金屬鋁材料的細(xì)胞毒性和刺激致敏性研究

林鐘石 徐良 鐘文雨

摘要：目的? 評(píng)價(jià)金屬鋁的細(xì)胞毒性、刺激性和皮膚致敏性，為金屬鋁材料在醫(yī)療器械領(lǐng)域的制造和應(yīng)用提供安全依據(jù)。方法? 本研究模擬金屬鋁材料在醫(yī)療器械中的常規(guī)應(yīng)用，采用拋光處理后的金屬鋁片評(píng)估該金屬鋁片的細(xì)胞毒性和刺激致敏性。細(xì)胞毒性試驗(yàn)選用濃度1×105個(gè)/ml生長(zhǎng)良好的L929小鼠成纖維細(xì)胞懸液使用MTT法檢測(cè)，并計(jì)算細(xì)胞存活率;刺激試驗(yàn)將9只新西蘭兔通過(guò)完全隨機(jī)分成樣品極性浸提液和空白對(duì)照組、樣品非極性浸提液和空白對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，每組3只。將受試液滴到紗布上，貼敷于脊柱兩側(cè)固定4 h后去除，觀察水清洗后1、24、48和72 h皮膚表面，計(jì)算原發(fā)性刺激并后確定反應(yīng)類型;皮膚致敏試驗(yàn)將50只豚鼠通過(guò)完全隨機(jī)分成樣品極性浸提液組、空白對(duì)照組、樣品非極性浸提液組、空白對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只。經(jīng)動(dòng)物肩膀內(nèi)側(cè)注射受試液皮內(nèi)誘導(dǎo)，觀察貼敷結(jié)束后24 h和48 h受試部位情況及Magnusson和Kligman評(píng)級(jí)。結(jié)果? 細(xì)胞毒性試驗(yàn)中L929細(xì)胞與樣品浸提液接觸24h后與空白對(duì)照中的細(xì)胞顯微鏡下觀察無(wú)形態(tài)上的差異且噻唑蘭檢測(cè)存活率大于70%;刺激試驗(yàn)中，貼敷結(jié)束后1、24、48和72h樣品浸提液的皮膚反應(yīng)均為無(wú)紅斑無(wú)水腫;皮膚致敏試驗(yàn)中，貼敷結(jié)束后24和48 h樣品浸提液的皮膚反應(yīng)均為無(wú)紅斑無(wú)水腫。結(jié)論? 樣品浸提液無(wú)潛在的細(xì)胞毒性、刺激性及皮膚致敏性，金屬鋁的生物安全性符合現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于與完整皮膚接觸和部分與黏膜接觸（≤24 h）的表面器械的生物安全性要求，但其在低pH環(huán)境下的使用，還需要進(jìn)一步的研究。

關(guān)鍵詞：鋁;醫(yī)療器械;細(xì)胞毒性;刺激性;皮膚致敏性

中圖分類號(hào)：TG113.2? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.19.019

文章編號(hào)：1006-1959（2020）19-0062-06

Abstract：Objective? To evaluate the cytotoxicity， irritation and skin sensitization of metallic aluminum， and provide a safety basis for the manufacture and application of metallic aluminum materials in the field of medical devices.Methods? This study simulates the conventional application of metal aluminum materials in medical devices， and use polished metal aluminum sheets to evaluate the cytotoxicity and irritation sensitization of the metal aluminum sheets. In the cytotoxicity test， a well-growing L929 mouse fibroblast suspension with a concentration of 1×105 cells/ml was used to detect the MTT method， and the cell survival rate was calculated; in the stimulation test， 9 New Zealand rabbits were completely randomly divided into sample polar extracts and blank control group， sample non-polar extract， blank control group and positive control group， 3 in each group. Drop the test solution onto gauze， stick it on both sides of the spine and fix it for 4 h before removing. Observing the skin surface at 1， 24， 48 and 72 h after washing with water， calculate the primary irritation and determine the type of reaction; skin sensitization in the experiment， 50 guinea pigs were completely randomly divided into a sample polar extract group， a blank control group， a sample non-polar extract group， a blank control group and a positive control group， with 10 in each group. Intradermal induction of the test solution was injected into the inside of the animal's shoulder， and the condition of the test site and the Magnusson and Kligman ratings were observed 24 h and 48 h after the application.Results? In the cytotoxicity test， the L929 cells were in contact with the sample extract for 24 h， and there was no morphological difference between the cells in the blank control， and the survival rate of thiazolyl was greater than 70%; In the irritation test， the skin reaction of the sample extract at 1， 24， 48 and 72 h after the application was no erythema and no edema; in the skin sensitization test， the skin reaction of the sample extract at 24 and 48 h after the application all were without erythema and edema.Conclusion? The sample extract had no potential cytotoxicity， irritation and skin sensitization. The biological safety of metallic aluminum meet the existing standards. The biological safety of surface devices that were in contact with intact skin and partly in contact with mucosa （≤24 h） However， its use in a low pH environment requires further research.

