滋腎活血方對(duì)血管性癡呆大鼠BDNF/TrkB/PI3K/Akt信號(hào)通路的影響

張發(fā)友，伍大華，葛金文，劉春華，謝瑤，鄧毫斌，周衛(wèi)強(qiáng)

論著·實(shí)驗(yàn)研究

滋腎活血方對(duì)血管性癡呆大鼠BDNF/TrkB/PI3K/Akt信號(hào)通路的影響

張發(fā)友1，2，伍大華1，2，葛金文1，劉春華1，謝瑤2，鄧毫斌2，周衛(wèi)強(qiáng)2

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410006

觀察滋腎活血方對(duì)血管性癡呆（VD）大鼠BDNF/TrkB/PI3K/Akt信號(hào)通路的影響，探討其可能的作用機(jī)制。采用改良的雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法（2-VO法）建立大鼠VD模型，將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、滋腎活血低劑量組、滋腎活血高劑量組和奧拉西坦組，每組8只。給藥28 d后，HE染色觀察大鼠海馬組織CA1區(qū)變化，免疫組化和Western blot分別檢測(cè)大鼠腦組織p-Akt、Akt、TrkB和BDNF蛋白的表達(dá)。HE染色結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠海馬組織CA1區(qū)損傷較嚴(yán)重，細(xì)胞核破裂，胞質(zhì)濃縮，胞體變小；與模型組比較，滋腎活血低劑量組、滋腎活血高劑量組和奧拉西坦組大鼠海馬組織CA1區(qū)損傷均明顯減輕；免疫組化染色結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織p-Akt和Akt蛋白表達(dá)均明顯升高（＜0.05），TrkB和BDNF蛋白表達(dá)均明顯降低（＜0.05）；與模型組比較，滋腎活血低劑量組、滋腎活血高劑量組和奧拉西坦組大鼠腦組織p-Akt和Akt蛋白表達(dá)均明顯降低（＜0.05），TrkB和BDNF蛋白表達(dá)均明顯升高（＜0.05）；Western blot檢測(cè)結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織p-Akt蛋白表達(dá)顯著升高（＜0.05），TrkB和BDNF蛋白表達(dá)均明顯降低（＜0.05）；與模型組比較，滋腎活血低劑量組、滋腎活血高劑量組和奧拉西坦組大鼠腦組織p-Akt蛋白表達(dá)均明顯降低（＜0.05），TrkB和BDNF蛋白表達(dá)均明顯升高（＜0.05）。滋腎活血方可提高VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，其機(jī)制可能與下調(diào)VD大鼠腦組織p-Akt、Akt和上調(diào)TrkB、BDNF蛋白的表達(dá)有關(guān)。

滋腎活血方；血管性癡呆；蛋白激酶；腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子；大鼠

血管性癡呆（vascular dementia，VD）是一種常見(jiàn)于腦動(dòng)脈粥樣硬化或腦卒中后的綜合征，是由各種腦血管病變所致的智力障礙[1]。VD主要表現(xiàn)為記憶和認(rèn)知功能障礙，伴運(yùn)動(dòng)、語(yǔ)言、視覺(jué)或人格障礙[2-3]。其發(fā)病機(jī)制與缺血性腦損傷引起的神經(jīng)元變性、凋亡或壞死有關(guān)[4]，迄今尚未發(fā)現(xiàn)有效的治療方法。有研究報(bào)道，腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）缺乏開(kāi)始于VD早期，最終導(dǎo)致其晚期神經(jīng)元變性、細(xì)胞死亡和膽堿能神經(jīng)傳遞喪失[5]。BDNF與學(xué)習(xí)記憶過(guò)程密切相關(guān)，分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)之內(nèi)，可通過(guò)多條信號(hào)途徑在神經(jīng)發(fā)育過(guò)程中促進(jìn)分化、存活，從而保護(hù)神經(jīng)元改善病理狀態(tài)。有證據(jù)表明，BDNF的表達(dá)在VD患者和VD動(dòng)物模型中受損[6]。外源性添加BDNF可在體外和體內(nèi)挽救神經(jīng)元死亡并預(yù)防β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的神經(jīng)變性[7]。BDNF通過(guò)結(jié)合酪氨酸激酶受體B（TrkB）發(fā)揮促生存作用，TrkB誘導(dǎo)的磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）活性進(jìn)一步使Akt活化[8]，進(jìn)而使Bcl-2、Bad等促凋亡靶點(diǎn)磷酸化失活。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，滋腎活血方可改善VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力[9]，但其潛在機(jī)制尚未明確。本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上觀察滋腎活血方對(duì)VD大鼠BDNF/TrkB/ PI3K/Akt信號(hào)通路的影響，探討其治療VD的可能作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

