全自動陰道分泌物檢測工作站性能驗證方案的建立及應(yīng)用

趙運轉(zhuǎn)，趙 暉，宋 蓓，劉 揚，張國軍

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院實驗診斷中心，北京 100070)

保證檢驗結(jié)果的質(zhì)量是實驗室的立命之本。按照《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》[1]和ISO15189《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》[2]規(guī)定，在開展新的檢測項目，更換檢測系統(tǒng)或改變試劑盒廠商時，實驗室需要對其相關(guān)方法學(xué)分析性能予以驗證。因此，本實驗室需要對新引進的HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站進行性能驗證，以確保其各項指標(biāo)滿足廠家聲明的分析性能或國際公認(rèn)的質(zhì)量目標(biāo)后再用于常規(guī)檢測，滿足臨床需求，但目前國內(nèi)少見該類檢測系統(tǒng)性能驗證的相關(guān)文獻(xiàn)，也沒有規(guī)范化文件可供參考。本實驗室根據(jù)CNAS-CL02-A02：2018《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在體液學(xué)檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用說明》[3]要求、中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(YY/T-0996-2015)尿液有形成分分析儀(數(shù)字成像自動識別)[4]、國家干化學(xué)尿液分析儀行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 0475-2011[5]、定性測定評價指南中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：WS/T-505-2017[6],參考本中心全自動尿液干化學(xué)分析儀流水線性能驗證方案及關(guān)于全自動尿液分析儀或其他全自動分析儀性能驗證相關(guān)文獻(xiàn)[7-11]，結(jié)合儀器特性及實際情況從形態(tài)學(xué)和酶學(xué)2個方面進行驗證，建立了一套全面、簡便、實用的性能驗證方案，希望能為其他實驗室對此類儀器的性能驗證提供參考。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 陰道分泌物標(biāo)本來自臨床用于陰道分泌物檢測的標(biāo)本，包括陰性和陽性標(biāo)本。

1.2儀器與試劑 儀器為青島華晶生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站，試劑為儀器配套試劑及陰性和陽性質(zhì)控品，所有試劑均在有效期內(nèi)，且未受污染。采用日本Olympus CH 型光學(xué)顯微鏡對分泌物進行觀察。

1.3方法 本研究參照人工鏡檢相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[3-6]和文獻(xiàn)[7-11]，結(jié)合實際情況，對HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站的鏡檢識別率、假陰性率、重復(fù)性、攜帶污染率、干化學(xué)檢出限、干化學(xué)6項陰性和陽性符合率及室間比對結(jié)果進行檢驗，完成對陰道分泌物檢測工作站形態(tài)學(xué)部分和功能學(xué)部分各指標(biāo)的驗證。

1.3.1儀器鏡檢識別率驗證 選取陰道分泌物標(biāo)本100例(陽性標(biāo)本不低于50%)，儀器檢測后，回收儀器鏡檢玻片，交由人工嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[12]進行鏡檢。統(tǒng)計儀器鏡檢結(jié)果與人工鏡檢結(jié)果的符合率。觀察項目包括滴蟲、真菌、上皮細(xì)胞、白細(xì)胞、乳酸桿菌、線索細(xì)胞、清潔度。評價標(biāo)準(zhǔn)：儀器鏡檢結(jié)果與人工鏡檢結(jié)果的滴蟲總符合率、真菌總符合率、線索細(xì)胞總符合率、清潔度符合率均≥90%，假陰性率均≤5%。

1.3.2陰道分泌物檢測工作站重復(fù)性驗證 將多例患者陰道分泌物標(biāo)本[包括真菌陽性及細(xì)菌性陰道病(BV)陽性患者標(biāo)本]充分混勻，分裝到20個標(biāo)本管中，連續(xù)測試20次。判斷儀器鏡檢結(jié)果及干化學(xué)結(jié)果的重復(fù)性。鏡檢結(jié)果重復(fù)性評價標(biāo)準(zhǔn)：相關(guān)病原體(真菌、滴蟲、線索細(xì)胞)的檢出，重復(fù)性結(jié)果應(yīng)無差異。其他有形成分(上皮細(xì)胞、乳酸桿菌、白細(xì)胞)的檢出，重復(fù)性結(jié)果應(yīng)無差異或浮動不超過一個梯度(近似)，且陰性不可為陽性，陽性不可為陰性。干化學(xué)指標(biāo)重復(fù)性評價標(biāo)準(zhǔn)：結(jié)果應(yīng)無差異。酸堿度重復(fù)性結(jié)果變異系數(shù)(CV)≤5%。

1.3.3攜帶污染率驗證 10例隨機標(biāo)本與空白標(biāo)本(稀釋液)交替做，記錄結(jié)果。評價標(biāo)準(zhǔn)：空白標(biāo)本檢測結(jié)果應(yīng)不被污染。

