天做陰陽性質(zhì)控，質(zhì)控結(jié)果均在控，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性及可靠性。

1.3方法 收集652例ANCA陽性患者的疾病信息及不同靶抗原抗體在652例ANCA陽性患者中的占比，篩選出單獨靶抗原抗體陽性的患者，并將其分為自身免疫性疾病、非自身免疫性疾病及臨床癥狀三大類，統(tǒng)計主要疾病的占比及并發(fā)癥發(fā)病情況。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析處理。計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，若樣本量小于40，采用Fisher確切概率法計算P值。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1ANCA陽性對應(yīng)的單個靶抗原抗體的單獨陽性率情況 652例ANCA陽性患者對應(yīng)的靶抗原抗體單獨陽性率(即僅該靶抗原抗體陽性，其他靶抗原抗體均為陰性)分別為：抗MPO抗體為52.91%(345/652)，抗PR3抗體為8.59%(56/652)，抗BPI抗體為4.14%(27/652)，抗EL抗體為3.37%(22/652)，抗LF抗體為4.91%(32/652)，抗Cat-G抗體為0.77%(5/652)。由于抗Cat-G抗體陽性率低，容易引起偏差，故不做進一步分析。

2.2抗MPO自身免疫性疾病與自身免疫性疾病并發(fā)癥百分率比較 在345例單獨抗MPO抗體陽性病例中，自身免疫性疾病239例，占69.28%(239/345)，非自身免疫性疾病89例，占25.80%(89/345)，前者明顯高于后者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=130.75，P<0.05)。僅有臨床癥狀未確診的患者占4.93%(17/345)。在自身免疫性疾病中，ANCA相關(guān)性血管炎占88.28%(211/239)，ANCA相關(guān)性腎炎占12.97%(31/239)，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)占6.69%(16/239)(由于疾病有重疊，所占比例之和大于100.00%)，ANCA相關(guān)性血管炎占比明顯高于ANCA相關(guān)性腎炎，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=271.17，P<0.05)。自身免疫性疾病所引起的并發(fā)癥以腎功能不全占53.14%(127/239)，肺部感染占48.54%(116/239)，腎性貧血占28.45%(68/239)，腎性骨病和肺間質(zhì)纖維化占比較少，見表1。

表1 抗MPO自身免疫性疾病與自身免疫性疾病并發(fā)癥百分率比較

2.3抗PR3自身免疫性疾病與自身免疫性疾病并發(fā)癥百分率比較 在56例單獨抗PR3抗體陽性病例中，自身免疫性疾病29例，占51.79%(29/56)，非自身免疫性疾病21例，占37.50%(21/56)，二者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.312，P=0.128)。僅有臨床癥狀未確診患者占10.71%(6/56)。在自身免疫性疾病中以ANCA相關(guān)性血管炎[75.86%(22/29)]和結(jié)締組織病[13.79%(4/29)]為主，周圍神經(jīng)炎占6.90%(2/29)，ANCA相關(guān)性血管炎比結(jié)締組織病等更具有診斷價值，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=20.147，P<0.05)。自身免疫性疾病所引起的并發(fā)癥中，肺部感染和腎功能不全分別占34.48%(10/29)和10.34%(3/29)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.569，P=0.056)，少部分患者表現(xiàn)為腎性貧血和風(fēng)濕性心臟病，見表2。

表2 抗PR3自身免疫性疾病與自身免疫性疾病并發(fā)癥百分率比較

2.4抗BPI自身免疫性疾病與自身免疫性疾病并發(fā)癥百分率比較 在27例單獨抗BPI抗體陽性病例中，自身免疫性疾病9例，占33.33%(9/27)，非自身免疫性疾病15例，占55.56%(15/27)，二者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.17)，僅有臨床癥狀未確診患者占11.11%(3/27)。在自身免疫性疾病中，ANCA相關(guān)性血管炎占66.67%(6/9)，而其他疾病(皮肌炎和自身免疫性肝炎)只有3例?？笲PI抗體在診斷ANCA相關(guān)性血管炎中相對于其他自身免疫性疾病并不具有明顯優(yōu)勢，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.153)。自身免疫性疾病所引起的并發(fā)癥中，主要為肺部感染和肺間質(zhì)纖維化等，見表3。