雄性健康SD大鼠40只，體質(zhì)量（200±20）g，湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（湘）2013-0004。飼養(yǎng)于溫度20～25 ℃、相對(duì)濕度50%～70%環(huán)境，光照12 h，自由攝食飲水。

1.2 藥物

滋腎活血方（枸杞子30 g，制何首烏15 g，益智仁10 g，桑椹30 g，葛根30 g，丹參30 g，山楂15 g，石菖蒲10 g，郁金10 g，遠(yuǎn)志10 g，全蝎3 g，五味子5 g），飲片購(gòu)自湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院中藥房。臨床成人建議用量為198 g/d，臨床動(dòng)物每日等效劑量為17.6 g/kg，本實(shí)驗(yàn)高劑量為17.6 g/（kg?d）、低劑量為8.8 g/（kg?d），由本院藥劑科制成2.00 g/mL溶液。奧拉西坦片，規(guī)格0.4 g/片，石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，批號(hào)20180516；臨床成人建議用量為2.4 g/d，臨床動(dòng)物等效劑量為216 mg/（kg?d），按體表面積換算，將其配成濃度為24.00 mg/mL的懸浮液。

1.3 主要試劑與儀器

一抗稀釋液，上海碧云天生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)P0205；BCA蛋白定量試劑盒，北京索萊寶科技有限公司，貨號(hào)PC0020；SDS-PAGE試劑盒，上海碧云天生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)P0012AC；ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒，美國(guó)Pierce公司，貨號(hào)20-500；兔抗p-Akt抗體，北京博奧森生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)bsm-52130R；兔抗NTRK抗體，北京博奧森生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)bs-0176R；兔抗BDNF抗體，北京博奧森生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)bs-4989R；兔抗Akt抗體，北京博奧森生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)bsm-33278m；兔抗β-actin抗體，北京博奧森生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)bs-10966R；HRP標(biāo)記羊抗兔，北京博奧森生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)bs-0295P-HRP；多聚甲醛，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑北京有限公司，貨號(hào)80096675；免疫組化檢測(cè)試劑盒，美國(guó)CST公司，貨號(hào)8109。Mini-protean Tetra System垂直電泳槽轉(zhuǎn)膜儀，美國(guó)Bio-Rad公司；Mini trans-blot小型濕轉(zhuǎn)印槽，美國(guó)Bio-Rad公司；ChemiDocTMXRS+凝膠成像系統(tǒng)，美國(guó)Bio-Rad公司；Max200超級(jí)酶標(biāo)儀，美國(guó)Bio-Tek公司；TE2000-U+DXM1200倒置顯微鏡，日本Nikon公司；Z36HK高速冷凍離心機(jī)，德國(guó)HermLe公司。

1.4 造模

采用改良的雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法（2-VO法）制備VD大鼠模型[5]。手術(shù)造模前，大鼠禁水4 h并禁食12 h。大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉并固定于板上，沿頸部中線切開(kāi)，鈍性解剖暴露左側(cè)頸總動(dòng)脈，并用手術(shù)線雙重結(jié)扎。7 d后，進(jìn)行相同手術(shù)并結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈。術(shù)后3 d青霉素鈉50萬(wàn)U/kg腹腔注射。假手術(shù)組大鼠僅分離血管而不結(jié)扎。

