鎖陽對(duì)家兔離體空腸平滑肌收縮功能的影響

李宏民

摘要：目的? 研究鎖陽水煎液對(duì)家兔離體空腸平滑肌自發(fā)性活動(dòng)的影響。方法? 選用體重為2.0～2.5 kg的新西蘭大白兔10只，擊打家兔后腦致昏后剖開腹腔，剪取15 cm空腸，采用離體空腸平滑肌灌流的方法，觀察空腸平滑肌在不同濃度（0.005、0.01、0.015、0.02 g/ml）鎖陽水煎液作用下收縮頻率及收縮幅度變化。結(jié)果? 在正常狀態(tài)下，空腸具有興奮性、傳導(dǎo)性、收縮性、節(jié)律性，且收縮舒張頻率、平均張力、時(shí)間間隔都較穩(wěn)定，整個(gè)波形無明顯異常變化。不同濃度鎖陽水煎液用藥前后空腸平滑肌收縮頻率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。0.005 g/ml濃度鎖陽水煎液用藥前后空腸平滑肌收縮幅度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;0.01、0.015、0.02 g/ml濃度鎖陽水煎液用藥后空腸平滑肌收縮幅度低于用藥前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;不同濃度鎖陽水煎液空腸平滑肌收縮頻率和收縮幅度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論? 鎖陽水煎液濃度為0.005、0.01、0.015、0.02 g/ml時(shí)，對(duì)空腸平滑肌收縮頻率有促進(jìn)作用;鎖陽水煎液濃度為0.01、0.015、0.02 g/ml時(shí)，對(duì)空腸平滑肌收縮幅度有抑制作用，兩種作用共同協(xié)作下可增強(qiáng)家兔離體空腸平滑肌的收縮功能。

關(guān)鍵詞：鎖陽;離體家兔;空腸平滑肌;收縮活動(dòng)

中圖分類號(hào)：R965? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.19.023

文章編號(hào)：1006-1959（2020）19-0082-03

Abstract：Objective? To study the effect of Cynomoriumsongaricum decoction on the spontaneous activity of isolated rabbit jejunum smooth muscle. Methods? Ten New Zealand white rabbits weighing 2.0～2.5 kg were selected. After striking the back of the rabbits brain， the abdominal cavity was opened. The 15 cm jejunum was cut out. Using the method of isolated jejunal smooth muscle perfusion， the jejunal smooth muscle was observed to change the contraction frequency and contraction amplitude under the action of different concentrations （0.005， 0.01， 0.015， 0.02 g/ml） of Cynomoriumsongaricum decoction.Results? Under normal conditions， the jejunum had excitability， conductivity， contractility， and rhythm， and the contraction and relaxation frequency， average tension， and time interval are relatively stable， and the entire waveform had no obvious abnormal changes. There was a statistically significant difference in the contraction frequency of jejunum smooth muscle before and after the administration of Cynomoriumsongaricum sylvestris with different concentrations （P<0.05）. There was no significant difference in the contraction amplitude of jejunal smooth muscle before and after the administration of the 0.005 g/ml Cynomoriumsongaricum decoction （P>0.05）; the jejunal smooth muscle contraction amplitude was lower after the administration of the 0.01， 0.015， 0.02 g/ml Cynomoriumsongaricum decoction Before the medication， the difference was statistically significant （P<0.05）; there was no statistically significant difference in the contraction frequency and amplitude of jejunal smooth muscle with different concentrations of Cynomoriumsongaricum decoction （P>0.05）.Conclusion? Cynomorium decoction concentration of 0.005， 0.01， 0.015， 0.02 g/ml could promote the contraction frequency of jejunum smooth muscle; when the concentration of Cynomoriumsongaricum decoction was 0.01， 0.015， 0.02 g/ml， it could contract jejunal smooth muscle the amplitude had an inhibitory effect， and the two effects could enhance the contractile function of rabbit jejunum smooth muscle in vitro.