Key words：Aluminum;Medical device;Cytotoxicity;Irritation;Skin sensitization

金屬鋁作為大自然最豐富的元素之一，因?yàn)槠涞统杀竞吞厥獾臋C(jī)械特性被廣泛用于社會(huì)生活? 中[1，2]，含有鋁元素的合金材料還擁有較好的血液相容性和抗菌性[3，4]。但鋁元素超標(biāo)時(shí)會(huì)對(duì)人體造成傷害，如帕金森氏病和阿爾茲海默氏病[5，6]。有報(bào)道? 稱[7]，細(xì)胞內(nèi)鋁離子濃度達(dá)到250 μmol/L會(huì)促使大腦細(xì)胞內(nèi)的微管和微管相關(guān)蛋白高度磷酸化，這是阿爾茲海默氏病的一個(gè)主要臨床病理信號(hào)。本研究模擬金屬鋁材料在醫(yī)療器械中的常規(guī)應(yīng)用，采用拋光處理后的金屬鋁片通過(guò)細(xì)胞毒性試驗(yàn)、刺激試驗(yàn)、皮膚致敏試驗(yàn)評(píng)估該金屬鋁片的細(xì)胞毒性和刺激致敏性，為拋光后的金屬鋁材料從醫(yī)療器械監(jiān)管的角度提供安全性依據(jù)。

1材料和方法

1.1材料? 金屬鋁材料（深圳圣諾醫(yī)療設(shè)備有限公司）、L929小鼠成纖維細(xì)胞（中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù)）、MEM培養(yǎng)基（Thermo Fisher Scientific，美國(guó)）、胎牛血清（Thermo Fisher Scientific，美國(guó)）、噻唑藍(lán)（MTT）（Merck KgaA，德國(guó)）、二甲基亞砜（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）、異丙醇（廣州化學(xué)試劑廠）、0.9%氯化鈉注射液（四川科倫藥業(yè)股份有限公司）、棉籽油（Thermo Fisher Scientific，美國(guó)）、2，4-二硝基氯苯（Merck KgaA，德國(guó)）、弗氏完全佐劑（FCA）（Merck KgaA，德國(guó)）

1.2儀器? CO2培養(yǎng)箱（Memmert GmbH，德國(guó)）、倒置顯微鏡（Leica Microsystems Dmi8，德國(guó)）、酶標(biāo)儀（Beckman Coulter，美國(guó)）。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物? 選取SPF級(jí)白化豚鼠50只，雌雄兼用，雌鼠未產(chǎn)并無(wú)孕，體重300～400 g，周齡8周，另選新西蘭兔9只，雌性未產(chǎn)并無(wú)孕，體重2.6～? ? ? 2.8 kg，周齡17周，來(lái)源廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，每天供給由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的飼料和城市生活用水，室溫控制在20 ℃～26 ℃，相對(duì)濕度控制在40%～70%。

1.4方法

1.4.1鋁片浸提液制備? 將金屬鋁（>99.5%）制成? ? 4 cm×4 cm×0.9 cm立方體的鋁片，按照6 cm2/ml的比例分別浸沒入非極性浸提介質(zhì)（棉籽油、含血清培養(yǎng)液）和極性浸提介質(zhì)（生理鹽水、不含血清培養(yǎng)液）中，置于帶蓋的容器中37 ℃條件下振蕩浸提后備用。

