皰疹膏皮膚用藥安全性實(shí)驗(yàn)研究

沈德新 李登攀 秦臻 岳瑋 屈俊 初霞

[摘要] 目的 觀察皰疹膏皮膚用藥的安全性。 方法 選用健康成年新西蘭兔8只，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法分為完整皮膚組和破損皮膚組，每組4只，采用同體左右對(duì)照法分組涂布皰疹膏和皰疹膏基質(zhì)（每只0.5 g）進(jìn)行皮膚刺激試驗(yàn)，14 d后對(duì)給藥皮膚進(jìn)行組織病理學(xué)檢查;選用健康成年豚鼠40只，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法分為皰疹膏組、基質(zhì)組、二硝基氯苯組，皰疹膏組20只，其余組各10只，分組涂布皰疹膏（每只0.2 g）、皰疹膏基質(zhì)（每只0.2 g）、2，4-二硝基氯苯（每只0.2 mL）進(jìn)行皮膚致敏試驗(yàn)，2個(gè)試驗(yàn)均以紅斑和水腫情況為評(píng)價(jià)指標(biāo);選用新西蘭兔24只，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法分為皰疹膏組、基質(zhì)組、空白對(duì)照組，每組8只，分組涂布10 g/kg、2 g/kg、2 mL/kg的皰疹膏、皰疹膏基質(zhì)、生理鹽水進(jìn)行皮膚急性毒性試驗(yàn)，觀察各組新西蘭兔14 d內(nèi)體質(zhì)量變化、中毒反應(yīng)及死亡情況。給藥后第14天，對(duì)全部新西蘭兔進(jìn)行大體解剖，如有毒性反應(yīng)和大體剖檢異常，則進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。 結(jié)果 皰疹膏對(duì)新西蘭兔完整皮膚和破損皮膚均無(wú)刺激作用，皮膚組織病理學(xué)檢查正常;皰疹膏對(duì)豚鼠無(wú)皮膚過(guò)敏反應(yīng)，致敏強(qiáng)度評(píng)分均為0;對(duì)新西蘭兔未見(jiàn)急性毒性反應(yīng)，解剖后組織器官未見(jiàn)明顯異常，體重增長(zhǎng)符合生長(zhǎng)規(guī)律。皰疹膏組與空白對(duì)照組比較，新西蘭兔體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。 結(jié)論 皰疹膏無(wú)皮膚刺激性、過(guò)敏性、急性毒性，局部皮膚用藥安全性良好，可以應(yīng)用于臨床。

[關(guān)鍵詞] 皰疹膏;皮膚刺激性;過(guò)敏性;急性毒性試驗(yàn);安全性

[中圖分類號(hào)] R285? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2020）09（a）-0024-05

[Abstract] Objective To observe the safety of skin medication of herpes ointment. Methods Eight healthy adult New Zealand rabbits were selected and divided into intact skin group and damaged skin group by random number table method， four rabbits in each group. The skin irritation test was carried out by coating herpes ointment and herpes ointment matrix （0.5 g each） with the homologous control method， and the skin was administered for histopathological examination 14 days later. Forty healthy adult guinea pigs were selected and divided into herpes ointment group， matrix group， dinitrochlorobenzene group by random number table method， twenty in herpes ointment group and ten in other groups. The skin sensitization test was carried out by coating herpes ointment （0.2 g each）， herpes ointment matrix （0.2 g each）， and 2，4-dinitrochlorobenzene （0.2 mL each）. Erythema and edema were used as evaluation indexes in two tests. Twenty-four New Zealand rabbits were selected and divided into herpes ointment group， matrix group and blank control group by random number table method. Each group had eight rabbits. Acute skin toxicity tests were carried out on New Zealand rabbits coated with 10 g/kg， 2 g/kg， 2 mL/kg herpes ointment， herpes ointment matrix and normal saline in groups， and the changes of body mass， toxic reaction and death of rabbit in each group were observed within 14 days. On the 14th day after dosing， general anatomy was performed on all New Zealand rabbits， and histopathological examination was performed if there were any toxic reactions and general anatomy abnormalities. Results Herpes ointment had no irritating effect on intact and damaged skin of New Zealand rabbits， and the histopathological examination of skin was normal. Herpes ointment had no skin allergic reaction to guinea pigs， and the sensitization intensity score was 0; there was no acute toxicity reaction to New Zealand rabbits， no obvious abnormalities were found in tissues and organs after dissection， body weight growth was consistent with the growth law. Compared with the blank control group， there was no significant difference in the weight of New Zealand rabbits of the herpes ointment group （P > 0.05）. Conclusion Herpes ointment has no skin irritation， allergy， or acute toxicity. The topical skin medication is safe and can be used for clinical applications.