Key words：Cynomoriumsongaricum;Isolated rabbit;Jejunum smooth muscle;Contractile activity

鎖陽（Cynomoriumsongaricum）俗稱“不老藥”，又名繡鐵棒、地毛球、黃骨狼、鎖嚴(yán)子[1]、烏蘭一告亞（蒙名）、沙漠人參等，為鎖陽科（Cynomoriaceae）植物鎖陽的干燥肉質(zhì)莖，始載于《本草衍義補(bǔ)遺》及《本草綱目》中。鎖陽具有補(bǔ)腎陽、益精血、潤(rùn)腸通便的功效，多用于腎陽不足，腰膝酸軟，腸燥便秘等疾病的治療[2]。藥理學(xué)研究顯示[3-5]，鎖陽具有提高性生殖能力、提高免疫能力、抗氧化抗衰老、抗糖尿病、抗應(yīng)激、抗疲勞、抑制艾滋病病毒、食療、保健等作用，現(xiàn)被廣泛應(yīng)用于各類中藥復(fù)方中，其系列產(chǎn)品涵蓋醫(yī)藥、食品、發(fā)酵等各個(gè)方面，是河西走廊地區(qū)的道地藥材之一，也是一味傳統(tǒng)的名貴補(bǔ)益中藥材，具有非常高的藥用價(jià)值。但在消化系統(tǒng)研究方面，國(guó)內(nèi)有關(guān)鎖陽對(duì)離體空腸活動(dòng)影響的作用機(jī)制尚不明確。本研究基于鎖陽“潤(rùn)腸通便”的功效，采取離體空腸平滑肌灌流的方法，探討不同濃度鎖陽水煎液對(duì)家兔離體空腸平滑肌自發(fā)性活動(dòng)的影響，為臨床用藥提供合理依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1儀器? TME BL-420F生物信息采集與分析系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司），TME SV-8離體組織器官恒溫灌流裝置（成都泰盟科技有限公司），F(xiàn)T-100生物張力傳感器（成都泰盟科技有限公司），HW-500超級(jí)恒溫水浴槽（成都泰盟科技有限公司），常用手術(shù)器械一套。

1.2藥品? NaCl（天津益仁達(dá)化工有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20160620），10%KCl（煙臺(tái)市雙雙化工有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20150402），10%MgSO4·7H2O（天津市凱信化學(xué)工業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20170603），5%NaH2PO4·2H2O（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20161225），NaHCO3（天津市凱信化學(xué)工業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20161208），無水CaCl2（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20170413），葡萄糖（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20170310）。

1.3臺(tái)氏液的制備? 1000 ml臺(tái)氏液含：NaCl 8.0g、10% KCl 2.0 ml（0.2 g）、10% MgSO4·7H2O 2.6 ml（0.26 g）、5 %NaH2PO4·2H2O 1.3 ml（0.065 g）、NaHCO3 1.0 g、無水CaCl2 1.8 ml（0.2 g）、葡萄糖1.0 g。

1.4鎖陽水煎液的制備? 稱取50 g鎖陽（由惠仁堂連鎖藥店提供），加250 ml蒸餾水，文火煎制，抽濾、濃縮至100 ml，裝瓶消毒，即得含生藥0.5 g/ml的鎖陽水煎液[4]。

1.5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物? 新西蘭大白兔（張掖市譽(yù)誠醫(yī)藥生物科技有限公司提供）10只，雌雄不限，體重1.5～2.0 kg。實(shí)驗(yàn)前12 h禁食，飲水不限。

