抗原85復(fù)合物的致病機(jī)制及其在結(jié)核病疫苗研制中的應(yīng)用進(jìn)展

梁正敏 王元智 劉一朵 周向梅

結(jié)核分枝桿菌(MTB)是一種在細(xì)胞內(nèi)生存的細(xì)菌，其通過呼吸道進(jìn)入宿主后，被肺泡巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、上皮細(xì)胞所包圍。MTB的許多毒力因子，如熱休克蛋白65(Hsp65)、Hsp70、阿拉伯糖甘露糖脂(LAM)等，與巨噬細(xì)胞或樹突狀細(xì)胞表面受體結(jié)合，有利于MTB進(jìn)入細(xì)胞[1]。MTB在使用不同策略進(jìn)入細(xì)胞的過程中，其分泌蛋白如MPT64、早期分泌靶抗原6(ESAT-6)、培養(yǎng)濾液蛋白10(CFP-10)和抗原85(Ag85)復(fù)合物等起著重要作用。Ag85復(fù)合物是MTB的主要分泌抗原，在MTB的致病性中起重要作用。Ag85復(fù)合物可與纖維連接蛋白和彈性蛋白結(jié)合并介導(dǎo)MTB的黏附和侵襲，具有分枝菌酸轉(zhuǎn)移酶活性介導(dǎo)MTB的細(xì)胞壁合成。此外，Ag85分子能刺激輔助性T淋巴細(xì)胞(Th)1細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子α(TFN-α)、γ干擾素(IFN-γ)等。由于具有這些特性，Ag85復(fù)合物在結(jié)核病診斷和疫苗研發(fā)[2]、抗結(jié)核藥品[3]研發(fā)及免疫治療[4]等方面都具有重要的應(yīng)用潛力。

一、Ag85作為毒力因子的作用

Ag85蛋白家族包括Ag85A(相對分子質(zhì)量31 000)、Ag85B(相對分子質(zhì)量30 000)、Ag85C(相對分子質(zhì)量31 500)成員。在分泌蛋白中，Ag85是MTB培養(yǎng)液中最常見的分泌蛋白。Ag85A和Ag85B占總培養(yǎng)液蛋白的60%。此外，Ag85A、Ag85B和Ag85C在氨基酸和基因水平上具有廣泛的交叉反應(yīng)性和同源性[2]。Ag85蛋白家族成員都能結(jié)合纖維連接蛋白，與MTB的侵襲有關(guān)。無論在抗體介導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)還是T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)中，Ag85分子在MTB自然感染和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染模型中都具有很強(qiáng)的免疫原性。在上述3種Ag85家族成員中，Ag85B是含量最多的一種，也是MTB的主要胞外蛋白，培養(yǎng)3 d就能被檢測到。Ag85B、Ag85A、Ag85C分別以約3∶2∶1的比例分泌。Ag85復(fù)合物除了在培養(yǎng)液中表達(dá)，也可在人單核細(xì)胞中表達(dá)，這些蛋白定位于吞噬體和分枝桿菌細(xì)胞壁[5]。

1.結(jié)合纖維連接蛋白、彈性蛋白及纖溶酶原：纖維連接蛋白是存在于血漿和組織中的一類高分子量糖蛋白，與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、黏附、細(xì)胞形態(tài)調(diào)控、吞噬功能等相關(guān)。Ag85A和Ag85B能以高親和力結(jié)合血漿纖維連接蛋白[6]。研究發(fā)現(xiàn)，Ag85蛋白是一種應(yīng)激敏感黏附素，當(dāng)肺臟細(xì)胞暴露在高剪切應(yīng)力條件下或在血源性傳播期間有利于MTB吸附在肺部[7]。除了纖維連接蛋白，彈性蛋白也是MTB入侵的重要配體。彈性蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)中的一種重要蛋白，對許多組織如皮膚、肺、血管的彈性狀態(tài)起著至關(guān)重要的作用。Ag85能夠通過作用于彈性蛋白基序AAAKAA(K/Q)(Y/F)結(jié)合彈性蛋白及其前體[8]。此外，Ag85還能與人纖維蛋白溶酶原結(jié)合，使纖維蛋白溶酶原被激活成纖溶酶，使MTB具有分解胞外基質(zhì)和基底膜蛋白的能力，從而導(dǎo)致組織損傷[9]。因此，Ag85復(fù)合物與纖維連接蛋白和彈性蛋白的結(jié)合介導(dǎo)了MTB對巨噬細(xì)胞的附著和侵襲，與纖維蛋白溶酶原的結(jié)合導(dǎo)致組織發(fā)生病理損傷。