[Key words] Herpes ointment; Skin irritation; Allergy; Acute toxicity; Safety

皰疹膏是解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九八八醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）根據(jù)民間驗(yàn)方，結(jié)合多年治療帶狀皰疹的臨床經(jīng)驗(yàn)研制出的一種外用制劑，具有清熱解毒，解毒療瘡的功效，臨床主要以外涂透皮給藥治療帶狀皰疹。皰疹膏可經(jīng)皮膚直接吸收進(jìn)入患處，抑制水痘-帶狀皰疹病毒復(fù)制，緩解疼痛，減輕炎性滲出，促進(jìn)皰疹愈合，是一種理想的治療帶狀皰疹外用劑。為評(píng)估其安全性，依據(jù)中華人民共和國(guó)國(guó)家職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GBZ）[1]，進(jìn)行了皰疹膏皮膚刺激性、過(guò)敏性和急性毒性試驗(yàn)，并對(duì)該藥進(jìn)行客觀評(píng)價(jià)，為臨床使用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

皰疹膏、皰疹膏基質(zhì)為我院制劑室試制，批號(hào)20200310，規(guī)格：30 g/盒，濃度0.2 g/g（每克含生藥0.2 g）;陽(yáng)性致敏藥物：2，4-二硝基氯苯，日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社，批號(hào)WT6CA-QB;Sartorius電子天平，型號(hào)：BT125D，精度：0.01 mg，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康10～14周齡新西蘭兔32只，體重2～3 kg;8～12周齡白色豚鼠40只，體重250～300 g;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均為清潔級(jí)，雌雄各半，雌性無(wú)孕，購(gòu)自西安益豐達(dá)生物科技有限公司動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（陜）2017-002。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室符合國(guó)家相應(yīng)規(guī)定，實(shí)驗(yàn)期間將動(dòng)物置于恒溫、恒濕動(dòng)物房，實(shí)驗(yàn)室分籠喂養(yǎng)，自由進(jìn)食、飲水，適應(yīng)環(huán)境3 d后方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本試驗(yàn)經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)，符合《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理審查指南》[2]要求，盡量減少使用的動(dòng)物數(shù)量和可能遇到的任何痛苦。

1.3 方法

1.3.1 皮膚刺激性試驗(yàn)

取符合要求的健康成年新西蘭兔8只，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法分為兩組，即完整皮膚組和損傷皮膚組，每組4只，采用同體左右側(cè)自身比較法。實(shí)驗(yàn)前24 h將新西蘭兔背部?jī)蓚?cè)脫毛，范圍為4 cm×4 cm，去毛區(qū)皮膚無(wú)損傷者留作完整皮膚試驗(yàn);去毛區(qū)皮膚用刀片作多處“#”字形劃破至滲血為度，留作損傷皮膚試驗(yàn)。左側(cè)正常皮膚及破損皮膚脫毛區(qū)均涂以0.5 g皰疹膏基質(zhì)作為空白對(duì)照，右側(cè)均涂以受試藥物皰疹膏0.5 g，用1層紗布和一層蠟紙覆蓋，再用無(wú)紡布空貼及無(wú)刺激性膠布加以固定。4 h后去除覆蓋物，用溫水清除殘留受試樣品。每天同一方法，同一時(shí)間給藥1次，持續(xù)給藥7 d。在每次去除受試物后1 h及再次涂敷前觀察、記錄皮膚是否有紅斑、水腫、出血點(diǎn)等情況及其發(fā)生和消退時(shí)間。末次貼敷后，在去除受試物后1、24 h，2、3、4、5、6、7 d觀察并記錄受試部位有無(wú)紅斑和水腫，并依據(jù)《GBZ/T240.6-2011化學(xué)品毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和試驗(yàn)方法 第6部分：急性皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)》[3]皮膚刺激反應(yīng)實(shí)驗(yàn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算反應(yīng)積分并分級(jí)，第14天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，作受藥部位皮膚組織病理學(xué)檢查。

皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[3]：無(wú)紅斑記0分，輕度紅斑（勉強(qiáng)可見(jiàn)）記1分，中度紅斑（明顯可見(jiàn)）記2分，重度紅斑記3分，紫紅色紅斑到輕度焦痂記4分;無(wú)水腫記0分，輕度水腫（勉強(qiáng)可見(jiàn)）記1分，中度水腫（明顯隆起）記2分，重度水腫（皮膚隆起1 mm，輪廓清楚）記3分，嚴(yán)重水腫（皮膚隆起1 mm以上并有擴(kuò)大）記4分。皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分均值=（紅斑和焦痂總分+水腫總分）/實(shí)驗(yàn)動(dòng)物總數(shù)，每組的評(píng)分以不同觀察時(shí)間的最高值計(jì)。皮膚刺激強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[3]：評(píng)分<0.5，無(wú)刺激性;評(píng)分0.5～<2.0，輕度刺激性;評(píng)分2.0～6.0，中度刺激性;評(píng)分>6.0，強(qiáng)刺激性。

1.3.2 主動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)

取符合要求的豚鼠40只，雌雄各半，試驗(yàn)前24 h將其背部左側(cè)去毛，去毛范圍為3 cm×3 cm。應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法分為三組，即基質(zhì)組、皰疹膏組、二硝基氯苯組，皰疹膏組20只，其余組各10只。

1.3.2.1 皮膚致敏接觸? 分別在相應(yīng)組別的豚鼠的左側(cè)脫毛區(qū)均勻涂布皰疹膏基質(zhì)（0.2 g/只）、皰疹膏（0.2 g/只）、1% 2，4-二硝基氯苯溶液（0.2 mL/只），6 h后，移去敷貼物，溫水洗去受試樣品，觀察皮膚紅斑和水腫情況。第7、14天各組豚鼠采用同樣的方法重復(fù)接觸致敏。

1.3.2.2 皮膚激發(fā)接觸? 末次致敏接觸后14 d，用與致敏接觸相同的方法，將皰疹膏基質(zhì)（0.2 g/只）、皰疹膏（0.2 g/只）、0.1% 2，4-二硝基氯苯溶液（0.2 mL/只），分別涂在相應(yīng)組別的豚鼠右側(cè)背部3 cm×3 cm的脫毛區(qū)（試驗(yàn)前24 h去毛），6 h后去除受試樣品，清洗方法同前。在0、24、48、72 h分別觀察和記錄皮膚紅斑和水腫情況，同時(shí)觀察動(dòng)物是否出現(xiàn)哮喘、站立不穩(wěn)和休克等嚴(yán)重全身過(guò)敏反應(yīng)。根據(jù)紅斑和水腫情況計(jì)算反應(yīng)積分并分級(jí)，具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)同“1.3.1”項(xiàng)。每組的致敏反應(yīng)積分=（紅斑和焦痂形成總分+水腫形成總分）/動(dòng)物總數(shù)。當(dāng)受試樣品組豚鼠皮膚反應(yīng)積分≥2時(shí)，判為皮膚致敏反應(yīng)陽(yáng)性，并計(jì)算致敏率及致敏強(qiáng)度。致敏率=發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)動(dòng)物數(shù)/動(dòng)物總數(shù)×100%。致敏強(qiáng)度：致敏率<9%，Ⅰ級(jí)致敏度，弱致敏性;9%～28%，Ⅱ級(jí)致敏度，輕度致敏性;29%～64%，Ⅲ級(jí)致敏度，中度致敏性;65%～80%，Ⅳ級(jí)致敏度，強(qiáng)致敏性;≥81%，Ⅴ級(jí)致敏性，極強(qiáng)致敏性;其中Ⅰ級(jí)致敏度無(wú)意義，實(shí)際使用中無(wú)致敏危險(xiǎn)[4]。

1.3.3 局部皮膚急性毒性試驗(yàn)