1.5 分組及給藥

取SD大鼠40只，采用隨機(jī)數(shù)字表法選出8只作為假手術(shù)組，剩余32只大鼠造模。假手術(shù)組和VD大鼠造模期間無(wú)大鼠死亡，32只大鼠均經(jīng)水迷宮篩選出VD大鼠。將成模大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、奧拉西坦組、滋腎活血低劑量組、滋腎活血高劑量組，每組8只。大鼠按9 mL/（kg?d）劑量給予相應(yīng)藥物灌胃。其中假手術(shù)組給予蒸餾水灌胃，滋腎活血低劑量組給予滋腎活血方8.8 g/（kg?d）灌胃，滋腎活血高劑量組給予滋腎活血方17.6 g/（kg?d）灌胃，奧拉西坦組給予奧拉西坦藥液216 mg/（kg?d）灌胃。藥物劑量參照文獻(xiàn)[9]計(jì)算。每日1次，連續(xù)4周。

1.6 取材

大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉，迅速打開(kāi)胸腔，解剖切口用止血鉗固定并牽拉皮膚使心臟充分暴露于視野。將靜脈滴注針頭自左心室插入心臟，穿入至升主動(dòng)脈，用止血鉗固定針頭，同時(shí)剪破右心耳。用37 ℃生理鹽水150～250 mL經(jīng)升主動(dòng)脈快速灌注沖洗，至動(dòng)脈中液體變清亮，加入4%多聚甲醛0.1 mol/L PBS，直到大鼠四肢完全僵硬，取出全腦，用于HE染色。取新鮮海馬，大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉，斷頭后在冰盒上快速剝離腦組織，分離海馬，將海馬組織用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，冠狀切片，用于Western blot、免疫組化檢測(cè)。

1.7 HE染色

大鼠處死后取腦，分離海馬，將海馬組織用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片，染色5～10 min，沖洗，鹽酸乙醇分色；自來(lái)水浸泡返藍(lán)5 min，沖洗，干燥，封片，鏡檢。

1.8 免疫組化檢測(cè)

按免疫組化試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，脫蠟、水化組織切片→對(duì)切片預(yù)處理→孵育10 min（3%H2O2去離子水）→PBS洗滌2 min×3次→滴加一抗，37 ℃孵育1～2 h，PBS沖洗2 min×3次→滴加試劑1，37 ℃孵育20 min，PBS洗滌2 min×3次→滴加試劑2，37 ℃孵育20 min，PBS沖洗2 min×3次→DAB溶液顯色→沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片→圖像分析。免疫組化染色陽(yáng)性表達(dá)成分在圖像上呈棕黃色顆粒，以平均光密度值來(lái)表示。

1.9 Western blot檢測(cè)

用干凈的高溫消毒剪刀將大腦組織剪碎放入試管。加入適量的裂解液后進(jìn)行充分裂解，在冰上使其充分混勻，根據(jù)上述方法將其至少重復(fù)3次，使其盡量充分裂解。冰上裂解30 min，將混合的裂解液4 ℃、12 000 r/min離心30 min，取上清液，分裝于無(wú)菌離心管，置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。BCA法測(cè)定蛋白濃度。用SDS-PAGE制膠試劑盒，配制8%分離膠、5%濃縮膠，每孔上樣蛋白30 μg電泳，將蛋白轉(zhuǎn)至PVDF膜，TBST洗膜5 min×3次。用5%脫脂奶粉封閉2 h，TBST再洗膜8 min×3次。孵育一抗（1∶1000 p-Akt，1∶1000 Akt，1∶1000 TrkB，1∶1000 BDNF，1∶10 000 β-actin），4 ℃孵育過(guò)夜。TBST再洗膜10 min×3次，二抗室溫孵育2 h，TBST再洗膜20 min×3次。用化學(xué)發(fā)光法顯影曝光，凝膠成像系統(tǒng)掃描分析，以目的蛋白與內(nèi)參β-actin灰度值之比表示蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 HE染色結(jié)果

假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)完整，絕大部分細(xì)胞呈圓形，可見(jiàn)少量橢圓形，細(xì)胞核大，核仁較清晰，細(xì)胞排列整齊，結(jié)構(gòu)較為完整；模型組大鼠海馬CA1區(qū)絕大部分錐體細(xì)胞形態(tài)消失，排列較為分散，細(xì)胞層次減少，視野可見(jiàn)細(xì)胞旁有空染區(qū)，細(xì)胞核破裂，胞質(zhì)濃縮，胞體變?。粖W拉西坦組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)較模型組完整，細(xì)胞排列較為整齊，層次較模型組清晰；滋腎活血低、高劑量組較模型組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)完整，細(xì)胞排列較為整齊，層次較清晰，細(xì)胞無(wú)空染區(qū)，細(xì)胞核較完整，細(xì)胞數(shù)目顯著增多。見(jiàn)圖1。