2.分枝菌酸轉(zhuǎn)移酶活性：Ag85復(fù)合物能催化海藻糖單酸鹽中的分枝菌酸轉(zhuǎn)移生成阿拉伯半乳聚糖或海藻糖霉菌酸酯。這些脂質(zhì)對分枝桿菌細(xì)胞的表面組分具有重要作用。Ag85A、Ag85B和Ag85C均可作為分枝菌酸轉(zhuǎn)移酶參與分枝桿菌細(xì)胞壁組裝的最后階段，如催化脂肪酸的轉(zhuǎn)移，參與分枝桿菌細(xì)胞表面組分的生物合成[10]。因此，Ag85復(fù)合物也屬于細(xì)胞壁抗原。

3.毒力：Ag85復(fù)合物在MTB發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。MTB進(jìn)入細(xì)胞后，Ag85通過與黏膜表面的纖維連接蛋白和彈性蛋白等結(jié)合，這種相互作用有助于細(xì)菌進(jìn)入宿主細(xì)胞的吞噬體。Ag85A、Ag85B和Ag85C作為免疫顯性蛋白，可明顯誘導(dǎo)Th1細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ和TNF-α等細(xì)胞因子[11-13]。與親本株相比，Ag85A缺失菌株在人(THP-1)和小鼠(J774.1A)巨噬細(xì)胞系中的生長速度明顯下降，而Ag85B缺失菌株的生長速率無明顯影響[14]，Ag85C缺失菌株的轉(zhuǎn)移酶活性降低了40%，但在細(xì)胞內(nèi)的生長速率未改變[15]。因此，比較Ag85A、Ag85B和Ag85C缺失菌株在細(xì)胞內(nèi)的生長情況，Ag85A的毒力可能強(qiáng)于Ag85B和Ag85C。

二、Ag85作為一種免疫顯性抗原在候選疫苗中的作用

BCG是目前被廣泛用于預(yù)防結(jié)核病的疫苗，它能有效保護(hù)兒童免受MTB感染。然而，BCG對成年人的保護(hù)效力范圍為0～80%[16]。因此，研制有效的結(jié)核病疫苗是未來的重要研究方向。許多MTB抗原已被用于結(jié)核病疫苗的設(shè)計(jì)，其中，Ag85復(fù)合物是免疫原性最好的抗原之一。多種用Ag85構(gòu)建的重組BCG疫苗、蛋白佐劑疫苗、病毒載體疫苗在研發(fā)中或已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段(表1)。盡管3個(gè)Ag85蛋白家族成員之間存在明顯的序列同源性，但它們的T細(xì)胞表位存在差異[17]，氨基酸241～260和261～280是Ag85B和Ag85A交叉反應(yīng)的T細(xì)胞表位，而接種了Ag85C DNA疫苗的小鼠的脾細(xì)胞不識別這些區(qū)域。此外，MTB感染的C57BL/6小鼠(對Ag85A和Ag85B多肽反應(yīng)較強(qiáng))或BALB/c小鼠(僅對Ag85A多肽反應(yīng))的脾細(xì)胞對上述3種抗原的識別反應(yīng)不一樣[18]。因此，Ag85A或Ag85B可能比Ag85C更具有免疫原性。在眾多進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段或正在研發(fā)的結(jié)核病候選疫苗中，主要選用Ag85A或Ag85B。Ag85A是最早進(jìn)入新型疫苗臨床試驗(yàn)階段的單一抗原[19]。在3個(gè)Ag85蛋白家族成員中，Ag85B是研發(fā)結(jié)核病疫苗使用頻率最高的抗原，這可能與Ag85B是培養(yǎng)液中含量最多、分泌最早的抗原相關(guān)，也可能與早期使用Ag85A的新型結(jié)核病疫苗首次進(jìn)入臨床試驗(yàn)的免疫效果不佳有關(guān)。但Ag85B與Ag85A的免疫原性相比，目前尚無明確證據(jù)顯示其更優(yōu)。