取符合要求的新西蘭兔24只，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法分為三組，分別為空白對(duì)照組、基質(zhì)組、皰疹膏組，每組8只。給藥前24 h同前法備皮，去毛面積相當(dāng)于體表面積的10%左右，約150 cm2。依據(jù)《GBZ/T240.3-2011化學(xué)品毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和試驗(yàn)方法 第3部分：急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)》[5]中規(guī)定，受試樣品劑量達(dá)到2 g/kg仍不出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡時(shí)，則不需要再進(jìn)行更高劑量試驗(yàn)，為實(shí)際無(wú)毒級(jí)。以此標(biāo)準(zhǔn)，皰疹膏的濃度為0.2 g/g，新西蘭兔需要的最大生藥劑量=2 g/kg，那么，新西蘭兔需要的皰疹膏最大劑量=2 g/kg×1g÷0.2 g=10g/kg。采用24 h內(nèi)2次給藥方式，每次皰疹膏以最大劑量10 g/kg，基質(zhì)2 g/kg，生理鹽水2 mL/kg 均勻涂抹在相應(yīng)組別的受試皮膚區(qū)，24 h取下固定物和覆蓋物，用溫水洗去皮膚上的殘留受試樣品。觀察1、24、48、72 h直至14 d動(dòng)物的行為活動(dòng)，體征，用藥部位皮膚反應(yīng)，進(jìn)食排泄，眼和黏膜變化，呼吸和中樞神經(jīng)系統(tǒng)變化，四肢活動(dòng)及其他的中毒表現(xiàn)，觀察動(dòng)物死亡情況。并在給藥前、給藥后第4、7、10、14天，對(duì)新西蘭兔體重進(jìn)行檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)分析皰疹膏對(duì)體重有無(wú)影響。試驗(yàn)結(jié)束后將全部新西蘭兔靜脈注射丙泊芬（1.5 mL/kg）麻醉后進(jìn)行大體解剖學(xué)檢查，如有毒性反應(yīng)或剖檢臟器出現(xiàn)異常，則進(jìn)行病理學(xué)檢查。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，重復(fù)測(cè)量資料數(shù)據(jù)組間總體比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)之間的比較采用Bonferroni法。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果

皰疹膏及基質(zhì)對(duì)完整皮膚的刺激性各組評(píng)分均為“0”;對(duì)破損皮膚，皰疹膏組及基質(zhì)組在1、24 h平均反應(yīng)分值雖有輕微增加，但2 d內(nèi)均恢復(fù)正常，兩組評(píng)分均值均< 0.5。見(jiàn)表1。

2.2 主動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)過(guò)72 h的觀察，基質(zhì)組及皰疹膏組均未見(jiàn)過(guò)敏反應(yīng)，皮膚均光滑，未見(jiàn)紅斑、鱗屑、水腫及焦痂。二硝基氯苯組所有豚鼠均出現(xiàn)不同程度的紅斑、厚層鱗屑、水腫或焦痂，并且大多有皮損出現(xiàn)，表現(xiàn)出極強(qiáng)的致敏性，致敏率為100%。見(jiàn)表2、圖1。

2.3 局部皮膚給藥急性毒性試驗(yàn)

皰疹膏最大耐受量皮膚給藥急性毒性試驗(yàn)中，各組新西蘭兔一般狀態(tài)良好，其行為、外觀、飲食、對(duì)刺激的反應(yīng)、分泌物、排泄物等均未見(jiàn)明顯異常。各組新西蘭兔亦未出現(xiàn)全身中毒表現(xiàn)和死亡情況，給藥后第14天對(duì)全部新西蘭兔進(jìn)行解剖，經(jīng)肉眼觀察未見(jiàn)明顯組織、器官異常，亦未見(jiàn)明顯毒理性反應(yīng)改變。經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），組間比較及交互作用差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。提示三組新西蘭兔體重總體及各測(cè)量時(shí)間點(diǎn)體重比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但三組體重隨時(shí)間穩(wěn)定增長(zhǎng)。進(jìn)一步兩兩比較，組內(nèi)比較：與本組第0天比較，第7、10、14天三組體重明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），且第14天體重高于第7天，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;組間比較：三組同期各時(shí)間點(diǎn)兩兩比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 皮膚組織病理學(xué)結(jié)果

除損傷皮膚組表皮可見(jiàn)機(jī)械損傷舊痕外，其余各組表皮完整，顆粒層、棘層厚度正常，皮脂腺、毛囊及毛發(fā)結(jié)構(gòu)正常，皮下未見(jiàn)顯著的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和組織充血、出血、水腫、變性、壞死等病理性改變。見(jiàn)圖2。