1.6家兔離體空腸平滑肌標(biāo)本的制備? 用木槌擊打家兔頭部，昏迷后快速沿腹正中線開腹，迅速取出空腸15 cm，剪成約1.5～2.0 cm的腸段數(shù)段，置4℃新鮮臺(tái)氏液中并通入空氣備用[5]。將家兔的空腸段隨機(jī)分成對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，在灌流浴槽中注入37℃的臺(tái)氏液，將空腸管兩端對(duì)角中一端用小鉤鉤住固定于張力換能器上，另一端固定于通氣鉤上，將通氣小鉤連同腸肌放入浴槽中，定容10 ml。張力換能器與生物信息采集與分析系統(tǒng)通道連接。選擇電腦實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目中“消化道平滑肌生理特性”實(shí)驗(yàn)?zāi)K，設(shè)置控制參數(shù)：T 3 s;掃描速度：2.50 s/div;濾波F 50 Hz;增益G 1 mv。先觀察正常情況下離體空腸平滑肌的自主收縮狀態(tài)10 min，然后向離體組織器官恒溫灌流裝置中逐次加入0.5 g/ml鎖陽水煎液0.1、0.2、0.3、0.4 ml使10 ml臺(tái)氏液中含藥量分別達(dá)到0.005、0.01、0.015、0.02 g/ml，同一濃度分別作用于不同腸管，重復(fù)10次，記錄腸管的收縮變化情況。在每個(gè)劑量作用下出現(xiàn)反應(yīng)后，用臺(tái)氏液沖洗標(biāo)本3次，待腸管運(yùn)動(dòng)恢復(fù)正常后再進(jìn)行下個(gè)劑量的處理。

1.7實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)測(cè)量? 測(cè)量1 min內(nèi)曲線全部收縮波的平均幅度作為收縮力（g），測(cè)量1 min內(nèi)曲線收縮波的個(gè)數(shù)作為收縮頻率（次/min）。于給藥前和給藥后2 min分別對(duì)收縮力和收縮頻率進(jìn)行測(cè)量。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1正常狀態(tài)下空腸平滑肌的收縮舒張情況? 在正常狀態(tài)下，空腸具有興奮性、傳導(dǎo)性、收縮性、節(jié)律性，且收縮舒張頻率、平均張力、時(shí)間間隔都較穩(wěn)定，整個(gè)波形無明顯異常變化，見圖1。

2.2不同濃度鎖陽水煎液對(duì)家兔離體空腸平滑肌的影響? 將濃度為0.005、0.01、0.015、0.02 g/ml的鎖陽水煎液分別作用于正常狀態(tài)下的空腸平滑肌，測(cè)定腸管的收縮頻率，結(jié)果顯示不同濃度鎖陽水煎液用藥前后空腸平滑肌收縮頻率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。0.005 g/ml濃度鎖陽水煎液用藥前后空腸平滑肌收縮幅度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），0.01、0.015、0.02 g/ml濃度鎖陽水煎液用藥后空腸平滑肌收縮幅度低于用藥前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。不同濃度鎖陽水煎液空腸平滑肌收縮頻率和收縮幅度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3討論

腸平滑肌自發(fā)性收縮活動(dòng)的產(chǎn)生和傳導(dǎo)易受神經(jīng)遞質(zhì)、離子環(huán)境、胃腸激素等生物活性物質(zhì)和藥物的影響[6]，其次小腸平滑肌的活動(dòng)與其電活動(dòng)密切相關(guān)，平滑肌上分布有M、β、α等多個(gè)受體，而興奮M受體后可引發(fā)電位敏感性Ca2+通道開放，促使Ca2+濃度偏高，進(jìn)而激活肌纖蛋白-肌凝蛋白-ATP系統(tǒng)，使平滑肌發(fā)生收縮。胃腸平滑肌離體后，雖然失去了植物性神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)控，但其運(yùn)動(dòng)依然受到壁內(nèi)神經(jīng)叢的局部調(diào)節(jié)，因此離體后仍可以進(jìn)行正常的收縮舒張運(yùn)動(dòng)。