1.Ag85在重組BCG疫苗中的作用：rBCG30是早期構(gòu)建的重組BCG疫苗。盡管rBCG30在動(dòng)物模型上顯示出很好的免疫原性和保護(hù)性，但Ⅰ期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示其免疫原性與野生型BCG相比無明顯差異[20]。重組BCG疫苗Aeras-422(過表達(dá)Ag85B、Ag85A、Rv3407，表達(dá)產(chǎn)氣莢膜溶血素O)能為小鼠提供抗MTB感染保護(hù)作用，但Ⅰ期臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)2名接種疫苗的志愿者出現(xiàn)了水痘帶狀皰疹病毒感染，推測Aeras-422免疫后可能會重新激活潛伏的皰疹病毒，導(dǎo)致Ⅰ期臨床試驗(yàn)提前終止[21]。此外，與野生型BCG相比，過表達(dá)Ag85A的重組BCG疫苗rBCG::Ag85A能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生更高水平的抗原特異性抗體和細(xì)胞因子IFN-γ，能提供小鼠更強(qiáng)的抗MTB感染能力[22]，且比其他表達(dá)多抗原的rBCG具有更好的保護(hù)效果[40]。但也有研究顯示，過表達(dá)多階段抗原的重組BCG疫苗比野生型BCG疫苗或單基因rBCG能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生更強(qiáng)、更持久的抗MTB感染保護(hù)作用[23-24]。但它們的臨床免疫保護(hù)效果有待進(jìn)一步研究。

重組BCG疫苗主要用于替換BCG，構(gòu)建的重組BCG過表達(dá)優(yōu)勢抗原。研究表明，表達(dá)多種抗原的重組BCG比表達(dá)單一抗原的重組BCG的免疫效果更好；但也有可能存在安全性問題，如Aeras-422[20]。重組BCG既具有親代的免疫優(yōu)勢，又彌補(bǔ)了親代的不足并改善保護(hù)性，而且易于納入免疫體系中推廣使用。相對于其他類型的候選疫苗，具有無可比擬的優(yōu)勢，受到廣泛重視。到目前為止，rBCG30和AERAS-422兩種重組BCG己進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，但由于缺乏有效性或存在不良反應(yīng)，兩種重組BCG疫苗的臨床試驗(yàn)已經(jīng)停止。而重組BCG疫苗VPM1002(用李斯特菌溶血素代替尿素酶基因)已進(jìn)入Ⅲ期臨床試驗(yàn)[41-42]。因此，不同的疫苗設(shè)計(jì)策略決定了所研制疫苗的免疫保護(hù)機(jī)制和保護(hù)效果的不同。