表3 抗BPI自身免疫性疾病與自身免疫性疾病并發(fā)癥百分率比較

2.5抗LF自身免疫性疾病與自身免疫性疾病并發(fā)癥百分率比較 在32例單獨抗LF抗體陽性患者中，以自身免疫性疾病為主，高達81.25%(26/32)，非自身免疫性疾病占12.50%(4/32)，前者明顯高于后者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。僅有臨床癥狀而未確診患者占6.25%(2/32)。自身免疫性疾病患者中，SLE占92.31%(24/26)，狼瘡性腎炎占73.08%(19/26)，顯示出較強的相關(guān)性?？筁F抗體對診斷SLE 及狼瘡性腎炎具有重要提示價值。自身免疫性疾病引起的并發(fā)癥中，以肺部感染[26.92%(7/26)]、腎功能不全[7.69%(2/26)]和腎性貧血[7.69%(2/26)]為主，肺部感染相對于腎功能不全等其他疾病不具明顯優(yōu)勢，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.359,P=0.067)，見表4。

表4 抗LF自身免疫性疾病與自身免疫性疾病并發(fā)癥百分率比較

2.6抗EL自身免疫性疾病與自身免疫性疾病并發(fā)癥百分率比較 在22例單獨抗EL抗體陽性患者中，自身免疫性疾病13例，占59.09%(13/22)，非自身免疫性疾病9例，占40.91%(9/22)，二者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.228)。自身免疫性疾病患者中所對應(yīng)的疾病特異度不高，ANCA相關(guān)性血管炎、SLE、肺間質(zhì)纖維化等均占30.77%(4/13)。自身免疫性疾病引起的并發(fā)癥中以腎功能不全為主，抗EL抗體疾病預(yù)示價值較差，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=1.00)，見表5。

表5 抗EL自身免疫性疾病與自身免疫性疾病并發(fā)癥百分率比較

3 討 論

ANCA是一組以中性粒細(xì)胞胞質(zhì)成分為特異抗原的自身抗體，可激活人中性粒細(xì)胞并導(dǎo)致脫顆粒反應(yīng)，使中性粒細(xì)胞釋放大量有害的蛋白水解酶和氧自由基，從而導(dǎo)致小血管壁損害，導(dǎo)致血管炎發(fā)生。因此，ANCA是一種敏感且特異的系統(tǒng)性血管炎標(biāo)志物[7]。本研究通過檢測ANCA相對應(yīng)的特異靶抗原抗體來診斷疾病和判斷預(yù)后[8]。臨床實踐中通過ELISA檢測相應(yīng)的靶抗原抗體水平。本研究將抗MPO抗體、抗PR3抗體、抗BPI抗體、抗EL抗體、抗LF抗體等納入研究并進行討論。

在ANCA相關(guān)靶抗原抗體中，對抗MPO抗體和抗PR3抗體的研究相對較多[9]。抗MPO抗體和抗PR3抗體在靶抗原抗體中占比較多，這與前期大量研究相一致。有研究證實，MPO活性是評價中性粒細(xì)胞在組織中浸潤程度的可靠指標(biāo)，但其特異性比較差，在很多疾病中都可檢出，如：心血管疾病、炎癥性疾病、神經(jīng)退行性病變、腎臟疾病和免疫介導(dǎo)性疾病等[10]。在抗MPO抗體陽性患者的疾病構(gòu)成比例中，以自身免疫性疾病為主，占69.28%。有研究表明，抗MPO抗體是ANCA相關(guān)性血管炎的重要標(biāo)志物[11]。在抗MPO抗體陽性患者中，以ANCA相關(guān)性血管炎為主，占88.28%。由于抗MPO抗體特異性差，在很多疾病中均有表達。本研究中當(dāng)抗MPO抗體單獨陽性時，ANCA相關(guān)性腎炎陽性率為12.97%，SLE陽性率均為6.69%?？筂PO抗體陽性主要預(yù)示ANCA相關(guān)性血管炎，且抗MPO抗體對診斷ANCA中相關(guān)性血管炎的預(yù)示價值明顯高于ANCA相關(guān)性腎炎等，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。本研究還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)抗MPO抗體單獨靶抗原抗體陽性時，在自身免疫性疾病引起的并發(fā)癥中，腎功能不全陽性率為53.14%，肺部感染陽性率為48.54%，并出現(xiàn)腎性貧血和腎性骨病等相關(guān)并發(fā)癥，這與文獻[12-14]報道的結(jié)論一致。

