免疫固定電泳結(jié)合免疫球蛋白檢測在多發(fā)性骨髓瘤診斷與分型中的應(yīng)用評價

翁有紅，張楠，王東平，徐雨航，沈越，李洪春

（徐州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，江蘇 徐州 221002）

多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一種漿細(xì)胞克隆性惡性增生性疾病，其發(fā)病率位居血液系統(tǒng)惡性腫瘤的第二位[1]。M 蛋白是單克隆B 淋巴細(xì)胞異常增生的大量結(jié)構(gòu)均一的免疫球蛋白或其片段，在MM 的診斷中具有重要的意義[2]。由于多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的增殖不同以及分泌異常免疫球蛋白的種類和數(shù)量不一致，使臨床表現(xiàn)呈現(xiàn)多樣化，據(jù)相關(guān)資料表明，漏診率可達(dá)50%[3]。 因此，利用實驗室常規(guī)檢測項目血清蛋白電泳結(jié)合免疫球蛋白檢測對MM 的發(fā)現(xiàn)、診斷、分型有著重要意義。 本實驗回顧性分析330 例MM 患者血清蛋白電泳、免疫固定電泳、免疫球蛋白及血/尿輕鏈檢測，報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 回顧性分析 2015 年1 月至 2018年7 月于徐醫(yī)附院就診的330 例MM 患者，均符合MM 診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，并得到醫(yī)院倫理委員會的認(rèn)可。同期選擇90 例年齡和性別相匹配的體檢人群作為對照。

1.2 儀器和設(shè)備 法國Serbia Hydrasys 2 全自動電泳儀和配套試劑，進(jìn)行血清蛋白電泳和免疫固定電泳檢測。 血清免疫球蛋白及輕鏈定量采用Beckman Coulter IMMAGE 800 特定蛋白分析系統(tǒng)進(jìn)行檢測。 尿輕鏈定量采用Siemens BNⅡ全自動蛋白分析儀進(jìn)行檢測。 試劑均為儀器的配套試劑。

1.2.1 血清蛋白電泳 按照儀器操作說明書和試劑盒要求進(jìn)行電泳，并對相應(yīng)條帶進(jìn)行灰度值掃描。

1.2.2 免疫固定電泳 參照儀器使用說明操作，具體方法簡述如下：⑴加樣和電泳：將血清加在瓊脂糖凝膠板上不同位置，然后電泳；⑵固定：在已分開的蛋白電泳膠片上分別加入相應(yīng)的單價抗血清，IgG、IgA、IgM 抗血清和抗 κ、λ 輕鏈抗血清；⑶洗脫：將未結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫掉；⑷染色：氨基黑染料著色。

1.2.3 血清免疫球蛋白、 輕鏈以及尿輕鏈定量 采用免疫散射比濁法，檢測時室內(nèi)質(zhì)量控制均在控。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，用 χ2檢驗計數(shù)資料，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者基本資料 330 例多發(fā)性骨髓瘤 （MM）患者中，男 197 例，女 133 例，60 歲及以上 224 例，60歲以下106 例。 MM 在男女之間無明顯差異，但在年齡之間（大于等于60 歲和小于60 歲）差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.001）， 好發(fā)于60 歲以上的中老年人，見表1、圖1。

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2.2 330 例 MM 患者血清蛋白電泳分析 330 例MM 患者中 M 蛋白檢出 226 例，條帶 2、3、4、6、10、11、14，陽性率達(dá) 68.48%（226/330）。 見表2、圖2。

圖1 健康人與MM 患者年齡比較散點圖

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圖2 血清蛋白電泳分析顯示M 蛋白

2.3 M 蛋白陽性的患者血清免疫固定電泳分析226 例M 蛋白陽性患者中224 位做了免疫固定電泳。 IgG 型 133 例（133/224，59.38%），IgA 型 57 例（57/224，25.45%），輕鏈型 32 例（32/224，14.29%），并出現(xiàn)1 例非分泌型和1 例雙克隆型 （IgG+IgA），本研究中未統(tǒng)計到IgM 陽性的MM 患者， 見表3、圖3。