2.Ag85在蛋白佐劑疫苗中的作用：蛋白佐劑疫苗主要用于BCG初次免疫后的加強(qiáng)免疫。目前進(jìn)入臨床試驗(yàn)的蛋白佐劑疫苗有H1∶IC31、H1∶CAF01、H4∶IC31、H56∶IC31和GamTBvac。GamTBvac(Ag85A，ESAT-6-CFP-10)在小鼠和豚鼠的MTB感染模型中具有明顯的抗MTB感染保護(hù)作用[43]。最近，GamTBvac的Ⅰ期臨床試驗(yàn)顯示其具有良好的安全性和免疫原性[11]。H1(Ag85B-ESAT-6)融合蛋白是最早研發(fā)的蛋白佐劑疫苗，現(xiàn)已進(jìn)入Ⅱ期臨床試驗(yàn)，結(jié)果顯示在未感染和MTB感染的青少年中，H1具有安全性和免疫原性[30]。該疫苗能誘導(dǎo)不同類型的人群，如接種過BCG的健康志愿者、既往結(jié)核感染或結(jié)核潛伏感染人群，產(chǎn)生長期持久的抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)[44]。

表1 用Ag85復(fù)合物構(gòu)建的正在研發(fā)的或已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段的疫苗

由于H1疫苗中的ESAT-6會干擾γ干擾素釋放試驗(yàn)，學(xué)者們更愿意將ESAT-6用作診斷抗原。HyVac4(Ag85B-TB10.4，H4)是用TB10.4抗原取代ESAT-6的一種新型融合蛋白，Ⅰ期臨床試驗(yàn)證實(shí)H4∶IC31具有良好的安全性和免疫原性，低于50 μg的H4劑量誘導(dǎo)產(chǎn)生的多功能CD4+T細(xì)胞更多，免疫記憶能持續(xù)182 d[45]。但Ⅱ期臨床試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，H4∶IC31接種未改變QFT(QuantiFERON TB-GOLD，一種結(jié)核感染的檢測方法)的初始轉(zhuǎn)化，對QFT轉(zhuǎn)化率無明顯影響[30]。

相對于H1和H4疫苗，H56(Ag85B、ESAT-6、Rv2660c)疫苗增加了結(jié)核潛伏感染相關(guān)抗原Rv2660c，食蟹猴免疫H56∶IC31后可加強(qiáng)抵抗MTB的潛伏感染[46]。H56∶IC31疫苗免疫感染MTB和未感染MTB成年人證實(shí)其具有良好的安全性和耐受性，并能誘導(dǎo)持久的抗原特異性CD4+T細(xì)胞反應(yīng)[32]。最近的臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用5、15、50 μg的H56免疫QFT-和QFT+志愿者后均能誘導(dǎo)抗原特異性多功能CD4+T細(xì)胞，3組劑量間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但ESAT-6僅在QFT-參與者中具有免疫原性。疫苗劑量和免疫方案對QFT+和QFT-個(gè)體的適用性需要進(jìn)一步的臨床試驗(yàn)研究驗(yàn)證[32]。由于MTB是經(jīng)呼吸道傳播，呼吸道黏膜免疫是一種有潛力的免疫途徑。研究發(fā)現(xiàn)，用H56∶CAF01對小鼠進(jìn)行呼吸道黏膜免疫可明顯增加持久的肺臟駐留T細(xì)胞(Trm)的數(shù)量，但未改善肺部抵御MTB感染的能力，提示肺部Trm在疫苗控制MTB感染中的局限性[47]。相對于液體疫苗劑型，固體疫苗劑型，例如噴霧干燥，能提供更好的儲存穩(wěn)定性和減少對冷鏈設(shè)施的依賴。研究發(fā)現(xiàn)，H56∶CAF01經(jīng)噴霧干燥后仍能保留其免疫原性[48]。與H56的構(gòu)建方法相似，最近有研究將融合蛋白Ag85B-ESAT-6和結(jié)核潛伏感染相關(guān)抗原HspX與佐劑氫氧化鋁和poly I∶C免疫小鼠后可誘導(dǎo)高水平抗原特異性抗體和細(xì)胞因子IFN-γ、白細(xì)胞介素2(IL-2)和TNF-α[49]。但其抗感染保護(hù)效力有待進(jìn)一步研究。