PR3是只存在于中性粒細(xì)胞嗜天青顆粒中的中性絲蛋白酶。有研究表明，抗PR3抗體的特異性較強[15]。本研究中抗PR3抗體陽性患者以ANCA相關(guān)性血管炎為主。MARTIN等[16]研究小組通過一系列研究證實了其致病機制，也與本研究結(jié)果相互印證?？筆R3抗體對ANCA相關(guān)性血管炎的預(yù)示價值高于結(jié)締組織病等其他疾病，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。本研究結(jié)果顯示，當(dāng)抗PR3抗體陽性時，肺部疾病和腎臟疾病的陽性率也較高。以上結(jié)果提示，當(dāng)抗PR3抗體陽性時，應(yīng)關(guān)注ANCA相關(guān)性血管炎及肺和腎的損傷，盡早治療和預(yù)防。

抗BPI抗體是ANCA特異性靶抗原抗體。有研究表明，抗BPI抗體存在于囊性纖維化、炎癥性腸病、血管炎和原發(fā)性硬化性膽管炎中，其與炎癥性疾病活動增加和器官損害密切相關(guān)[17]。自身免疫性疾病以ANCA相關(guān)性血管炎為主，陽性率為66.67%，但該抗體在診斷ANCA相關(guān)性血管炎中相對于其他自身免疫性疾病并不具有明顯優(yōu)勢，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)?？笲PI抗體陽性患者并發(fā)癥常以累及肺部為主。一直以來，抗BPI抗體的致病機制尚不清楚，直到最近TAKEDA等[18]研究發(fā)現(xiàn)，抗BPI抗體可影響血管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的形成，并可能作為致病性自身抗體參與系統(tǒng)性血管炎的發(fā)生和發(fā)展。但抗BPI抗體是一種不常見的ANCA，目前有研究表明BPI-ANCA與肺部疾病具有相關(guān)性，但其中的致病機制還需要進一步深入研究[18]。

LF是中性粒細(xì)胞次級顆粒中水平最豐富的鐵結(jié)合蛋白，在發(fā)生急性炎癥性疾病時，循環(huán)中的EL水平升高。前期有研究發(fā)現(xiàn)，抗LF抗體與SLE的發(fā)生和發(fā)展有明顯相關(guān)性[19]。本研究中抗LF抗體在診斷SLE及狼瘡性腎炎時具有重要提示價值，陽性率分別為92.31%、73.08%。此外，抗LF抗體與肺部感染和腎功能不全的相關(guān)性也值得關(guān)注。

目前抗EL抗體的研究較少，本研究中抗EL抗體陽性時，所對應(yīng)的疾病特異性較差，在自身免疫性疾病中，主要與ANCA相關(guān)性血管炎、SLE、肺間質(zhì)纖維化等相關(guān)。自身免疫性疾病所引起的并發(fā)癥中，主要與肺部疾病和腎臟疾病相關(guān)，如肺部感染、肺間質(zhì)纖維化、腎功能不全等。

4 結(jié) 論

總之，ANCA相關(guān)靶抗原抗體主要與ANCA相關(guān)性血管炎有關(guān)，引起的癥狀主要與肺部感染和腎損傷有關(guān)，但不同的抗體所對應(yīng)的疾病不一樣，對于臨床疾病的診斷有提示價值。