關蒼術組培快繁技術研究進展

吳志強 王思寬 劉建星 侯昕陽 建德鋒

【摘 ? 要】 該試驗以關蒼術帶芽莖段為外植體進行組培繁殖，以提高關蒼術苗木的繁殖速度，結果得出：關蒼術帶芽莖段經(jīng)過消毒清洗后切割接種到MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+GA3 0.5 mg/L培養(yǎng)基上，產(chǎn)生的不定芽數(shù)量最多且質(zhì)量最佳;不定芽分化莖段后切斷轉接到MS+KT 0.5 mg/L +NAA 0.4 mg/L配方中增殖效果最佳;生根培養(yǎng)基選用1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+活性炭3 g/L配方，生根效果最佳。

【關鍵詞】 關蒼術;初代培養(yǎng);繼代培養(yǎng);生根培養(yǎng)

中圖分類號：[R282.2] ? ? ? ? ? ? 文獻識別碼：A ? ? ? ? ? ? ? 文章編號：2096-1073（2020）10-0030-31

[Abstract] ?In this experiment， tissue culture and propagation were carried out with rhizoma Attica with bud stem segment as explants to improve the propagation speed of seedlings. The results showed that after disinfection and cleaning， the bud stem segment with rhizoma attica was cut and inoculated into MS+6-BA 0.5mg /L+IBA 0.5mg /L+GA3 0.5mg /L， and the number of adventites was the highest and the quality was the best. Adventitious bud differentiation stem segment was cut off and transferred to MS+KT 0.5mg /L +NAA 0.4mg /L formula. 1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+ activated carbon 3 g/L was used as rooting medium， and the rooting effect was the best.

[Key words] atractylodes rhizome; primary culture; subculture; take root culture

關蒼術，學名（Atractylodes japonica Koidz. ex Kitam.），是一種珍貴的中藥材，具有重要中藥藥理作用，主要入藥部分為根莖，味道苦、辛，其性溫，多用于治療風濕病等?，F(xiàn)在市面上關蒼術的資源短缺，而市場需求量又比較大，普通人工種植供應不上市場的需要，所以嘗試采用組織培養(yǎng)擬緩解這個問題。該試驗以關蒼術帶芽莖段為外植體，在培養(yǎng)過程中設置了不同的初代培養(yǎng)基配方、繼代培養(yǎng)基配方和生根培養(yǎng)基配方，通過比較各階段最佳的培養(yǎng)方式，以得出關蒼術最佳的組培方案。

1 ?材料與方法

1.1 ?試驗材料

關蒼術外植體選用帶芽莖段，采自于吉林農(nóng)業(yè)科技學院北校區(qū)藥植園;實驗所用的儀器、用具、藥品等均由吉林農(nóng)業(yè)科技學院中藥學院組培實驗室提供。

1.2 ?試驗方法

1.2.1 培養(yǎng)基配方 ?初代培養(yǎng)基配方采用4個配比，分別記作：A1： MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L;A2：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L，A3：MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L，A4：MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L，每個配比中均添加GA3 0.5 mg/L。

繼代培養(yǎng)基配方采用7個配比，分別記作：B1：MS+KT 0.5 mg/L，B2：MS+KT 0.5 mg/L +IBA 0.2 mg/L，B3：MS+KT 0.5 mg/L+IBA 0.4 mg/L， B4：MS+KT 0.5 mg/L +IAA 0.6 mg/L， B5：MS+KT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L，B6：MS+KT 0.5 mg/L +NAA 0.4 mg/L， B7：MS+KT 0.5 mg/L+NAA 0.6 mg/L。

生根培養(yǎng)基配方采用3個配比，分別記作：C1：1/2 MS+活性炭3 g/L+NAA 0.5 mg/L，C2：1/2MS+活性炭3 g/L+NAA 0.8 mg/L，C3：1/2MS+活性炭3 g/L+NAA 1.0 mg/L。