3.Ag85在病毒載體疫苗中的作用：MVA85A(牛痘病毒表達(dá)Ag85A)是第一個(gè)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段的新型疫苗。MVA85A 能顯著誘導(dǎo)T細(xì)胞分泌抗原特異性IFN-γ，接種24周后，IFN-γ水平比僅免疫BCG的人高5～30倍[50]。MVA85A免疫接種過BCG的嬰幼兒后顯示其具有良好的耐受性，并可誘導(dǎo)明顯的細(xì)胞免疫應(yīng)答，但對嬰幼兒結(jié)核病缺乏保護(hù)效果[19]。此外，對感染人類免疫缺陷病毒(HIV)的新生兒接種MVA85A可引起早期抗原特異性免疫反應(yīng)，不干擾或增強(qiáng)隨后接種BCG的免疫原性[51]。雖然臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示MVA85A免疫后對嬰幼兒的抗MTB作用無明顯影響，但科學(xué)家們并未就此放棄MVA85A。最近的一個(gè)臨床試驗(yàn)通過改變免疫途徑、免疫次數(shù)和免疫人群再次評估MVA85A的有效性。研究人員分別用呼吸道黏膜免疫-皮內(nèi)免疫、皮內(nèi)免疫-呼吸道黏膜免疫、皮內(nèi)免疫-皮內(nèi)免疫3種方案進(jìn)行接種免疫過BCG的成年人。結(jié)果顯示，只有皮內(nèi)免疫-呼吸道黏膜免疫方案誘導(dǎo)了明顯的Ag85A介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答。黏膜免疫-皮內(nèi)免疫方案耐受性好，而皮內(nèi)免疫-黏膜免疫方案會引起短暫的明顯的呼吸道不良反應(yīng)。霧化吸入黏膜免疫能誘導(dǎo)明顯的黏膜和全身的Ag85A特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)，但這種免疫反應(yīng)是否與抗感染保護(hù)能力相關(guān)還有待臨床證實(shí)[52]。有趣的是，最近臨床研究發(fā)現(xiàn)MVA85A可明顯增強(qiáng)ChAdOx1 85A(黑猩猩腺病毒載體表達(dá)Ag85A)誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)[27,53]，給控制結(jié)核病帶來了新的希望。

Ad5Ag85A是一種表達(dá)Ag85A的復(fù)制缺陷型5型腺病毒(Ad5)載體疫苗，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型研究結(jié)果顯示Ad5Ag85A能明顯促進(jìn)BCG的保護(hù)作用，且通過呼吸道黏膜免疫能提供更好的保護(hù)；臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示Ad5Ag85A是安全的，能誘導(dǎo)接種BCG的青少年產(chǎn)生抗原特異性多功能T細(xì)胞[26]。但有學(xué)者認(rèn)為機(jī)體內(nèi)預(yù)先存在的腺病毒載體的抗體可能會中和腺病毒載體從而影響疫苗的效果[54]。但Ⅰ期臨床試驗(yàn)證實(shí)預(yù)先存在的Ad5抗體并沒有抑制疫苗誘導(dǎo)的T細(xì)胞免疫反應(yīng)[26]。盡管如此，Ad5Ag85A尚未進(jìn)行進(jìn)一步的臨床試驗(yàn)。