2.2 免疫組化染色結(jié)果

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織p-Akt和Akt平均光密度均明顯升高（＜0.05），TrkB和BDNF平均光密度均明顯降低（＜0.05）；與模型組比較，滋腎活血低劑量組、滋腎活血高劑量組和奧拉西坦組大鼠腦組織p-Akt和Akt平均光密度均明顯降低（＜0.05），TrkB和BDNF平均光密度均明顯升高（＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1、圖2。

2.3 滋腎活血方對(duì)大鼠腦組織相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織p-Akt蛋白表達(dá)顯著升高（＜0.05），TrkB和BDNF蛋白表達(dá)均明顯降低（＜0.05）；與模型組比較，滋腎活血低劑量組、滋腎活血高劑量組和奧拉西坦組大鼠腦組織p-Akt蛋白表達(dá)明顯降低（＜0.05），TrkB和BDNF蛋白表達(dá)均明顯升高（＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖3、圖4。

圖1 各組大鼠海馬組織形態(tài)（HE染色，×400）

表1 各組大鼠腦組織p-Akt、Akt、TrkB、BDNF平均光密度比較（±s）

注：與假手術(shù)組比較，#＜0.05；與模型組比較，*＜0.05

圖2 各組大鼠腦組織Akt、p-Akt、TrkB、BDNF陽(yáng)性表達(dá)（免疫組化染色，×400）

注：A.假手術(shù)組；B.模型組；C.奧拉西坦組；D滋腎活血低劑量組；E.滋腎活血高劑量組；與A比較，#P＜0.05；與B比較，*P＜0.05

注：A.假手術(shù)組；B.模型組；C.奧拉西坦組；D滋腎活血低劑量組；E.滋腎活血高劑量組；與A比較，#P＜0.05；與B比較，*P＜0.05

3 討論

目前，VD是腦血管疾病中與多種危險(xiǎn)因素有關(guān)的一種疾患，雖然其具有可預(yù)防性的特點(diǎn)，但病死率高，發(fā)病率也逐年上升，其特征在于記憶障礙、視覺(jué)空間障礙、注意力障礙和執(zhí)行功能障礙。海馬是一個(gè)大腦記憶的關(guān)鍵區(qū)域，海馬組織受損會(huì)導(dǎo)致記憶力顯著下降，嚴(yán)重者亦可導(dǎo)致VD。有研究顯示，海馬CA1區(qū)是學(xué)習(xí)記憶的主要功能區(qū)[10]。本研究結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠CA1區(qū)受損較為嚴(yán)重，細(xì)胞核破裂，胞質(zhì)濃縮，胞體變小；與模型組比較，滋腎活血方干預(yù)后VD大鼠CA1區(qū)細(xì)胞形態(tài)較為完整，排列較為整齊，層次較清晰，細(xì)胞數(shù)量顯著增多，提示滋腎活血方可改善VD大鼠海馬CA1區(qū)損傷。

BDNF是一種具有生物學(xué)功能的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，支持中樞和周圍神經(jīng)元生存，內(nèi)源性BDNF在腦缺血后可縮小腦組織缺血性損傷，外源性BDNF在腦梗死后可有效縮小梗死體積。BDNF對(duì)神經(jīng)存活、學(xué)習(xí)、記憶、突觸活動(dòng)等有調(diào)節(jié)作用已被證實(shí)[11]。BDNF與學(xué)習(xí)記憶過(guò)程密切相關(guān)，參與長(zhǎng)期記憶的形成，在維持學(xué)習(xí)記憶和調(diào)節(jié)突觸的可塑性方面具有重要作用[12]。BDNF主要通過(guò)TrkB發(fā)揮其生理作用，TrkB是一種具有高度親和力的BDNF受體。有研究表明，TrkB信號(hào)在記憶的形成中起著至關(guān)重要的作用，異常的TrkB表達(dá)會(huì)損害記憶和學(xué)習(xí)[13]。BDNF通過(guò)與TrkB結(jié)合后構(gòu)成二聚體，并在同一時(shí)間誘導(dǎo)TrkB使其磷酸化，以便細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)傳遞，誘使下游通路的激活，保證級(jí)聯(lián)反應(yīng)的正常，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[14]。BDNF通過(guò)與TrkB形成的受體復(fù)合物相結(jié)合，進(jìn)而發(fā)揮其對(duì)神經(jīng)元可塑性促進(jìn)作用。本研究結(jié)果顯示，VD大鼠BDNF和TrkB蛋白表達(dá)顯著下降，滋腎活血方可升高VD大鼠BDNF、TrkB蛋白表達(dá)，從而激活其自身通路影響下游信號(hào)通路，促進(jìn)對(duì)VD大鼠神經(jīng)元及學(xué)習(xí)記憶能力的修復(fù)，達(dá)到保護(hù)大鼠海馬神經(jīng)元的作用。