1.3.4干化學(xué)檢出限驗證 將陰道炎六聯(lián)檢試劑盒的陽性質(zhì)控品進行稀釋，終濃度等于或略高于陰道炎六聯(lián)檢試劑盒所描述的靈敏度，進行六聯(lián)檢測卡靈敏度測定，重復(fù)4次。評價標(biāo)準(zhǔn)：陽性質(zhì)控品稀釋至說明書要求的檢出限后，檢測卡應(yīng)顯色或顏色較淺。

1.3.5干化學(xué)6項陰性和陽性符合率驗證 根據(jù)陰道炎六聯(lián)檢質(zhì)控品試劑盒說明書要求，在開機穩(wěn)定后進行陰性和陽性質(zhì)控品檢測，各檢測20次，評價每個結(jié)果之間的差異。評價標(biāo)準(zhǔn)：陰性和陽性質(zhì)控品檢測結(jié)果均應(yīng)無差異。

1.3.6室間比對結(jié)果評價 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院實驗診斷中心與北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院檢驗科2臺陰道分泌物檢測工作站型號相同，2個醫(yī)院在同一天內(nèi)檢測10例(陽性標(biāo)本≥50%)患者陰道分泌物標(biāo)本，記錄檢測結(jié)果并評價檢測結(jié)果的一致性。評價標(biāo)準(zhǔn)：真菌、滴蟲、線索細(xì)胞等相關(guān)病原體及其相應(yīng)的干化學(xué)指標(biāo)應(yīng)完全相符，其他項目上下浮動應(yīng)不超過一個梯度。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析處理。計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，采用χ2檢驗進行比較。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1儀器鏡檢識別率驗證結(jié)果 各項指標(biāo)符合率及假陰性率見表1。滴蟲總符合率為100%，假陰性率為0%；真菌總符合率為99%，假陰性率為1%；線索細(xì)胞總符合率為97%，假陰性率為0%；清潔度總符合率為100%，假陰性率為0%。儀器鏡檢識別率驗證合格。

2.2陰道分泌物檢測工作站重復(fù)性驗證結(jié)果 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站重復(fù)性驗證結(jié)果見表2。儀器鏡檢中真菌、滴蟲、線索細(xì)胞等相關(guān)病原體結(jié)果無差異；清潔度及乳酸桿菌結(jié)果無差異；白細(xì)胞、上皮細(xì)胞重復(fù)儀器鏡檢結(jié)果近似，浮動不超過一個梯度。干化學(xué)指標(biāo)重復(fù)性無差異；酸堿度結(jié)果隨滴加稀釋液的量略有浮動，CV=1.58%<5%。重復(fù)性驗證結(jié)果合格。

2.3攜帶污染驗證結(jié)果 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站攜帶污染驗證結(jié)果見表3。經(jīng)驗證陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本均不會影響下一個空白標(biāo)本的結(jié)果，10例空白標(biāo)本結(jié)果完全一致，攜帶污染驗證合格。

表1 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站鏡檢識別率驗證結(jié)果

表2 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站重復(fù)性驗證結(jié)果

續(xù)表2 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站重復(fù)性驗證結(jié)果

表3 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站攜帶污染率驗證結(jié)果

2.4干化學(xué)檢出限驗證結(jié)果 將干化學(xué)4種酶及過氧化氫的陽性質(zhì)控液分別稀釋到各自的檢出限附近進行檢出限驗證，結(jié)果見表4。4種酶及過氧化氫質(zhì)控品濃度在等于或略高于臨界值時均顯色，干化學(xué)檢出限驗證合格。

2.5干化學(xué)陰性和陽性符合率驗證結(jié)果 六聯(lián)檢檢測卡檢測陰性和陽性質(zhì)控品，各檢測20次，6個項目的陰性和陽性符合率均為100%。

2.6室間比對結(jié)果 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站室間比對結(jié)果見表5。結(jié)果顯示，10例標(biāo)本中，真菌、滴蟲、線索細(xì)胞，以及干化學(xué)指標(biāo)過氧化氫、唾液酸苷酶、 白細(xì)胞酯酶、乙酰氨基β-半乳糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶結(jié)果差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；清潔度、上皮細(xì)胞、白細(xì)胞、乳酸桿菌上下浮動不超過一個梯度；pH值經(jīng)配對t檢驗，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-0.896,P=0.394)。室間比對結(jié)果合格。

表4 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站干化學(xué)檢出限驗證結(jié)果

表5 HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站室間比對結(jié)果(n=10)

