電針“三陰交-懸鐘”對(duì)類痛經(jīng)模型大鼠血漿血栓素B₂（TXB₂）、六酮前列腺素F_1α（6-keto-PGF_1α）的影響

辛思源 楊志新 郭建恩 林鳳 李春華

摘 要：本研究觀察電針對(duì)類痛經(jīng)模型大鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng)、以及血漿血栓素B2和六酮前列腺素F1α的影響，來探討針刺對(duì)胞宮疼痛緩解作用的機(jī)制，對(duì)“三陰交-懸鐘”的特異性進(jìn)行初步探討。

關(guān)鍵詞：電針;三陰交-懸鐘;痛經(jīng);扭體反應(yīng);血栓素B2;六酮前列腺素F1α

一、材料與方法

（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)選用48只清潔級(jí)健康雌性SD大鼠，鼠齡3個(gè)月，體重為（240±20）g，性成熟且未交配。飼養(yǎng)期給予普通清潔級(jí)飼料和自由飲水，室溫為（20±1）℃，濕度為（45±5）%，日光燈照射。采用隨機(jī)方法將大鼠分為：對(duì)照組、模型組、三陰交組、懸鐘組、“三陰交-懸鐘”組、非穴組，共6組，每組8只。

（二）主要儀器與實(shí)驗(yàn)試劑

G6805-Ⅱ型電針儀;一次性針灸針;5415R高速離心機(jī);MDF-u50A型超低溫冰箱;苯甲酸雌二醇注射液;縮宮素注射液;6-酮-前列腺素F1α放免試劑盒;血栓素B2放免試劑盒;乙二胺四乙酸及抑膚酶。

（三）實(shí)驗(yàn)造模

選擇處在動(dòng)情間期的大鼠，來制備實(shí)驗(yàn)性類痛經(jīng)大鼠模型。模型組及各電針組要連續(xù)10d于皮下注射苯甲酸雌二醇，期間第一、第10天每只大鼠為皮下給藥0.5mg，余下日為0.2mg，待第10天注射苯甲酸雌二醇1h后給予腹腔注射縮宮素0.2mL/只。對(duì)照組：每日每只大鼠皮下注射同等劑量的生理鹽水，待第10天皮下注射生理鹽水1h后，每只大鼠予以腹腔注射生理鹽水0.2mL。

（四）實(shí)驗(yàn)取穴及針刺方法

實(shí)驗(yàn)取穴：根據(jù)大鼠的生理特點(diǎn)、形態(tài)以及解剖的位置，依據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》中穴位的定位標(biāo)準(zhǔn)，選取相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”。三陰交穴：于大鼠后肢內(nèi)踝尖上10mm處;懸鐘穴：于大鼠后肢外踝尖上10mm處，與三陰交穴位置相對(duì);非穴：與三陰交、懸鐘穴處于同一水平，旁開對(duì)照點(diǎn)，分別于兩穴左側(cè)旁開3mm處。每組皆為雙側(cè)選穴。

電針方法：三陰交、懸鐘和非穴均為直刺3mm左右，相對(duì)穴“三陰交-懸鐘穴”為透刺，透刺方向?yàn)槿幗煌笐溢?，且要于該穴位近心端約旁開2-3mm處，再行一針，淺入皮膚即可，在兩針之間放置一棉球以防止發(fā)生短路，并用膠布固定。分別使兩針連電針儀正極、負(fù)極，刺激頻率為2/15Hz，強(qiáng)度為1mA，20min。在實(shí)驗(yàn)開始開始后的第1、3、5、7d進(jìn)行實(shí)驗(yàn)干預(yù)，共4次。對(duì)照組與模型組以同樣的方法和時(shí)間固定，不給予電針處理。

（五）大鼠扭體反應(yīng)分級(jí)

扭體反應(yīng)是目前公認(rèn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)，將扭體行為分為0～3級(jí)。大鼠前爪平放于盒底的正常探查行為視為0級(jí);大鼠身體斜向一邊視為1級(jí);大鼠后肢伸展、后爪背屈的同時(shí)軀體伸展、并伴有頻繁盆向骨側(cè)旋轉(zhuǎn)視為2級(jí);大鼠腹部肌肉收縮、后肢后伸視為3級(jí)。需記錄實(shí)驗(yàn)開始20min內(nèi)大鼠的扭體評(píng)分、扭體潛伏期。扭體總分為：0級(jí)×0分+1級(jí)×1分+2級(jí)×2分+3級(jí)×3分，扭體潛伏期：注射縮宮素后直至出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間段。

（六）實(shí)驗(yàn)取材及檢測(cè)方法

將大鼠斷頭后取血，每只大鼠取血2mL，將其血液放置于抗凝試管（30μL EDTA，40μL抑肽酶）中，經(jīng)過低溫離心（4℃，3500r/min），15min后，再將其血漿放置于-20℃環(huán)境中，以保存?zhèn)溆?。血漿中TXB2及其6-keto-PGF1α的含量分別采用常規(guī)放射免疫法來測(cè)定。

（七）統(tǒng)計(jì)分析

本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS21.0進(jìn)行分析，基礎(chǔ)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）來表示。各組間差異采用單因素方差分析或非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行比較，以P<0.05或P<0.01作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

（一）電針對(duì)扭體的影響

與對(duì)照組相比，模型組的扭體評(píng)分值明顯增高，扭體潛伏期時(shí)長(zhǎng)明顯縮短（P<0.01），證實(shí)模型大鼠已成功制備。與對(duì)照組比較，各電針組（除“三陰交-懸鐘”組外）扭體評(píng)分值明顯增高，扭體潛伏期時(shí)長(zhǎng)明顯縮短（P<0.01，P<0.01）。與模型組相比，各電針組的扭體評(píng)分值明顯減少，扭體潛伏期時(shí)長(zhǎng)明顯延長(zhǎng)（P<0.01，P<0.01）。

