液相色譜——質(zhì)譜法對(duì)蔬菜水果中農(nóng)藥殘留克百威進(jìn)行檢測(cè)的方法探討

韓吉祥

克百威（carbofuran）別名呋喃丹，是一種氨基甲酸酯類殺蟲(chóng)劑和殺線蟲(chóng)劑，可用于多種作物防治土壤內(nèi)及地面上的300多種害蟲(chóng)和線蟲(chóng)，并有縮短作物生長(zhǎng)期、促進(jìn)作物生長(zhǎng)發(fā)育從而有效提高作物產(chǎn)量的作用。按中國(guó)農(nóng)藥毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，呋喃丹是高毒農(nóng)藥，不能用在蔬菜和果樹(shù)上，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的測(cè)定是用液相色譜儀（配有柱后衍生裝置和熒光檢測(cè)器）進(jìn)行檢測(cè)，本文采用液相色譜質(zhì)譜法對(duì)克百威進(jìn)行測(cè)定，對(duì)原方法進(jìn)行了改良。

1. 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器和試劑

液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀：A B SCIEX 5500型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；氨基柱：（6mL，500mg）濾膜，0.2μm；乙腈、二氯甲烷、甲醇：色譜純；甲酸：質(zhì)譜純；氯化鈉：分析純。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)品配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100μg/mL）：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品10mg于100mL容量瓶中，用甲醇溶解、定容。標(biāo)準(zhǔn)中間液（1μg/ mL）：移取儲(chǔ)備液1mL于100mL容量瓶中，用乙腈+水（3+2）溶解、定容。標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)需要，準(zhǔn)確吸取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙腈+水溶液（3+2）稀釋得到0.5ng/mL、1ng/mL、2g/mL、5ng/ mL、10ng/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3 樣品處理

1. 試樣制備：抽取蔬菜、水果樣品，取可食用部分切碎后放入高速攪拌機(jī)中充分打碎，制成待測(cè)樣，放入分裝袋中備用。2. 提?。喝?0g樣品與50mL乙腈混合，10000rpm下勻質(zhì)2min后，濾紙過(guò)濾，濾液轉(zhuǎn)入具塞量筒中，加入5g氯化鈉，蓋上蓋子劇烈振蕩，靜置分層。準(zhǔn)確移取10 mL上層的乙腈提取液（相當(dāng)于4g樣品）于雞心瓶中，在40℃下減壓濃縮至近干，雞心瓶中殘?jiān)齼艋?. 凈化：（1）活化：向氨基柱中加入5mL甲醇+二氯甲烷（1+99）混合液，流出液棄去，待溶劑到達(dá)填料上層，關(guān)閉考克閥。（2）上樣：用6mL甲醇+二氯甲烷（1+99）混合液分三次洗滌待凈化的雞心瓶，洗滌液加入氨基柱，收集流出液。（3）淋洗：5mL甲醇+二氯甲烷（1+99）混合液淋洗氨基柱，流出液并入上一步的接收瓶。（4）重新溶解：35℃下將凈化液減壓濃縮至近干，用乙腈+水溶液（3+2）溶解并定容至2mL，高速渦旋后濾膜過(guò)濾上機(jī)分析。

1.4 儀器條件

色譜柱：C18柱3.5μm，100mm 2.1mm（內(nèi)徑）。流動(dòng)相及梯度洗脫條件見(jiàn)表（1）。

柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；電離源模式：電噴霧離子化；正離子掃描；霧化氣：氮?dú)猓?/p>

碰撞氣 ：9psi； 氣簾氣（Curtain Gas）：25psi；離子噴霧電壓： 5500V；干燥氣溫度：550℃DP：去簇電壓：101V；EP：入口電壓：10V。