1.4.2細(xì)胞毒性試驗(yàn)? 將濃度1×105個(gè)/ml生長(zhǎng)良好的L929小鼠成纖維細(xì)胞懸液接種96孔板，在5%CO2，37 ℃環(huán)境下培育24 h以使細(xì)胞形成近匯合狀態(tài)。棄去96孔板中培養(yǎng)液，將陰性對(duì)照、空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照（10%二甲基亞砜）和樣品浸提液（浸提介質(zhì)：含10%胎牛血清的MEM培養(yǎng)液）用移液器分別加入96孔板，每孔100 μl。5%CO2，37 ℃環(huán)境下繼續(xù)培育24 h，然后棄去受試液。每孔中加入50 μl MTT溶液，然后再培育2 h。培育結(jié)束后，棄去MTT溶液，每孔中加入100 μl的異丙醇以溶解MTT與活細(xì)胞反應(yīng)生成的甲瓚沉淀。振蕩混勻后，用酶標(biāo)儀在570 nm波長(zhǎng)（參比波長(zhǎng)650 nm）下測(cè)量每孔溶液的吸光度并計(jì)算存活率。

1.4.3刺激試驗(yàn)? 將9只新西蘭兔通過(guò)完全隨機(jī)分成樣品極性浸提液和空白對(duì)照（極性）組、樣品非極性浸提液和空白對(duì)照（非極性）組和陽(yáng)性對(duì)照組（2，4 -二硝基氯苯）共3組，每組3只。去除動(dòng)物脊柱兩側(cè)被毛并稱重。再將0.5 ml受試液滴到紗布上，貼敷于脊柱兩側(cè)。用封閉性繃帶固定貼敷片4h。貼敷結(jié)束后去除紗布，標(biāo)記接觸部位，并用水清洗以去除殘留受試液。貼敷結(jié)束后分別在1、24、48和72 h觀察皮膚表面，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)ISO 10993-10 2010中皮膚反應(yīng)記分系統(tǒng)對(duì)水腫反應(yīng)和皮膚紅斑情況進(jìn)行記分，計(jì)算出原發(fā)性刺激記分，最后確定反應(yīng)類型。

1.4.4 皮膚致敏試驗(yàn)? 將50只豚鼠通過(guò)完全隨機(jī)分成樣品極性浸提液組、空白對(duì)照組（極性）、樣品非極性浸提液組、空白對(duì)照組（非極性）和陽(yáng)性對(duì)照組共5組，每組10只。經(jīng)動(dòng)物肩膀內(nèi)側(cè)注射0.1 ml受試液。注射液分別為：溶液1（浸提介質(zhì)與弗氏完全佐劑等比例混合的穩(wěn)態(tài)乳化劑）、溶液2（受試溶液）、溶液3（溶液1和溶液2等比例混合后的穩(wěn)定性乳化劑）。皮內(nèi)誘導(dǎo)6 d后，導(dǎo)入10%的月桂醇硫酸鈉到受試部位。導(dǎo)入后24h，將吸附了受試液的紗布貼敷與誘導(dǎo)注射部位進(jìn)行局部誘導(dǎo)48 h。誘導(dǎo)結(jié)束后13 d，將吸附了受試液的紗布貼敷于動(dòng)物的上腹（誘導(dǎo)期未測(cè)試部位）24 h。貼敷結(jié)束后分別在24和? 48 h觀察受試部位，再根據(jù)Magnusson和Kligman分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)級(jí)。

1.5評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1細(xì)胞毒性試驗(yàn)? 活細(xì)胞減少導(dǎo)致細(xì)胞的活性下降，這與生成的甲瓚的含量有關(guān)，從而影響570 nm下測(cè)量的吸光度值。按下式計(jì)算存活率：存活率（%）=100×OD570e/OD570b，OD570e表示試驗(yàn)樣品100% 浸提液光密度平均值，OD570b表示空白光密度平均值，如存活率下降到<空白的70%，則具有潛在的細(xì)胞毒性。