各電針組之間比較，“三陰交-懸鐘”組、三陰交組的扭體評(píng)分較懸鐘組、非三陰交-懸鐘組明顯降低（P<0.01），“三陰交-懸鐘”組、三陰交組、懸鐘組扭體潛伏期較非三陰交-懸鐘組明顯延長(zhǎng)（P<0.05，P<0.01）。詳見表1。

（二）電針對(duì)血漿TXB2、6-keto-PGF1α的含量以及二者比值的影響

和對(duì)照組相比，模型組血漿TXB2的含量、TXB2/6-keto-PGF1α的比值顯著增高（P<0.01），血漿6-keto-PGF1α的含量顯著降低（P<0.01）;各電針組的血漿TXB2（除“三陰交-懸鐘”組）、TXB2/6-keto-PGF1α的比值顯著增高（P<0.01），血漿6-keto-PGF1α的含量顯著降低（P<0.01）。

和模型組相比，各電針組血漿TXB2的含量、TXB2/6-keto-PGF1α的比值（除“三陰交-懸鐘”組）顯著降低（P<0.01），“三陰交-懸鐘”組6-keto-PGF1α的含量顯著增高（P<0.01），其他各電針組血漿6-keto-PGF1α的含量無明顯變化（P>0.05）。

各電針組間相比較，“三陰交-懸鐘”組、三陰交組、懸鐘組血漿中TXB2的含量、TXB2/6-keto-PGF1α的比值較非三陰交-懸鐘組顯著降低（P<0.01）;“三陰交-懸鐘”組TXB2的含量較三陰交組顯著降低（P<0.05）;“三陰交-懸鐘”組血漿TXB2/6-keto-PGF1α的比值較三陰交組和懸鐘組顯著降低（P<0.01）;“三陰交-懸鐘”組和三陰交組血漿中6-keto-PGF1α的含量較非三陰交-懸鐘組顯著增高（P<0.01），“三陰交-懸鐘”組血漿6-keto-PGF1α的含量較三陰交組、懸鐘組顯著增高（P<0.01）。詳見表2。

三、討論

文獻(xiàn)研究顯示，痛經(jīng)是針灸治療婦產(chǎn)科疾病中應(yīng)用最多的病種[1]，且三陰交-懸鐘的聯(lián)合應(yīng)用對(duì)于痛經(jīng)具有較好的治療效果。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：在痛經(jīng)大鼠的血液中，其內(nèi)在的血小板存在激活、釋放反應(yīng)的相對(duì)增強(qiáng)，從而可以導(dǎo)致血漿中TXB2升高，致使二者的比值TXB2/6-keto-PGF1α也隨之失衡，以致子宮內(nèi)缺血缺氧，痛經(jīng)發(fā)生。

各電針組血漿中TXB2的含量、及其二者的比值TXB2/6-keto-PGF1α顯著降低，可能是由于電針可以降低血漿中TXB2的含量，從而調(diào)節(jié)二者的比值以抑制血漿中血小板的聚集，使血管痙攣狀態(tài)得以改善，以緩解疼痛。“三陰交-懸鐘”組中TXB2的含量較三陰交組較明顯著降低，可能是由于電針相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”可調(diào)節(jié)血管收縮和血管舒張，并通過血管的舒縮物質(zhì)對(duì)TXB2和6-keto-PGF1α兩者的平衡加以調(diào)節(jié)，使其作用效果較單純針刺單一穴位更為明顯。

有研究結(jié)果表明：相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”具有協(xié)同增效作用[2]。電針三陰交-懸鐘能夠較為明顯的降低TXB2的含量以及TXB2/6-keto-PG F1α的比值，從而調(diào)整子宮內(nèi)在的微環(huán)境，以緩解痛經(jīng)。

本實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)：電針相對(duì)穴“三陰交-懸鐘”可調(diào)節(jié)血管舒張、收縮物質(zhì)，且與其他單穴相比，相對(duì)穴具有一定的特異性，從而進(jìn)一步證實(shí)經(jīng)穴效應(yīng)的存在，且“三陰交”“懸鐘”二者在解剖位置上陰陽表里相對(duì)，“三陰交-懸鐘”屬相對(duì)穴。故在實(shí)驗(yàn)層面進(jìn)一步提示“相對(duì)穴”與“經(jīng)穴效應(yīng)”的內(nèi)在關(guān)系。

參考文獻(xiàn)：

[1]辛思源，龐嘉，郭建恩，等.從經(jīng)穴效應(yīng)角度探討相對(duì)穴三陰交-懸鐘的內(nèi)在關(guān)系[J].遼寧中醫(yī)雜志，2017，44（12）：2631-2633.

[2]趙雅芳，李春華，嵇波，等.電針三陰交、血海對(duì)痛經(jīng)模型大鼠子宮微循環(huán)的影響[J].微循環(huán)學(xué)雜志，2011，（2）：10-14.

基金項(xiàng)目：2018年4月河北省高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目：基于三陰交-懸鐘對(duì)疼痛的調(diào)控作用探討相對(duì)穴與經(jīng)穴效應(yīng)的相關(guān)性（No.NQ2018082）

作者簡(jiǎn)介：辛思源（1986—），女，漢族，河北承德人，碩士，講師，研究方向：經(jīng)穴主治規(guī)律研究。

通訊作者：李春華（1982—），女，漢族，河北保定人，博士，副主任醫(yī)師，研究方向：穴位效應(yīng)特異性研究。