2.4 免疫固定電泳結(jié)合免疫球蛋白檢測在MM 患者中的聯(lián)合分析

2.4.1 M 蛋白陽性患者血清免球蛋白及血/尿輕鏈分析 226 例M 蛋白陽性的 MM 患者中，有 141 例同時進(jìn)行了血清蛋白電泳、固定電泳、免疫球蛋白和血/尿輕鏈檢測。超過參考區(qū)間即為升高，并錄入表格。 在50 例免疫固定電泳顯示IgG+κ 陽性的MM 患 者中， 只 有 42 例 IgG 升高， 符 合率為84.00%， 但有 49 例血清輕鏈 κ 升高， 符合率為98.00%；在 45 例 IgG+λ 陽性的 MM 患者中，有 40例顯示IgG 升高，符合率為88.89%，有45 例血清輕鏈 λ 升高，符合率為 100.00%；在 17 例 IgA+κ 陽性的 MM 患者中，有 15 例 IgA 升高，符合率為 88.24%，有 17 例血清輕鏈 κ 升高，符合率為 100.00%，但在19 例免疫固定電泳顯示IgA+λ 陽性的 MM 患者中，有19 例免疫球蛋白IgA 升高，符合率為100.0 0%，而只有17 例血清輕鏈λ 升高，符合率為89.47%，其中有一例雖然在血清中未顯示λ 輕鏈升高，但在尿液中表現(xiàn)為λ 輕鏈升高。 由此顯示，免疫球蛋白和血/尿輕鏈定量檢測， 及免疫固定電泳檢測的結(jié)果吻合率較高。 見表4。

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圖3 免疫固定電泳圖譜分型

注： 參考范圍： 血清免疫球蛋白 IgG 男性 8.00～17.00 g/L， 女性7.00～16.00 g/L；IgA 男性 1.00～4.90 g/L，女性 0.85～3.20 g/L。 血清 κ鏈 5.740～12.800 g/L，血清 λ 鏈 2.690～6.380 g/L。 尿液 κ 鏈 10.20～23.20 g/L，尿液 λ 鏈 4.00～40.80 g/L

2.4.2 104 例M 蛋白陰性患者血清免疫球蛋白和血/尿輕鏈特征 104 例 M 蛋白陰性 MM 患者，大多是血或/和尿輕鏈增高（75/104），5 例血清 IgG 增高的MM 患者， 只表現(xiàn)為1 例免疫固定電泳IgG陽性，而 3 例 IgG 陽性中，有 2 例血清 IgG 沒有明顯增高；15 例IgA 陽性中11 例表現(xiàn)為血清IgA 增高。在僅有血或/和輕鏈增高的MM 患者中，也同樣表現(xiàn)為 2 例 IgG 和 4 例 IgA 陽性。 見表5。

3 討論

MM 是一種骨髓內(nèi)單克隆漿細(xì)胞異常增殖的惡性腫瘤，占血液系統(tǒng)惡性腫瘤的10%[5]。 其起病緩慢，臨床上主要表現(xiàn)為貧血、骨痛、腎功能不全、感染、出血、神經(jīng)癥狀、高鈣血癥、淀粉樣變性等[6]，臨床上易造成漏診。 因此，MM 的早期診斷及分型對愈后和療效尤為重要。

從本研究的統(tǒng)計數(shù)據(jù)可以看出，多發(fā)性骨髓瘤中，M 蛋白的檢出率占有較高的比例，達(dá)到64.48%（226/330），且以 IgG 型為主，其次是 IgA 型，與國內(nèi)陳云峰等報道[7]較為一致。而IgG 型 κ 和 λ 所占比例沒多大差別（32.14%，27.23%），IgA 型 κ 和 λ也基本相等（12.50%，12.95%），這與國內(nèi)劉汐盈的報道[8]也較為一致。 本研究同時顯示：輕鏈型占到一定的比例，達(dá) 14.28%（κ：4.46%，λ：9.82%），因為輕鏈型MM 的瘤細(xì)胞僅合成單克隆型輕鏈，不合成相應(yīng)重鏈，其特點包括腎損害突出，預(yù)后較差等。在MM 患者中，腫瘤漿細(xì)胞過量會產(chǎn)生一種單克隆免疫球蛋白輕鏈，同時抑制另一種輕鏈的生成，κ/λ比率嚴(yán)重失調(diào)，表現(xiàn)為輕鏈型MM。 另外，分析顯示：330 例MM 患者中，雙克隆型1 例，非分泌型1例。 本次實驗未統(tǒng)計到IgM 型，這可能與臨床上該型患者較少，樣本量不足有關(guān)。

