聯(lián)合檢測(cè)EB 病毒不同抗體及其DNA 診斷鼻咽癌的價(jià)值

李旌

鼻咽癌屬于腫瘤科臨床常見(jiàn)的一種惡性腫瘤疾病,是危害人類身體健康的重要疾病之一,其發(fā)病率在頭頸部腫瘤疾病中居于首位［1,2］。另外,鼻咽癌的轉(zhuǎn)移性與侵襲性比較強(qiáng),目前在世界各地均呈現(xiàn)出廣泛流行趨勢(shì)［3］。為了分析血清EB 病毒Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 以及EBV-DNA 聯(lián)合檢測(cè)對(duì)鼻咽癌的診斷價(jià)值,現(xiàn)將本院2017 年12 月～2019 年12 月收治的50 例鼻咽癌患者納為研究樣本,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017 年12 月～2019 年12 月本院收治的50 例鼻咽癌患者作為研究組,其中男27 例,女23 例；年齡30～78 歲,平均年齡(48.45±10.74)歲；疾病類型：根據(jù)TNM 分期將Ⅰ期和Ⅱ期作為早期鼻咽癌,Ⅲ期和Ⅳ期作為晚期鼻咽癌,其中Ⅰ期鼻咽癌4 例,Ⅱ期鼻咽癌6 例,Ⅲ期鼻咽癌21 例,Ⅳ鼻咽癌19 例。同期選擇49 例鼻咽相關(guān)疾病患者作為觀察組,其中男25 例,女24 例；年齡30～79 歲,平均年齡(48.66±10.34)歲；疾病類型：鼻息肉14 例,鼻出血1 例,耳鳴1 例,慢性耳源性眩暈1 例,耳炎3 例,淋巴瘤9 例,鼻炎12 例,頭頸部腫瘤8 例。同期選取52 例健康體檢人員作為對(duì)照組,其中男28 例,女24 例；年齡30～79 歲,平均年齡(48.57±10.62)歲；52 例健康體檢人員均無(wú)鼻咽癌或鼻咽相關(guān)疾病。三組性別、年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法 檢測(cè)Rta-IgG 選擇北京同昕生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒,檢測(cè)EA-IgA 與VCA-IgA 選擇德國(guó)歐蒙實(shí)驗(yàn)診斷有限公司生產(chǎn)的試劑盒,儀器采用TECAN 全自動(dòng)酶免分析儀。檢測(cè)EBV-DNA 選用美國(guó)的ABI7500 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)儀和EB 病毒核酸PCR 擴(kuò)增試劑盒。在檢測(cè)過(guò)程中將3 ml靜脈血在EDTA 抗凝真空管與分離膠促凝管靜置30 min,然后2500×g 離心5 min,對(duì)血清和血漿進(jìn)行分離,保存-20℃待檢［4］。采用酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(ELISA)法檢測(cè),所有操作均根據(jù)試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較三組檢測(cè)結(jié)果及研究組不同分期、不同療效檢測(cè)結(jié)果。陽(yáng)性診斷標(biāo)準(zhǔn)：Rta-IgG 試劑檢測(cè)標(biāo)本吸光度A 值/臨界值≥1［5］；EA-IgA 與VCA-IgA 試劑檢測(cè)標(biāo)本吸光度A 值/臨界值≥1.1［6］。臨界值按照說(shuō)明書(shū)提供的算法CO(Cut Off)=0.05+陰性對(duì)照的讀數(shù)平均值,若陰性對(duì)照＜0.05,則按0.05 計(jì)算［7］。結(jié)果采用rA 值(相對(duì)A 值)。采用熒光定量PCR 檢測(cè)血漿EBV-DNA,擴(kuò)增與檢測(cè)等相關(guān)操作都嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)完成［8］。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：采用自動(dòng)分析軟件對(duì)PCR 擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行分析,EBVDNA＞5×102copies/ml 為陽(yáng)性［9,10］。研究組全部患者療效評(píng)價(jià)按照PR 和CR 動(dòng)態(tài)觀察其相關(guān)指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t 檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)表示,采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG 與EBV-DNA檢測(cè)結(jié)果比較 研究組VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG的rA 值和EBV-DNA 中位數(shù)分別為(2.41±3.44)S/CO、(2.65±3.38)S/CO、(4.23±5.81)S/CO、7500 copies/ml,觀察組分別為(0.87±1.21)S/CO、(0.35±0.54)S/CO、(0.51±1.32)S/CO、82 copies/ml,對(duì)照組分別為(0.46±0.55)S/CO、(0.37±0.84)S/CO、(0.36±1.02)S/CO、66 copies/ml。研究組Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 的rA 值和EBV-DNA 中位數(shù)均高于觀察組、對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組VCA-IgA 的rA值高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組Rta-IgG、EA-IgA 的rA 值和EBV-DNA 中位數(shù)與對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。研究組Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 和EBV-DNA 檢測(cè)陽(yáng)性率均高于觀察組、對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組VCA-IgA 檢測(cè)陽(yáng)性率高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組Rta-IgG、EA-IgA、EBV-DNA 檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 不同分期鼻咽癌患者Rta-IgG、EA-IgA、VCAIgA 與EBV-DNA 檢測(cè)結(jié)果比較 Ⅰ期、Ⅱ期患者Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 的rA 值與EBV-DNA 中位數(shù)均低于Ⅲ期、Ⅳ期,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Ⅰ期、Ⅱ期患者Rta-IgG 與EBV-DNA 檢測(cè)陽(yáng)性率均低于Ⅲ期、Ⅳ期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 不同療效鼻咽癌患者治療前后EBV-DNA、Rta-IgG、EA-IgA 與VCA-IgA 檢測(cè)結(jié)果比較 CR、PR 患者治療前后Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 的rA 值組間及組內(nèi)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。CR、PR患者治療前EBV-DNA 中位數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；CR、PR 患者治療后EBV-DNA 中位數(shù)均低于治療前,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；CR 患者治療后EBV-DNA 中位數(shù)低于PR 患者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