2. 結(jié)果及討論

2.1 質(zhì)譜方法的選擇

克百威以正離子掃描的方式建立質(zhì)譜方法，先在Q1進(jìn)行全掃描，尋找到母離子222.1，然后Q2碎裂，在Q3進(jìn)行子離子全掃描以確定各組分的主要碎片離子，將靈敏度最高的兩個(gè)離子組成離子對(duì)（165.1/122.8），其中定量離子為222.1 / 165.1，定性離子為222.1 / 122.8，最后優(yōu)化CE值。CE是碰撞能，是摸索完母離子以后，子離子必須優(yōu)化的參數(shù)。找到子離子響應(yīng)最好相對(duì)應(yīng)的碰撞能。222.1/165.1的CE值為19；222.1/122.8的CE值為29。

2.2 色譜方法的建立

將處理好的樣品上機(jī)，以0.1%的甲酸水溶液和乙腈作為流動(dòng)相，采用梯度洗脫的方式進(jìn)行色譜的分離，從色譜柱流出后再進(jìn)入質(zhì)譜儀中進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)品工作液用乙腈水溶液進(jìn)行配制，降低了溶劑效應(yīng)，避免出現(xiàn)雜峰，峰型也不會(huì)拖尾。同時(shí)，克百威在酸性條件下比較穩(wěn)定，所以，加入少量甲酸就保證了化合物的穩(wěn)定性。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該方法的譜圖保留時(shí)間和靈敏度都比較理想。見(jiàn)下圖。

2.3 樣品的提取

克百威屬于氨基甲酸酯類農(nóng)藥，試樣用乙腈提取，提取液經(jīng)過(guò)濾、振蕩、減壓濃縮后，采用固相萃取技術(shù)，用氨基柱進(jìn)行分離、凈化（樣品流出氨基柱的過(guò)程就是樣品凈化的過(guò)程，氨基柱選擇性吸附干擾雜質(zhì)，而讓被測(cè)物質(zhì)流出。經(jīng)過(guò)凈化后的樣品更干凈），淋洗液經(jīng)旋蒸減壓濃縮（使用減壓濃縮的方法，最大限度地降低被測(cè)物質(zhì)的損失，保證了樣品的回收率）后復(fù)溶，復(fù)溶液過(guò)濾膜后使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)。外標(biāo)法定量。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

按照工作曲線方法配制5種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照儀器條件進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果表明，克百威的濃度在0.5-10ng/mL的范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)下表（圖）。

2.5 重現(xiàn)性及回收率

分別稱取同一空白試樣（豇豆），按本方法加標(biāo)測(cè)定，加標(biāo)回收率為102.2%，結(jié)果見(jiàn)表（2）。

2.6 方法的比較

按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761-2008，檢測(cè)氨基甲酸酯類農(nóng)藥所有的方法是用液相色譜儀（配有柱后衍生裝置和熒光檢測(cè)器）進(jìn)行檢測(cè)。與本方法相比，液相熒光柱后衍生需要雙路衍生，同時(shí)要用到鄰苯二甲醛和巰基乙醇等多種試劑做為衍生劑，而液相色譜質(zhì)譜法所用到的只有甲醇、乙腈、二氯甲烷等實(shí)驗(yàn)室常備溶劑。相對(duì)檢測(cè)器而言，質(zhì)譜檢測(cè)屬于痕量分析，既能定性，又能定量，與熒光色譜檢測(cè)相比，靈敏度更高。

3. 結(jié)論

農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展使農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)越來(lái)越依賴于農(nóng)藥、抗生素等外源物質(zhì)。我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥用量居高不下，而這些物質(zhì)的不合理使用必將導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留超標(biāo)，影響消費(fèi)者食用安全。目前，農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法種類繁多，其中液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用是利用內(nèi)噴射式和粒子流式接口技術(shù)將液相色譜和質(zhì)譜聯(lián)接起來(lái)的方法。LC在分離方面非常有效，而MS允許分析物在痕量水平上進(jìn)行確認(rèn)。LCMS對(duì)簡(jiǎn)單樣品具有幾乎通用的多殘留分析能力，檢測(cè)靈敏度高、選擇性好、定性定量可同時(shí)進(jìn)行、結(jié)果可靠，主要用于分析熱不穩(wěn)定、分子量較大、難于用氣相色譜分析的樣品，是農(nóng)藥殘留分析中很有力的一種方法，已成為對(duì)果蔬中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)的主流技術(shù)之一，得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。