表5 M 蛋白陰性MM 患者血清免疫球蛋白和血/尿輕鏈分變化

針對141 例M 蛋白陽性同時進(jìn)行免疫固定電泳、 免疫球蛋白以及血/尿輕鏈定量檢測的MM 患者，IgG 型MM 免疫球蛋白檢出率為 86.32%（82/95），血輕鏈檢出率為 98.95%（94/95），尿輕鏈檢出率為 77.89%（74/95）；IgA 型 MM 免疫球蛋白檢出率為94.44%（34/36），血輕鏈檢出率為94.44%（34/36），尿輕鏈檢出率為 80.56%（29/36）；輕鏈型 MM血輕鏈檢出率為60.00%（6/10）， 尿輕鏈檢出率為80.00%（8/10）。這說明免疫球蛋白定量檢測存在一定漏診率， 血/尿輕鏈的定量檢測對輕鏈型MM 檢出率較低，分析原因可能是輕鏈型MM 樣本較少導(dǎo)致;同時有1 例患者免疫球蛋白檢測顯示IgG 升高，但免疫固定電泳未檢測出，說明免疫固定電泳也存在一定漏診率，分析原因可能是樣本純度不足或樣本量不足導(dǎo)致條帶沒有呈陽性，使定性存在一定的誤差；有一例IgA+λ 型MM 患者在血清中未顯示λ輕鏈升高，但在尿液中表現(xiàn)為λ 輕鏈升高，可能由于時間的推移，血清輕鏈經(jīng)過腎小球濾過作用，從尿中排出。尿輕鏈中會出現(xiàn)κ、λ 同時增高的情況，可能由于MM 患者蛋白質(zhì)代謝紊亂，導(dǎo)致輕鏈從尿中排出。

而104 例M 蛋白陰性患者中72.12%（75/104）表現(xiàn)為血或/和尿輕鏈增高，5 例血清IgG 增高的MM 患者，只有1 例免疫固定電泳IgG 陽性，說明免疫固定電泳存在一定的漏診率。 而3 例免疫固定電泳IgG 陽性的患者中，有2 例血清IgG 沒有明顯增高；15 例IgA 陽性中僅有11 例表現(xiàn)為血清I-gA 增高；在88 例免疫球蛋白定量檢測未顯示增高的患者中，有 2 例IgG 和4 例IgA 陽性，說明免疫固定電泳對免疫球蛋白定量檢測起到了一定的補(bǔ)充作用。 在我們實驗室僅檢測 IgG、IgA、IgM 型MM， 而臨床上也存在一定量的IgD 和IgE 型MM患者， 可能會造成免疫球蛋白定量檢測檢出率降低。

文獻(xiàn)表明，免疫固定電泳在MM 的診斷和鑒別診斷上具有重要意義[9，10]。 針對 MM 患者的該研究結(jié)果顯示，雖然免疫固定電泳的檢出率比血清及尿液輕鏈的檢出率高，但仍有一定的漏診率，而免疫固定電泳聯(lián)合免疫球蛋白定量檢測可大大提高檢出率。 據(jù)了解，血清輕鏈和尿液輕鏈的檢測對MM的診斷意義已得到了國內(nèi)外的肯定[11，12]，因此，免疫固定電泳聯(lián)合免疫球蛋白、 血/尿輕鏈定量檢測可提高M(jìn)M 的檢出率，并輔助判斷MM 的分型。

綜上所述，免疫固定電泳配合免疫球蛋白定量檢測可以降低MM 漏診率，對其進(jìn)行分型，統(tǒng)計不同地區(qū)的分型可為臨床工作者的診斷和預(yù)后判斷提供重要依據(jù)， 并可按照分型制定個體化治療方案。