HPLC/MS/MS 法檢測人全血中的氟胺酮

謝明清 林樹海 陳永鋒

（東莞市公安司法鑒定中心，廣東 東莞523126）

近兩年，公安部門在偵辦涉毒案件中，屢屢查獲一種含有氟胺酮的無色透明晶體，這種晶體外觀和冰毒極其相似，肉眼無法區(qū)分。國內(nèi)尚無資料記載氟胺酮對人體是否具有類似氯胺酮一樣的危害性，但它的濫用務(wù)必引起人們的警惕。氟胺酮目前不屬于國家管制藥物，這給公安部門辦理這類案件帶來一定的困難。

氟胺酮（F-Ketamine），化學(xué)名稱為α-鄰氟苯基-2-甲胺基-環(huán)己酮，分子結(jié)構(gòu)與氯胺酮高度相似，只是其中的-Cl 基團被-F 所取代。初步藥理實驗表明氟胺酮具有與氯胺酮類似的麻醉活性，是一種新的麻醉活性物質(zhì)［1］。氟胺酮的臨床醫(yī)學(xué)應(yīng)用目前國內(nèi)鮮有記載，對人是否具有毒品的危害性和依賴性還不明確，其藥用價值和對人的作用有待進一步研究。

目前，有關(guān)氟胺酮的檢測方法報道有氣質(zhì)聯(lián)用法［2］，該方法主要針對體外檢材，而生物檢材中氟胺酮的檢測方法暫時未見報道。因此，建立一種快速、可靠的檢測生物體內(nèi)氟胺酮的方法在司法鑒定實踐中具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

AB SCIEX Exion 液相色譜儀/QTRAP4500質(zhì)譜儀；Millipore 超純水儀；渦旋振蕩器；高速離心機；氮吹儀；0.22μm微孔濾膜。

甲醇、乙腈均為LC-MS 級；甲酸、醋酸銨均為HPLC；超純水；氟胺酮標準品（A Chem?tek,USA）。

1.2 儀器條件

色譜條件：BEH C18柱 （2.1mm × 50mm，1.7μm）；流速0.4mL/min；進樣量2μL；洗脫梯度（見表1）。

表1 洗脫梯度

質(zhì)譜條件：ESI源；正離子掃描模式；氣簾氣30psi；碰撞氣medium；噴霧電壓5500v；溫度550℃；噴霧氣55psi；輔助加熱氣55psi；DP/CE電壓（見表2）。

表2 DP/CE電壓

1.3 樣品前處理

取新鮮空白人全血，制成含氟胺酮0.0、0.1、1.0、10.0、100.0、200.0、400.0ng/mL系列濃度的血樣，待處理。

取血樣0.5mL 于試管中，加1mL 乙腈沉淀蛋白，渦旋振蕩5min，超聲10min，高速離心取上清液，0.22μm微孔濾膜過濾后進樣。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動相選擇

考察了甲醇、乙腈、純水、0.1%甲酸水溶液和5mmol/L 醋酸銨水溶液作為流動相對氟胺酮保留時間的影響（見表3）和對峰形（見圖1）的影響。

表3 流動相對保留時間的影響

實驗結(jié)果顯示，用純水作無機相時，氟胺酮的出峰時間相對較長且不穩(wěn)定。用0.1%甲酸水溶液或5mmol/L 醋酸銨水溶液作無機相、甲醇或乙腈作有機相，出峰時間快且穩(wěn)定。綜合考慮各因素，本實驗選擇5mmol/L 醋酸銨溶液和乙腈作流動相。

圖1 人全血中氟胺酮色譜圖（乙腈-5mmol/L醋酸銨水溶液作流動相）

2.2 線性范圍和檢測限

取0.1～400.0ng/mL 序列濃度的血樣，經(jīng)前處理后，以乙腈-5mmol/L 醋酸銨水溶液作流動相，表1 的梯度洗脫，進樣分析。以峰面積對血樣中氟胺酮濃度作標準曲線，得出氟胺酮的線性 方 程 為 y=51895.6x+64569.3， r=0.99967，線性范圍為0.1～200ng/mL，檢出濃度為0.05ng/mL時，S/N＞10時。

2.3 基質(zhì)效應(yīng)、回收率和過程效率

按照 Matuszewski 提出的方法［4］，選用 5 個不同來源的空白基質(zhì)，采用高低2 個濃度點，比較3 個不同Set 條件下的峰面積平均值。其中，Set1 為標準溶液，Set2 為不同來源的基質(zhì)提取后添加，Set3 為不同來源的基質(zhì)提取前添加，則基質(zhì)效應(yīng)（ME）=Set2/Set1，提取回收率（RE）=Set3/Set2，方法過程效率（PE）=Set3/Set1。結(jié)果如表4所示。

表4 基質(zhì)效應(yīng)、回收率和過程效率

從實驗所選的10.0ng/mL和200.0ng/mL 2個濃度點分析，結(jié)果顯示方法提取率高，基質(zhì)效應(yīng)小，完全適應(yīng)司法鑒定實踐中的工作需求。

2.4 離子對的選擇

在所選質(zhì)譜條件下，檢測氟胺酮的離子對有222.2/163.3、222.2/191.3、222.2/204.3、222.2/109.2 可 供 選 擇 ， 但 222.2/163.3 基 線 不 平 穩(wěn) 、222.2/204.3 響應(yīng)偏低，因此實驗選擇基線平穩(wěn)且響應(yīng)較好的 222.2/109.2 和 222.2/191.3 作為定性、定量離子對。

2.5 專屬性試驗

取空白人全血，經(jīng)前處理后進樣分析，考察方法專屬性。實驗表明空白人全血對氟胺酮檢測無干擾，基線平穩(wěn)，空白譜圖如圖2所示。

圖2 空白人全血色譜圖

3 結(jié)論

采用HPLC/MS/MS 法檢測人全血中的氟胺酮，血樣經(jīng)乙腈沉淀蛋白，高速離心后過濾膜，用C18作為分離柱，乙腈-5mmol/L醋酸銨水溶液梯度洗脫，正離子掃描模式進行分析，方法穩(wěn)定性好，樣品的前處理簡單，分析快速，提取率高，基質(zhì)效應(yīng)小，檢測限低，方法專屬性強，適用司法鑒定實踐中對血液中氟胺酮的定性定量檢測。