1.5.2刺激試驗(yàn)? 在除去敷貼片后1、24、48和72 h分別觀察皮膚反應(yīng)，對(duì)每個(gè)接觸部位在每個(gè)規(guī)定時(shí)間內(nèi)皮膚紅斑和水腫反應(yīng)情況進(jìn)行評(píng)分，見表1。在72 h評(píng)分后，分別將每只動(dòng)物受試液在24、48和? 72 h引起的全部紅斑和水腫記分相加，再將所有計(jì)分之和除以6（兩個(gè)試驗(yàn)/觀察部位，3個(gè)時(shí)間點(diǎn)）計(jì)算出某一動(dòng)物的原發(fā)刺激指數(shù)。將每只動(dòng)物全部原發(fā)性刺激記分相加后再除以動(dòng)物總數(shù)（一般為3）得出試驗(yàn)樣品原發(fā)性刺激指數(shù)。當(dāng)采用空白或陰性對(duì)照時(shí)，計(jì)算出對(duì)照原發(fā)性刺激記分，將試驗(yàn)材料原發(fā)性刺激記分減去該記分，即得出原發(fā)性刺激記分。反應(yīng)類型：0～0.4分極輕微，0.5～1.9分輕度，2～4.9分中度，5～8分重度。

1.5.3皮膚致敏試驗(yàn)? 除去敷貼片后24和48 h觀察試驗(yàn)組和對(duì)照組動(dòng)物激發(fā)部位皮膚，參照Magnusson和Kligman分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)每一激發(fā)部位和每一觀察時(shí)間皮膚紅斑和水腫反應(yīng)進(jìn)行分級(jí)并記錄。0級(jí)敷貼試驗(yàn)反應(yīng)無(wú)明顯改變，1級(jí)散發(fā)性或斑點(diǎn)狀紅斑，2級(jí)中度融合性紅斑，3級(jí)重度紅斑和/或水腫。陰性對(duì)照組動(dòng)物等級(jí)小于1，而試驗(yàn)組中等級(jí)≥1時(shí)一般提示致敏。如陰性對(duì)照組動(dòng)物等級(jí)≥1時(shí)，試驗(yàn)組動(dòng)物反應(yīng)超過(guò)陰性對(duì)照組中最嚴(yán)重的反應(yīng)則認(rèn)為致敏。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 利用Excel軟件對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分組，分組方法采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)。

2結(jié)果

2.1細(xì)胞毒性試驗(yàn)? 鋁片浸提液接觸細(xì)胞24 h后細(xì)胞胞漿內(nèi)有離散顆粒，無(wú)細(xì)胞溶解。與空白對(duì)照中的細(xì)胞形態(tài)顯微鏡下觀察無(wú)差異，見圖1，而且其存活率大于70%，見圖2，表2，無(wú)潛在的細(xì)胞毒性。

2.2刺激試驗(yàn)? 刺激試驗(yàn)貼敷結(jié)束后1、24、48和? 72 h，兩組樣品浸提液和對(duì)照組動(dòng)物皮膚在觀察期內(nèi)的反應(yīng)均為無(wú)紅斑、無(wú)水腫，并未發(fā)現(xiàn)皮膚部位的其他異常情況，反應(yīng)記分均為0分，確定反應(yīng)類型為極輕微，見表3、圖3。

2.3皮膚致敏試驗(yàn)? 貼敷結(jié)束后24 h和48 h，兩組樣品浸提液組動(dòng)物皮膚無(wú)明顯改變，反應(yīng)分級(jí)均為0級(jí)，未觀察到致敏反應(yīng)，見表4、圖4。

3討論

醫(yī)療器械按照其生物安全要求從低到高被分為表面器械、外部接入器械和植入器械3大類，每個(gè)大類下又按照與人體的接觸時(shí)間長(zhǎng)短分為了短暫接觸（≤24 h）、長(zhǎng)期接觸（>24 h～30 d）和持久接觸（>30 d）3個(gè)小類。醫(yī)療器械的生物安全等級(jí)要求越高，與人體接觸時(shí)間越長(zhǎng)，其需要評(píng)價(jià)的生物學(xué)評(píng)價(jià)終點(diǎn)就越多。同理，相關(guān)生物材料能夠滿足的生物學(xué)安全性評(píng)價(jià)終點(diǎn)越多，其能被應(yīng)用于醫(yī)療器械的范圍就越廣。細(xì)胞毒性和刺激性和皮膚致敏性是現(xiàn)行國(guó)際法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)醫(yī)療器械及其材料生物安全性的基礎(chǔ)要求。根據(jù)ISO 10993-1，生物安全性能夠滿足這3項(xiàng)生物安全性評(píng)價(jià)終點(diǎn)的生物材料能夠被應(yīng)用于與完整皮膚接觸和部分與黏膜接觸（≤24 h）的表面器械。

