“觀察線粒體的形態(tài)與分布”實驗的改進

王秀莉 孟安華

（1 東北師范大學生命科學學院 吉林長春 130024 2 東北師范大學附屬中學 吉林長春 130021）

“用高倍顯微鏡觀察葉綠體和線粒體”是高中生物學課程必修1 里的一個重要實驗［1］。但是中學開設這個實驗較少，成功率很低，而且筆者在做預實驗時發(fā)現(xiàn)按照教材給出的實驗步驟在實驗操作過程中存在一些問題：1）溶解的建那綠B 溶液在顯微鏡下原本就有顆粒；2）找到口腔上皮細胞比較困難；3）用洋蔥表皮作為實驗材料，比較容易觀察到細胞，但健那綠B 有顆粒，不能確定觀察現(xiàn)象的正確性；4）洋蔥表皮細胞和口腔上皮細胞哪個更適合作為實驗材料還不明確。針對以上問題筆者設計了一系列實驗，探索出最適合線粒體觀察的方案。

1 實驗儀器、材料與試劑

1.1 實驗儀器和材料 倒置光學顯微鏡（奧林巴斯，IX81），載玻片，蓋玻片，移液器（200 μL），吸頭（200 μL），濾紙，量筒，燒杯，漏斗，牙簽。人口腔上皮細胞，洋蔥表皮細胞。

1.2 實驗試劑 蒸餾水；生理鹽水：取0.9 gNaCl溶于100 mL 蒸餾水中；健那綠B：取0.3 g 健那綠B 粉末溶于30 mL 生理鹽水中，35℃水浴中溶解，并用濾紙過濾。

2 實驗方法與步驟

1）用鑷子夾住洋蔥的表皮并撕下，將其平鋪在載玻片上，在表皮上滴加適量健那綠B 染液，3 min 或10 min 后蓋上蓋玻片，用濾紙包好壓一壓，然后將臨時裝片放置于顯微鏡下觀察。

2）在載玻片上滴一滴健那綠B 染液，用滅菌牙簽較鈍的一端在口腔壁上刮幾下，然后在染液中涂一涂，3 min 或10 min 后蓋上蓋玻片，用濾紙包好壓一壓，然后將臨時裝片放置在顯微鏡下觀察。

3 實驗結果與分析

3.1 健那綠B 染液的過濾 由于在實驗中發(fā)現(xiàn)配置好的染液在標記線粒體時會在細胞外出現(xiàn)不明顆粒，筆者將染液進行了過濾，并將過濾和未過濾的染液在顯微鏡下進行觀察和對比，觀察結果如圖1所示，未過濾的染液有很多顆粒，而過濾后的染液則沒有顆粒出現(xiàn)，所以接下來的實驗均用過濾后的健那綠B 染液。

圖1 健那綠B 染液的觀察（20×）

3.2 洋蔥表皮細胞的線粒體觀察 實驗中采用了洋蔥表皮細胞為實驗材料，健那綠B 染色時間分別為3 min 和10 min，實驗結果如圖2所示，染色3 min 后在顯微鏡下觀察幾乎看不到線粒體被標記的小顆粒，而染色10 min 后的細胞中可觀察到被染色的呈圓球狀的線粒體顆粒，說明健那綠B 的染色時間為10 min 是適宜的。吳艷［2］提出由于植物細胞有中膠層和細胞壁的存在，所以植物細胞內的線粒體染色時間需稍長些。

圖2 洋蔥表皮細胞線粒體的觀察（20×）

3.2 口腔上皮細胞的線粒體觀察 采用口腔上皮細胞為實驗材料，健那綠B 染色時間也分別為3 min 和10 min，實驗結果如圖3所示。染色3 min后在顯微鏡下觀察到被標記的線粒體小顆粒不太明顯，而染色10 min 后的細胞中可清晰地觀察到被染色的呈現(xiàn)球狀或棒狀的線粒體顆粒，從實驗結果可知，對于口腔上皮細胞內的線粒體的觀察，染色時間稍長些效果更明顯。

圖3 口腔上皮細胞線粒體的觀察（60×）

4 結論與建議

4.1 結論 健那綠B 染液配制后需用濾紙過濾去除溶解不徹底的健那綠B 小顆粒，洋蔥表皮細胞和口腔上皮細胞均可作為實驗材料，但口腔上皮細胞優(yōu)于洋蔥表皮細胞，這2 種細胞的染色時間均為10 min 時效果最好。

4.2 建議 為了避免口腔上皮細胞太少而不易觀察到，刮取口腔上皮細胞時可用牙簽多刮幾次，或者用2～3 根牙簽依次刮取盡可能多的細胞，并且牙簽要在染液中攪拌一下，使細胞盡量分散開，在觀察時要耐心地尋找分散比較好且鋪展開的細胞觀察。

由于洋蔥表皮細胞比較大，觀察時用20 倍或40 倍的物鏡比較合適，而口腔上皮細胞相對較小，可用高倍物鏡（60 倍或100 倍）進行觀察，這樣容易觀察到細胞內較小的線粒體。