PI3K/Akt是BDNF/TrkB下游級(jí)聯(lián)信號(hào)中較為關(guān)鍵的途徑，被認(rèn)為可調(diào)節(jié)NMDA受體介導(dǎo)的突觸可塑性。PI3K/Akt信號(hào)通路已被證實(shí)對(duì)腦組織和細(xì)胞缺血缺氧有保護(hù)作用。PI3K是可被細(xì)胞因子和有絲分裂原刺激激活的生長(zhǎng)因子，經(jīng)激活PKB/Akt的方式參與到調(diào)控細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖和凋亡中。Akt也被稱為PKB，是一種能對(duì)體內(nèi)多種信號(hào)作出反應(yīng)的特異性蛋白激酶，它的活化受到生長(zhǎng)因子、細(xì)胞應(yīng)激和胰島素等多種因素的影響，并且在其參與的信號(hào)通路中起營(yíng)養(yǎng)代謝、細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖，轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和細(xì)胞存活等功能。Akt各種亞型都在神經(jīng)系統(tǒng)中高度表達(dá)，在神經(jīng)保護(hù)中發(fā)揮重要作用?；钴S的磷酸化Akt通過(guò)升高下游底物的磷酸化，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生存。BDNF、胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅰ或神經(jīng)生長(zhǎng)因子等神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，可引起PI3K/Akt的激活。營(yíng)養(yǎng)因子與PI3K同源酪氨酸激酶受體結(jié)合，產(chǎn)生存活因子，PI3K在該因子的作用下磷酸化并逐漸募集至質(zhì)膜附近，與此同時(shí)，PI3K的磷脂產(chǎn)物與Akt同源結(jié)構(gòu)蛋白相互作用使Akt聚集到質(zhì)膜內(nèi)表面，在質(zhì)膜內(nèi)表面的PI3K所含的催化亞基產(chǎn)生磷酸肌醇磷酸鹽PIP2和PIP3，從而導(dǎo)致Akt磷酸化激活?；罨疉kt參與多種細(xì)胞功能的調(diào)控，而PI3K/Akt信號(hào)通路在VD發(fā)病中發(fā)揮著作用[15]。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠磷酸化的Akt蛋白表達(dá)顯著升高，由此推測(cè)BDNF介導(dǎo)的PI3K/Akt信號(hào)通路的活化可能是由腦缺血所誘發(fā)的，而活化的BDNF信號(hào)通路又和海馬神經(jīng)的受損密切相關(guān)，導(dǎo)致海馬神經(jīng)進(jìn)入損傷狀態(tài)。滋腎活血方干預(yù)后，p-Akt蛋白表達(dá)顯著降低，高劑量組更為顯著，且免疫組化結(jié)果顯示，滋腎活血方干預(yù)后Akt和p-Akt表達(dá)顯著降低。Western blot檢測(cè)大鼠總蛋白Akt表達(dá)無(wú)變化，而免疫組化檢測(cè)Akt有明顯變化；其可能的原因是Western blot檢測(cè)的是組織總蛋白Akt的表達(dá)，而免疫組化屬半定量法，檢測(cè)組織中細(xì)胞胞漿、胞膜、細(xì)胞核等Akt表達(dá)。由此推測(cè)滋腎活血方通過(guò)調(diào)控BDNF介導(dǎo)的PI3K/Akt信號(hào)通路，從而對(duì)大鼠神經(jīng)元起到保護(hù)作用，對(duì)受損VD大鼠記憶功能有所改善。