3 討論

帶狀皰疹是一種常見(jiàn)的皮膚疾病[6-9]，好發(fā)于成人[10-12]，主要由水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）引起[13-15]。當(dāng)細(xì)胞免疫因衰老、免疫抑制障礙或藥物治療而降低時(shí)，帶狀皰疹的發(fā)生率增加[16-19]。帶狀皰疹可導(dǎo)致患者疼痛劇烈，寢食難安[20-23]，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[24-28]。為快速緩解帶狀皰疹患者疼痛，短期促使皰疹痊愈，我院制劑中心開(kāi)發(fā)研制出用于治療帶狀皰疹的外涂制劑皰疹膏。為盡快實(shí)現(xiàn)臨床推廣應(yīng)用，需對(duì)皰疹膏的安全性進(jìn)行評(píng)估。

依據(jù)GBZ[1]的相關(guān)要求及標(biāo)準(zhǔn)選取新西蘭兔進(jìn)行皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)。經(jīng)觀察，完整皮膚組涂皰疹膏后局部皮膚于清除受試物后1、24 h，2、3、4、5、6、7 d的8個(gè)時(shí)間段里，均未見(jiàn)紅斑或水腫出現(xiàn)，皮膚形態(tài)與基質(zhì)組一樣，兩組的平均反應(yīng)刺激強(qiáng)度分值均為0;損傷皮膚皰疹膏組及基質(zhì)組局部皮膚于清除受試物后1、24 h，均有1個(gè)皮膚出現(xiàn)免強(qiáng)可見(jiàn)的紅斑，2 d內(nèi)均恢復(fù)正常，兩組平均反應(yīng)刺激強(qiáng)度分值均< 0.5，其余組別除了刀片劃傷正常皮膚后出現(xiàn)的暗紅色結(jié)痂外，均未見(jiàn)紅斑或水腫出現(xiàn)。根據(jù)GBZ皮膚刺激強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[4]：評(píng)分< 0.5，無(wú)刺激性。局部皮膚病理學(xué)檢查結(jié)果正常。以上結(jié)果提示皰疹膏與皰疹膏基質(zhì)均對(duì)正常皮膚和破損皮膚無(wú)刺激性。

在致敏性試驗(yàn)中，陽(yáng)性對(duì)照二硝基氯苯組全部豚鼠均出現(xiàn)不同程度的紅斑、厚層鱗屑、水腫或焦痂，并且大多有皮損出現(xiàn)。由于致敏率=發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)動(dòng)物數(shù)/動(dòng)物總數(shù)×100%，所以，二硝基氯苯組的致敏率為100%;根據(jù)致敏強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[4]：當(dāng)致敏率≥81%時(shí)，其致敏強(qiáng)度為Ⅴ級(jí)，為極強(qiáng)致敏性。而皰疹膏組及基質(zhì)組豚鼠皮膚完整、光滑，無(wú)紅斑、鱗屑、水腫及焦痂，致敏率為0，結(jié)果提示皰疹膏及基質(zhì)對(duì)皮膚無(wú)致敏性。

在局部給藥急性毒性試驗(yàn)中，為保證足夠的受試劑量，皰疹膏僅以最大給藥量2 g生藥/kg體重進(jìn)行試驗(yàn)測(cè)定，給藥后1、24、48、72 h及第14天各組新西蘭兔一般狀態(tài)良好，其行為、外觀、飲食、對(duì)刺激的反應(yīng)、分泌物、排泄物等未見(jiàn)明顯異常;皮膚未見(jiàn)紅斑、水腫;經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析，時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），組間比較及交互作用差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。提示三組新西蘭兔體重總體比較及各測(cè)量時(shí)間點(diǎn)體重比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但三組體重隨時(shí)間穩(wěn)定增長(zhǎng)。各組新西蘭兔亦未出現(xiàn)全身中毒表現(xiàn)和死亡情況;各重要臟器未見(jiàn)明顯病理性損傷及毒理性反應(yīng)改變，提示皰疹膏皮膚急性毒性試驗(yàn)是安全的，無(wú)明顯的急性毒性。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，皰疹膏皮膚給藥無(wú)顯著毒性反應(yīng)、無(wú)皮膚刺激性、無(wú)過(guò)敏性，安全性較高，符合外用制劑的安全性要求，可以進(jìn)一步進(jìn)行臨床研究和推廣。

[參考文獻(xiàn)]

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（收稿日期：2020-06-01）