1.2.2 培養(yǎng)過程 ?采集的帶芽莖段切成2-3 cm長，分別采用0.1%升汞消毒5 min 和0.5%的84消毒液消毒30min后，在超凈臺內(nèi)將莖段上的芽切下，切割成0.5cm大小，保留生長點，接種到初代培養(yǎng)基上，每瓶接種1個外植體，每個配比接種50瓶，接種后定期觀察芽的分化情況，記錄愈傷組織出現(xiàn)時間，統(tǒng)計出現(xiàn)愈傷組織的瓶數(shù)，愈傷組織上出現(xiàn)不定芽的時間及數(shù)量，計算平均形成芽的數(shù)量;待芽分化莖長成3-4cm時切斷，每段1cm，轉接到繼代培養(yǎng)基上，每瓶接5段，每個配比接種20瓶;擬經(jīng)過3次繼代后，同樣將莖段切成1cm轉入生根培養(yǎng)基上，每瓶接入5個小段，每個配比接種50瓶。培養(yǎng)期間溫度控制在25℃，光照度在2000-3000 LX，光照時間12h/d，培養(yǎng)室濕度85%。

2 ?結果與分析

2.1 ?不同初代培養(yǎng)基上誘導情況

由表1可見，4種配比都出現(xiàn)一定量的愈傷組織，誘導率最大的是A4，誘導出現(xiàn)時間最早的是A3，說明IBA的添加量對愈傷組織的分化有一定影響，添加適量有利于愈傷組織形成，添加少量則不利于形成。比較6-BA與NAA組合，發(fā)現(xiàn)誘導時間長誘導率都過低，綜合比較A4的配比最合適。

2.2 ?不同增殖培養(yǎng)基上增殖情況

由表2可以看出7個配方均有一定的增值，B5、B6、B7的增值倍數(shù)明顯大于B1、B2、B3、B4，苗高高于4 cm的有B1、B5、B6，但從增值情況來看，B6增殖效果最好。在繼代培養(yǎng)基中添加GA3的主要目的是為了減少玻璃化現(xiàn)象，通過比較，B5、B6、B7的玻璃化比率相對較高，均超過了20%，說明配方中添加NAA雖然有利于增值但容易產(chǎn)生玻璃化。

2.3 ?不同生根培養(yǎng)基上生根情況

由表3得出，C1、C2生根率較高，說明1/2 MS配方中添加NAA濃度低更有利于生根。比較C1、C2生根率，分別為100%和97%，但C1根系粗壯，平均根數(shù)最多，所以，得出C1（1/2 MS+NAA 0.5 mg/L）最適合作為生根培養(yǎng)基。

3 ?結論與討論

該試驗得出關蒼術帶芽莖段經(jīng)過升汞和84消毒液輪流消毒后，在超凈臺下進行接種，將腋芽切割成0.5cm大小，接種到MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+GA3 0.5 mg/L誘導培養(yǎng)基上效果最好，繼代培養(yǎng)基采用MS+KT 0.5 mg/L +NAA 0.4 mg/L增殖效果最好，生根培養(yǎng)基選用1/2 MS+NAA 0.5 mg/L效果最好。本試驗也得出在繼代培養(yǎng)基中添加NAA雖然有利于增值但容易產(chǎn)生玻璃化，所以關于如何降低玻璃化現(xiàn)象的發(fā)生還有待于進一步研究，另關于關蒼術試管苗的出瓶移栽也有待于比較。

參考文獻：

[1] 于金玲，梁 穎，楊 策，等.關蒼術組織培養(yǎng)的研究[J].江西農(nóng)業(yè) ? ? ?學報，2011（04）：11—13.

[2] 蔡 柯，賈 昊，姜茹桐，等. 篤斯越桔腋芽初代培養(yǎng)技術研究 ? ? ? ? ? [J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)研究， 2018（5）：3-3.

[3] 建德鋒，辛立紅，馬 爽，等. 金銀忍冬腋芽離體培養(yǎng)技術研究 ? ? ? [J]. 吉林農(nóng)業(yè)科技學院學報， 2014（02）：16-18.

（編輯：李曉琳）