鎖陽，作為名貴的補(bǔ)益中藥材，其化學(xué)成分復(fù)雜多樣，包括黃酮類、三萜類、揮發(fā)性成分、有機(jī)酸、糖和糖苷、鞣質(zhì)、無機(jī)離子等[7]，其中對(duì)平滑肌起主要作用的是無機(jī)離子[8]、多糖[9]等成分。小腸自發(fā)節(jié)律性收縮活動(dòng)是由十二指腸縱行肌和環(huán)行肌之間的Cajal細(xì)胞產(chǎn)生的慢波（slow wave，SW）節(jié)律來起步的[10]，任何刺激（如化學(xué)物質(zhì)或擴(kuò)張刺激）作用于空腸平滑肌，都是在SW的基礎(chǔ)上產(chǎn)生動(dòng)作電位，進(jìn)而引起平滑肌收縮[11]。鎖陽中的有效成分無機(jī)離子能起到興奮平滑肌的作用[12]，其中以K、Na、Cl、Mg等含量較高，負(fù)離子測(cè)定結(jié)果以Cl-、SO42-、PO42-含量較高，且可溶性無機(jī)物含量約為生藥量的7%，但排除鞣質(zhì)成分。其次，鎖陽多糖能加快腸蠕動(dòng)，促進(jìn)小腸推進(jìn)功能，且成劑量依賴性[13]。本研究結(jié)果顯示，不同濃度鎖陽水煎液用藥前后收縮頻率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說明0.005、0.01、0.015、0.02 g/ml濃度時(shí)，鎖陽對(duì)平滑肌收縮頻率有促進(jìn)作用，且隨著給藥濃度的增加，平滑肌收縮頻率有減少趨勢(shì)，提示在高濃度下，平滑肌可能處于低滲環(huán)境，進(jìn)而引起腸功能紊亂，與張百舜等[13]研究結(jié)論相似。

平滑肌張力產(chǎn)生的機(jī)制主要有：①平滑肌細(xì)胞的Ca2+通道：Ca2+內(nèi)流產(chǎn)生動(dòng)作電位，肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加途徑為肌漿網(wǎng)釋放和從細(xì)胞外攝取[14];②橫橋循環(huán)與平滑肌張力的維持;③平滑肌收縮的神經(jīng)體液調(diào)節(jié)[19]。本研究中在0.005 g/ml濃度鎖陽水煎液用藥前后空腸平滑肌收縮幅度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），0.01、0.015、0.02 g/ml濃度鎖陽水煎液用藥后空腸平滑肌收縮幅度低于用藥前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說明在0.01、0.015、0.02 g/ml濃度下，鎖陽對(duì)收縮幅度有抑制作用，其機(jī)制可能是選擇性的激動(dòng)M受體，產(chǎn)生M樣作用[15]，導(dǎo)致平滑肌舒張，張力減小;也可能是肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加而誘發(fā)的平滑肌收縮，且隨著劑量加大抑制作用增強(qiáng)[16]。除此之外，Ca2+還可引起腸管平滑肌痙攣，導(dǎo)致平滑肌張力異常變化。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，不同濃度鎖陽水煎液空腸平滑肌收縮頻率和收縮幅度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），天匯鎖陽水煎液能促進(jìn)平滑肌收縮頻率，抑制平滑肌收縮幅度，在兩種作用的共同協(xié)調(diào)下，產(chǎn)生溫和的“潤(rùn)腸通便”作用，不至于引起腹瀉。

綜上所述，鎖陽水煎液濃度為0.005、0.01、0.015、0.02 g/ml時(shí)，對(duì)空腸平滑肌收縮頻率有促進(jìn)作用;鎖陽水煎液濃度為0.01、0.015、0.02 g/ml時(shí)，對(duì)空腸平滑肌收縮幅度有抑制作用，兩種作用共同協(xié)作下可增強(qiáng)家兔離體空腸平滑肌的收縮功能。

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收稿日期：2020-07-13;修回日期：2020-07-25

編輯/劉歡