3 討 論

陰道分泌物檢測是婦科術(shù)前評估、孕期檢查及陰道炎診斷常用的檢測項目[13]。陰道微生態(tài)評價可以更好地評估陰道的微環(huán)境及治療效果，更好地為臨床提供參考[14-15]。全自動陰道分泌物檢測儀器包括形態(tài)學(xué)和功能學(xué)2個部分，可以全面評估陰道微生態(tài)，取代人工鏡檢，降低由于經(jīng)驗原因?qū)е碌娜藛T之間的差異，還可以檢測干化學(xué)指標(biāo)，輔助診斷，提高檢測的準(zhǔn)確性，自動化的檢測設(shè)備還可提高檢測效率。目前，市場上該類儀器多在標(biāo)本量較大的大型醫(yī)院應(yīng)用，品牌較多，形態(tài)學(xué)部分檢測原理不同，有數(shù)字成像自動識別法和流式細(xì)胞法等；功能學(xué)部分即干化學(xué)法檢測，原理大致相同。對該類儀器的性能評價包括形態(tài)學(xué)評價和功能學(xué)評價2個部分。各項指標(biāo)均應(yīng)符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求，保證該系統(tǒng)檢測的可行性。本研究對HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站7個形態(tài)學(xué)項目(滴蟲、真菌、線索細(xì)胞、上皮細(xì)胞、白細(xì)胞、乳酸桿菌、清潔度)的儀器鏡檢識別率、重復(fù)性、攜帶污染率和6個干化學(xué)項目(pH值、脯氨酸氨基肽酶、乙酰氨基β-半乳糖苷酶、白細(xì)胞酯酶、唾液酸苷酶、過氧化氫)的重復(fù)性、檢出限、攜帶污染率、陰性符合率、陽性符合率等性能進行了評價，并與東直門醫(yī)院檢驗科同款儀器進行室間比對，評價HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站共13個項目的一致性。各項目指標(biāo)均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。

形態(tài)學(xué)部分參考了尿液有形成分分析儀(數(shù)字成像自動識別)中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(YY/T-0996-2015)，包括識別率、重復(fù)性、攜帶污染率，但略有不同。因為陰道分泌物檢測主要側(cè)重病原體的檢出，如真菌、滴蟲、線索細(xì)胞，而不是紅細(xì)胞和白細(xì)胞。因此，沒有做白細(xì)胞和紅細(xì)胞的檢出限評估，因為陰道分泌物檢測屬于定性檢測而不是定量分析,沒有做病原體檢出限的評估。由于沒有病原體的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控品，所以無法評估穩(wěn)定性，但標(biāo)本一般均可在半小時內(nèi)完成檢測，而且數(shù)十日內(nèi)100例臨床標(biāo)本儀器鏡檢與人工鏡檢結(jié)果比對的高符合率可以間接證明該儀器形態(tài)學(xué)檢測部分性能的穩(wěn)定性。本次性能評估試驗中識別率評估的評價標(biāo)準(zhǔn)為90%，高于中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(YY/T-0996-2015)的尿液有形成分分析儀(數(shù)字成像自動識別)對尿液中識別率要求最高的白細(xì)胞評估標(biāo)準(zhǔn)(≥80%)。由于清潔度Ⅰ和Ⅱ表示正常，Ⅲ和Ⅳ表示陰道炎癥程度，所以將Ⅰ和Ⅱ合并，Ⅲ和Ⅳ合并。將陰道清潔度分為正常和炎癥進行評估。由于是定性項目，對重復(fù)性的評估無法執(zhí)行中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(YY/T-0996-2015)的尿液有形成分分析儀(數(shù)字成像自動識別)標(biāo)準(zhǔn)，只需保證病原體(真菌、滴蟲、線索細(xì)胞)的檢出無差異，其他有形成分(上皮細(xì)胞、乳酸桿菌、白細(xì)胞)的重復(fù)性結(jié)果應(yīng)無差異或上下浮動不超過一個梯度即可。對于功能學(xué)評價部分，參考國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 0475-2011文件，包括重復(fù)性、攜帶污染率、檢出限、陰性符合率和陽性符合率，與尿干化學(xué)法性能評估相似，性能指標(biāo)均符合要求。

由于沒有室間質(zhì)評，因此，需要通過室間比對評估實驗室結(jié)果的準(zhǔn)確性。與東直門醫(yī)院進行比對的10例標(biāo)本中有3例真菌陽性標(biāo)本和3例線索細(xì)胞陽性標(biāo)本。標(biāo)本由天壇醫(yī)院先檢測，然后1 h內(nèi)低溫轉(zhuǎn)運至東直門醫(yī)院檢測，保證從標(biāo)本采集到檢測結(jié)束的時間不超過4 h，并注意在比對試驗前應(yīng)加足稀釋液，保證室間比對的標(biāo)本一致。

4 結(jié) 論

本研究初步建立了一套用于評估全自動陰道分泌物檢測工作站性能驗證的方案。HJ-500全自動陰道分泌物檢測工作站7個形態(tài)學(xué)項目(滴蟲、真菌、線索細(xì)胞、上皮細(xì)胞、白細(xì)胞、乳酸桿菌、清潔度) 的儀器鏡檢識別率、重復(fù)性、攜帶污染率及6 個干化學(xué)項目(pH值、脯氨酸氨基肽酶、乙酰氨基β-半乳糖苷酶、白細(xì)胞酯酶、唾液酸苷酶、過氧化氫)的重復(fù)性、攜帶污染率、檢出限、陰性符合率、陽性符合率等性能均符合要求。