為了解決機(jī)體預(yù)先存在的抗腺病毒載體影響疫苗免疫原性的問題，新的病毒載體如猿類腺病毒或猩猩腺病毒被認(rèn)為是下一代病毒載體疫苗的候選載體[55]。ChAdOx1 85A是一種新型的表達(dá)Ag85A的黑猩猩腺病毒載體疫苗。研究發(fā)現(xiàn)，盡管呼吸道黏膜免疫ChAdOx1 85A能誘導(dǎo)肺產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)，但不能提供抗MTB感染保護(hù)；相反，用鼻內(nèi)或皮內(nèi)免疫ChAdOx1.85A(初次免疫)-MVA85A(二次免疫)均能誘導(dǎo)明顯的免疫反應(yīng)，并能提高BCG的抗感染保護(hù)作用。結(jié)果表明，BCG-ChAdOx1 85A-MVA85A免疫方案具有明顯的抗感染保護(hù)作用[53]。最近的臨床試驗(yàn)用ChAdOx1 85A免疫幼時(shí)接種過BCG的成年人，用MVA85A進(jìn)行二次加強(qiáng)免疫。結(jié)果顯示，ChAdOx1 85A能誘導(dǎo)明顯的Ag85A特異性CD4+和CD8+T細(xì)胞反應(yīng)，但用ChAdOx1 85A進(jìn)行二次加強(qiáng)免疫并未加強(qiáng)這種免疫反應(yīng)。而MVA85A二次加強(qiáng)免疫可促進(jìn)ChAdOx1 85A誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)[27]?？赡苡捎隗w內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生的腺病毒載體免疫反應(yīng)影響了疫苗的免疫原性，二次免疫用異源病毒載體能起到更好的免疫保護(hù)作用。

ChAdOx1 85A和MVA85A及Ad5Ag85A腺病毒載體疫苗都表達(dá)單一抗原Ag85A。Ad35-TBS(AERAS-402)則是一種表達(dá)三種抗原(Ag85A、Ag85B和TB10.4)的復(fù)制缺陷型35型腺病毒載體疫苗。對免疫過BCG的志愿者用AERAS-402進(jìn)行加強(qiáng)免疫，結(jié)果顯示AERAS-402可以明顯增強(qiáng)BCG免疫后的抗原特異性CD4+和CD8+T細(xì)胞反應(yīng)[56]。但也有研究表明AERAS-402疫苗誘導(dǎo)的CD8+T細(xì)胞在多數(shù)情況下不能識別受MTB感染的細(xì)胞，提出檢測疫苗誘導(dǎo)的多功能T細(xì)胞可能并不能反映這些細(xì)胞識別MTB感染細(xì)胞的能力[57]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)對肺結(jié)核患者或曾患肺結(jié)核者免疫AERAS-402也能誘導(dǎo)較強(qiáng)的免疫應(yīng)答[58]。最近，研究發(fā)現(xiàn)表達(dá)優(yōu)勢抗原Ag85A和Ag85B 的仙臺病毒載體疫苗SeV85A是一個(gè)有應(yīng)用潛力的結(jié)核候選疫苗，SeV85A免疫小鼠后可誘導(dǎo)抗原特異性CD4+和CD8+T細(xì)胞反應(yīng)，明顯增強(qiáng)BCG的免疫保護(hù)作用[29，59]。除了優(yōu)化抗原組合，有研究者嘗試通過構(gòu)建雙價(jià)疫苗[60]或與DNA疫苗聯(lián)合使用[61]來提高病毒載體疫苗的免疫效果。

4.Ag85在DNA疫苗中的作用：作為第三代疫苗的DNA疫苗相對于其他類型的結(jié)核病疫苗，如蛋白佐劑疫苗、病毒載體和重組BCG疫苗，是一種較新的結(jié)核病預(yù)防技術(shù)。DNA疫苗一般通過肌內(nèi)注射途徑到達(dá)體內(nèi)，然后由抗原提呈細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞)內(nèi)吞DNA到酸性囊泡中，隨后運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞核。最后，利用真核細(xì)胞進(jìn)行抗原表達(dá)和蛋白翻譯，產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答。盡管DNA疫苗具有良好的應(yīng)用前景，但到目前為止，尚未有結(jié)核DNA疫苗進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。