表1 三組Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 與EBV-DNA 檢測(cè)陽(yáng)性情況比較［n(%)］

表2 不同分期鼻咽癌患者Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 與EBV-DNA 檢測(cè)結(jié)果比較［,n(%)］

表2 不同分期鼻咽癌患者Rta-IgG、EA-IgA、VCA-IgA 與EBV-DNA 檢測(cè)結(jié)果比較［,n(%)］

注：與Ⅰ期比較,aP＜0.05；與Ⅱ期比較,bP＜0.05

表3 不同療效鼻咽癌患者治療前后EBV-DNA、Rta-IgG、EA-IgA 與VCA-IgA 檢測(cè)結(jié)果比較(,M)

表3 不同療效鼻咽癌患者治療前后EBV-DNA、Rta-IgG、EA-IgA 與VCA-IgA 檢測(cè)結(jié)果比較(,M)

注：與治療前比較,aP＜0.05；與PR 比較,bP＜0.05

3 討論

鼻咽癌的病理機(jī)制與EB 病毒存在密切聯(lián)系,針對(duì)高危人群早期篩查鼻咽癌能夠有效提高患者的預(yù)后效果與治愈率［11］。鼻咽癌患者的血漿中能夠檢測(cè)出腫瘤來(lái)源的EBV-DNA,其含量變化和患者病情、復(fù)發(fā)、療效、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［12］。EA-IgA 與VCA-IgA 抗體檢測(cè)在鼻咽癌輔助診斷和篩查當(dāng)中應(yīng)用較多,而EB 病毒裂解期的基因編碼Rta 蛋白是目前更受關(guān)注的新分子靶標(biāo)［13,14］。EB 病毒裂解復(fù)制的情況下,病毒增殖過(guò)程中受染機(jī)體Rta 蛋白含量的高低能夠準(zhǔn)確反映病毒復(fù)制的活躍性［15］。

本研究結(jié)果顯示：①鼻咽癌患者三種EB 病毒抗體表達(dá)和EBV-DNA 中位水平均顯著高于健康體檢人員和鼻咽相關(guān)疾病患者,而且鼻咽相關(guān)疾病患者的VCA-IgA 抗體表達(dá)和陽(yáng)性率與健康體檢人員也有差異,說(shuō)明鼻咽癌患者血清中含有高濃度EB 病毒抗體,而且健康體檢人員和鼻咽相關(guān)疾病患者也存在一定的陽(yáng)性率,單項(xiàng)檢查容易干擾血清學(xué)診斷結(jié)果或出現(xiàn)誤診,因而三種EB 病毒抗體和EBV-DNA 聯(lián)合檢測(cè)在鼻咽癌早期篩查與診斷當(dāng)中有較高的臨床診斷價(jià)值；②臨床癥狀較輕和早期鼻咽癌患者的EA-IgA 與VCAIgA 抗體表達(dá)相對(duì)較低,在病灶增大或浸潤(rùn)范圍擴(kuò)散后抗體表達(dá)有一定的增高,但Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者的陽(yáng)性率比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；晚期鼻咽癌患者EBV-DNA 與Rta-IgG 抗體表達(dá)顯著高于早期患者,說(shuō)明根據(jù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度和臨床分期的增高EB 病毒會(huì)出現(xiàn)高表達(dá),引起相應(yīng)抗體和Rta 蛋白出現(xiàn)明顯的增多,Ⅲ期、Ⅳ期患者的陽(yáng)性率也相對(duì)更高,因而Rta 蛋白抗體檢測(cè)在鼻咽癌篩查診斷當(dāng)中作用顯著；③CR 患者治療前EBV-DNA 中位數(shù)稍高于PR 患者,治療后PR 患者的EBV-DNA 中位數(shù)顯著高于CR患者,說(shuō)明鼻咽癌分期與血漿中EBV-DNA 的含量相一致,由于病情變化后腫瘤細(xì)胞釋放到外周血引起患者血漿中EBV-DNA 含量出現(xiàn)增高,因此血漿中EBVDNA 含量與腫瘤負(fù)荷屬于正相關(guān)性。

綜上所述,三種EB 病毒抗體和EBV-DNA 聯(lián)合檢測(cè)在鼻咽癌診斷中作用顯著,建議推廣應(yīng)用。