細(xì)胞毒性試驗(yàn)按照與樣品與細(xì)胞的接觸方式分為直接接觸法、間接接觸法和浸提液法。其中間接接觸法只適合于對(duì)生物材料細(xì)胞毒性初篩的定性評(píng)價(jià)，能夠?qū)ι锊牧线M(jìn)行準(zhǔn)確的定量評(píng)價(jià)的只有直接接觸法和浸提液法。然而，金屬材料的密度較大，在直接接觸法中會(huì)導(dǎo)致材料下方的細(xì)胞機(jī)械性損傷，會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性的假陽(yáng)性結(jié)果。因此本研究采用浸提液法作為金屬鋁材料的細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)手段。皮膚致敏試驗(yàn)也分為3種，分別為豚鼠最大劑量試驗(yàn)、封閉式貼敷試驗(yàn)和小鼠局部淋巴結(jié)試驗(yàn)，其中豚鼠最大劑量試驗(yàn)為最為最敏感的皮膚致敏性檢測(cè)手段，而且適用于不能滲透皮膚的金屬物質(zhì)的評(píng)價(jià)，因此，本研究中選擇豚鼠最大劑量試驗(yàn)作為金屬鋁材料皮膚致敏性評(píng)價(jià)手段。

由于鋁元素對(duì)人體的神經(jīng)會(huì)產(chǎn)生傷害，國(guó)內(nèi)外鮮有關(guān)于金屬鋁在醫(yī)療器械方面應(yīng)用的研究。然而當(dāng)金屬鋁材料暴露于大氣中時(shí)，由于鋁的性質(zhì)非?；顫?，會(huì)在其表面形成一層氧化鋁的保護(hù)膜厚度，厚度約為0.5～4 μm，而氧化鋁在國(guó)內(nèi)外的研究報(bào)道中都具有良好的生物安全性。Kahbasi S等[8]用人真皮成纖維細(xì)胞和人成骨細(xì)胞與包裹了氧化鋁外殼的納米微球接觸，結(jié)果發(fā)現(xiàn)氧化鋁有著很好的生物相容性。Kahbasi S等[9]將氧化鋁納米微球的浸提液與人紅細(xì)胞接觸，沒有觀察到明顯的溶血現(xiàn)象。Alejandro Carnicer-Lombarte A等[10]測(cè)定了一種以氧化鋁為主要成分的電極片的體外生物安全性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該電極片對(duì)L929小鼠成纖維細(xì)胞和PC-12神經(jīng)細(xì)胞都沒有毒性。王佳寧將氧化鋁陶瓷復(fù)合材料與人牙周膜細(xì)胞接觸，沒有觀察到氧化鋁對(duì)人牙周膜細(xì)胞的細(xì)胞增殖、凋亡和骨誘導(dǎo)活性有任何影響[11]。此外，氧化鋁由于其化學(xué)惰性、高強(qiáng)度和硬度也被廣泛的用于牙科植入物和外科假體[12]。

本研究采用細(xì)胞毒性試驗(yàn)、刺激試驗(yàn)和皮膚致敏試驗(yàn)觀察了金屬鋁材料的生物安全性，結(jié)果表明，金屬鋁材料作為生物材料能夠滿足現(xiàn)行法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)與完整皮膚接觸和部分與黏膜接觸（≤24 h）的表面器械的生物安全性要求。由此推測(cè)，金屬鋁在表面自然氧化形成的這層氧化鋁的保護(hù)膜能一定程度上防止金屬鋁中鋁元素的釋出，從而使金屬鋁具有一定的生物安全性。但Hashimoto M等[13]將氧化鋁納米微球與巨噬細(xì)胞RAW264接觸時(shí)，發(fā)現(xiàn)在低pH的環(huán)境下，氧化鋁也會(huì)釋放鋁離子從而干擾細(xì)胞的正常功能。因此，金屬鋁材料如果作為在低pH環(huán)境下使用的醫(yī)療器械，例如胃腸道內(nèi)窺鏡，其毒性作用還需進(jìn)一步研究。此外，由于金屬鋁材料天然形成的氧化膜厚度較薄，且耐磨性和抗腐蝕性較差，如若要增加金屬鋁材料的生物安全性，可以通過(guò)陽(yáng)極氧化[14]、等離子體噴涂[15]等方法增加其表面氧化鋁保護(hù)膜的厚度和強(qiáng)度。