由于DNA疫苗表達(dá)單一MTB抗原對抗MTB感染的作用有限，越來越多的多抗原DNA疫苗進(jìn)入人們的視野。早期構(gòu)建的含多階段抗原的DNA疫苗pAEH(表達(dá)Ag85B、ESAT-6和HspX)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型上顯示出較高的免疫原性，并具有抗感染保護(hù)作用[38]。但目前尚無進(jìn)一步的研究。最近，Su等[37]構(gòu)建含多抗原Ag85A、Rv3425和潛伏感染相關(guān)抗原Rv2029c的DNA疫苗A39，在MTB感染前，A39可為小鼠提供保護(hù)性免疫。此外，感染后接種A39可抑制MTB的再活化，明顯降低了小鼠肺部和脾臟的細(xì)菌數(shù)量。此外，有研究發(fā)現(xiàn)DNA疫苗Hsp65-Ag85B比DNA疫苗Hsp65-ESAT6能誘導(dǎo)更強(qiáng)的T細(xì)胞免疫應(yīng)答，具有更高的保護(hù)效力[62]。此結(jié)果提示抗原的組合對于構(gòu)建多抗原疫苗的重要性。最近研究發(fā)現(xiàn)，將表達(dá)相同抗原Ag85A 和Ag85B的DNA疫苗與病毒載體疫苗進(jìn)行聯(lián)合免疫比單獨(dú)免疫DNA疫苗或病毒載體疫苗能誘導(dǎo)更高水平的T細(xì)胞免疫反應(yīng)，提供更好的抗感染保護(hù)作用[61]。此外，有研究表明將表達(dá)Ag85B的重組BCG和DNA疫苗進(jìn)行聯(lián)合免疫能增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞的免疫應(yīng)答，可能有助于克服BCG的局限性[39]。

綜上所述，Ag85復(fù)合物主要通過與纖維連接蛋白、彈性蛋白結(jié)合介導(dǎo)MTB在宿主細(xì)胞的黏附和侵襲，通過其分枝菌酸轉(zhuǎn)移酶活性介導(dǎo)MTB的細(xì)胞壁合成。Ag85復(fù)合物作為毒力因子具有較強(qiáng)的免疫原性，其中，Ag85A和Ag85B的免疫原性更優(yōu)。但是不同的疫苗類型、抗原的組成、佐劑、免疫途徑、接種人群的年齡及是否感染MTB或HIV等均會影響疫苗的免疫保護(hù)效果。H1∶IC31和H4∶IC31在動(dòng)物模型上顯示出良好的免疫保護(hù)作用，但進(jìn)入臨床試驗(yàn)后其免疫效果卻不理想。經(jīng)過優(yōu)化抗原組成的H56∶IC31在臨床試驗(yàn)中顯示出良好的免疫原性，但需要進(jìn)一步研究其對QFT+和QFT-個(gè)體的適用性。MVA85A對嬰幼兒的免疫保護(hù)作用不佳，但與ChAdOx1 85A聯(lián)合免疫成人后可加強(qiáng)ChAdOx1 85A的免疫原性。因此，疫苗抗原的選擇和免疫方案的優(yōu)化及其對不同類型人群的適應(yīng)性等因素對疫苗的免疫效果尤為重要。盡管近年來體液免疫反應(yīng)逐漸引起研究者們的注意[63]，但目前大多數(shù)疫苗的設(shè)計(jì)靶標(biāo)仍然是細(xì)胞免疫反應(yīng)。對于Ag85、ESAT-6等抗原，T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)較抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)對抗MTB感染可能更有效。僅使用主要誘導(dǎo)體液免疫反應(yīng)的鋁佐劑未能誘導(dǎo)明顯的抗感染免疫應(yīng)答[64]。而使用主要誘導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)的蛋白佐劑疫苗[44]或病毒載體疫苗[27，58]能發(fā)揮較好的抗感染保護(hù)作用?？赡芏嗵穷惪乖哉T導(dǎo)體液免疫反應(yīng)為主發(fā)揮抗感染作用[65-66]，但尚需進(jìn)一步的臨床研究證實(shí)。