國(guó)醫(yī)大師劉祖貽認(rèn)為，VD病位在腦，屬本虛標(biāo)實(shí)之證[16]。腎精虧虛、瘀血阻絡(luò)為其常見(jiàn)病機(jī)，臨床運(yùn)用滋腎活血方治療VD療效顯著[17]。方中制何首烏滋陰補(bǔ)血，有化陽(yáng)之功而無(wú)陰凝之弊，可獲陰陽(yáng)雙補(bǔ)之效，枸杞子有滋補(bǔ)肝腎、益精明目之功，兩者共為君藥；桑椹滋陰養(yǎng)血，益智仁助陽(yáng)化陰，鼓舞腎氣以生精，可使化源得滋，腦髓得充，共為臣藥；葛根輕清升陽(yáng)，丹參活血祛瘀，五味子滋腎澀精，遠(yuǎn)志寧心安神，石菖蒲開(kāi)竅寧神，全蝎搜風(fēng)通絡(luò)，六藥為佐；郁金活血化瘀，山楂消食健胃，共為使藥。全方共奏活血通竅、滋陰補(bǔ)腎、益智健腦之效。

綜上所述，滋腎活血方可通過(guò)提高BDNF、TrkB和降低p-Akt蛋白表達(dá)，從而對(duì)大鼠神經(jīng)元起到保護(hù)作用，改善VD大鼠海馬損傷。

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Effects ofPrescription on BDNF/TrkB/PI3K/Akt Signaling Pathways in Vascular Dementia Rats

ZHANG Fayou1,2, WU Dahua1,2, GE Jinwen1, LIU Chunhua1, XIE Yao2, DENG Haobin2, ZHOU Weiqiang2

To explore the effects ofPrescription on BDNF/TrkB/PI3K/Akt signal pathways in vascular dementia (VD) rats; To discuss its possible mechanism.The modified bilateral common carotid artery ligation method (2-VO method) was used to establish rat VD models, and the rats were randomly divided into sham-operation group, model group,low-, high-dosage groups, and Oxiracetam group, with 8 rats in each group. 28 days after administration, HE staining was used to observe the changes in the CA1 region of rat hippocampus. Immunohistochemistry and Western blot were used to detect the protein expressions of p-Akt, Akt, TrkB and BDNF in the rat brain.The HE results showed that compared with the sham-operation group, the hippocampal CA1 region of the model group was more severely damaged, the nucleus was ruptured, the cytoplasm was concentrated, and the cell body became smaller; compared with the model group, the damage of hippocampal CA1 area was significantly reduced inlow-, high-dosage groups, and Oxiracetam group. Immunohistochemical staining results showed that compared with the sham-operation group, the p-Akt and Akt protein expressions in the model group significantly increased (<0.05), and the TrkB and BDNF protein expressions were significantly reduced (<0.05); compared with the model group, the expressions of p-Akt and Akt inlow-, high-dosage groups, and Oxiracetam group were all reduced (<0.05), and TrkB and BDNF protein expression significantly increased (<0.05). Western blot results showed that compared with the sham-operation group, the expression level of p-Akt protein in the model group significantly increased (<0.05) and TrkB and BDNF protein expression significantly decreased (<0.05); compared with the model group, the expressions of p-Akt and Akt inlow-, high-dosage groups, and Oxiracetam group were all reduced (<0.05), and TrkB and BDNF protein expression significantly increased (<0.05).Prescription can improve the learning and memory abilities of VD rats. The mechanism may be related to the down-regulation of p-Akt and Akt protein expressions and the up-regulation of TrkB and BDNF protein expressions.

Prescription; vascular dementia; protein kinase; brain-derived neurotrophic factor; rats

R285.5

A

1005-5304(2020)10-0042-06

10.19879/j.cnki.1005-5304.202005193

國(guó)家自然科學(xué)基金（81894462）

伍大華，E-mail：893049352@qq.com

（2020-05-03）

（2020-05-28；編輯：華強(qiáng)）