根據(jù)上述的研究，拋光后的金屬鋁材料能夠滿足現(xiàn)行國(guó)際法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于與完整皮膚接觸和部分與黏膜接觸（≤24 h）的表面器械的生物安全性要求，但在低pH環(huán)境下的毒理作用還需要進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]Barceló J，Poschenrieder C.Fast root growth responses，root exudates，and internal detoxification as clues to the mechanisms of aluminium toxicity and resistance：a review[J].Environmental&Experimental Botany，2002，48（1）：75-92.

[2]Krejpcio Z，Wojciak.The Influence of Al 3+Ions on Pepsin and Trypsin Activity in Vitro[J].Polish Journal of Environmental Studies，2002（11）：251-254.

[3]Gugala N，Lemire JA，Turner RJ.The efficacy of different anti-microbial metals at preventing the formation of，and eradicating bacterial biofilms of pathogenic indicator strains[J].Journal of Antibiotics，2017，70（6）：775-780.

[4]Tanaka Y，Kurashima K，Saito H，et al.In vitro short-term platelet adhesion on various metals[J].Journal of Artificial Organs，2009，12（3）：182-186.

[5]Liu Y，Bi A，Gao T，et al.A novel self-assembled nanoprobe for the detection of aluminum ions in real samples and living cells[J].Talanta，2018（194）：38-45.

[6]Chen YC，Lee IL，Sung YM，et al.Colorimetric detection of Al3+ions using triazole-ether functionalized gold nanoparticles[J].Talanta，2013，117（Complete）：70-74.

[7]Shevtsov PN，Shevtsova EF，Savushkina OK，et al.Influence of Al3+， Fe3+ and Zn2+ Ions on Phosphorylation of Tubulin and Microtubulo-Associated Proteins of Rat Brain[J].Bulletin of Experimental Biology&Medicine，2018，165（4）：512-515.

[8]Mestres G，Espanol M，Xia W，et al.Evaluation of Biocompatibility and Release of Reactive Oxygen Species of Aluminum Oxide-Coated Materials[J].ACS Omega，2016，1（4）：706-713.

[9]Kahbasi S，Samadbin M，Attar F，et al.The effect of aluminum oxide on red blood cell integrity and hemoglobin structure at nanoscale[J].International Journal of Biological Macromolecules，2019（138）：800-809.

[10]Carnicer-Lombarte A，Lancashire HT，Vanhoestenberghe A.In vitro biocompatibility and electrical stability of thick-film platinum/gold alloy electrodes printed on alumina[J].J Neural Eng，2017，14（3）：36012.

[11]王佳寧.氧化鋯氧化鋁陶瓷復(fù)合材料對(duì)人牙周膜細(xì)胞增殖、凋亡和骨誘導(dǎo)活性的影響[J].中國(guó)組織工程研究，2017，21（26）：4155-4159.

[12]Wong HM，Zhao Y，Tam V，et al.In vivo stimulation of bone formation by aluminum and oxygen plasma surface-modified magnesium implants[J].Biomaterials，2013，34（38）：9863-9876.

[13]Hashimoto M，Imazato S.Cytotoxic and genotoxic characterization of aluminum and silicon oxide nanoparticles in macrophages[J].Dental Materials，2015，31（5）：556-564.

[14]Ekwe NB，Aloko DF.Anodization of Aluminum[J].International Journal of Scientific and Research Publications（IJSRP），2013，3（3）：1-3.

[15]Khalid M，Mujahid M，Khan AN，et al.Plasma Sprayed Alumina Coating on Ti6Al4V Alloy for Orthopaedic Implants：Microstructure and Phase Analysis[J].Key Engineering Materials，2012（510-511）：547-553.

收稿日期：2020-08-06;修回日期：2020-08-14

編輯/肖婷婷