北京市海淀區(qū)女性人乳頭瘤病毒感染結(jié)果分析

王海濱 張冬青 趙嬌

乳頭瘤病毒（papillomavirus）屬于乳多空病毒科（papovaviridae）的乳頭瘤病毒屬，包括多種動(dòng)物乳頭瘤病毒和人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV），HPV 主要通過直接或間接接觸污染物品或性傳播感染人類。HPV 不但具有宿主特異性，而且具有組織特異性，只能感染人的皮膚和黏膜上皮細(xì)胞，至今已鑒定出100 多種HPV 基因型［1］。HPV 可分為高危型和低危型，持續(xù)性高危型HPV 與宮頸上皮內(nèi)瘤、宮頸癌密切相關(guān)，而低危型HPV 與生殖道外生性濕疣類、扁平濕疣類病變相關(guān)，不同HPV 的亞型具有不同的致病能力，多重HPV 感染是加重宮頸病變的重要因素［2-3］。因此，了解不同HPV 感染情況及亞型的分布對(duì)早期診斷和預(yù)防宮頸病變具有重要意義。本文對(duì)北京市海淀區(qū)3 650 例婦女的宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行了17 種HPV 亞型檢測(cè)，分析HPV 感染情況、亞型分布及感染年齡情況等特點(diǎn)，為本地區(qū)女性預(yù)防HPV 感染和宮頸疾病防治提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年7月至2019年7月期間在解放軍總醫(yī)院第四醫(yī)學(xué)中心婦科、皮膚科和體檢中心就診的3 650 例婦女，年齡15～80 歲，平均為（43.9±11.8）歲，其中＜20 歲22 例、20 歲～381 例、30 歲～989例、40 歲～1141 例、50 歲～745 例、60 歲～296 例、70歲～76 例。所有人群均為初次檢查，排除第二次復(fù)查結(jié)果。

1.2 儀器和試劑

基因擴(kuò)增儀為上海宏石醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)醫(yī)用PCR 分析儀SLAN-96P 型，HPV基因檢測(cè)試劑盒為上海之江人乳頭瘤病毒基因分型核酸測(cè)定試劑盒，可檢測(cè)HPV-DNA 高危型15種：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82，HPV-DNA 低危型2 種：6、11。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本的采集

用窺陰器暴露宮頸，宮頸取樣器刷取上皮細(xì)胞，然后將宮頸刷置于3 mL 細(xì)胞保存液中，沿宮頸刷柄折痕處將其折斷，旋緊管蓋并做好標(biāo)本標(biāo)識(shí)，將細(xì)胞保存液直立放置于4℃保存，在48 h 內(nèi)檢測(cè)完畢。

1.3.2 DNA 的提取

嚴(yán)格按照上海之江生物科技股份有限公司的人乳頭瘤病毒分型核酸測(cè)定試劑盒操作說明書提取DNA。

1.3.3 PCR 擴(kuò)增

將配制好的PCR 混合液（含有dNTP、Taq DNA 聚合酶、引物和熒光探針）36 μL 置于反應(yīng)管中，分別加入4 μL 已提取的DNA 樣品、陰性對(duì)照（H2O）和陽(yáng)性對(duì)照（含目的基因片段的缺陷性病毒），反應(yīng)體系總體積40 μL，3 000 r/min 離心4 s，上機(jī)擴(kuò)增。擴(kuò)增條件為94℃2 min；93℃10 s，62℃31 s，循環(huán)40 次；單點(diǎn)熒光檢測(cè)在62℃。

1.3.4 結(jié)果判定

根據(jù)廠家說明書判讀實(shí)驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)待檢樣本HPV 的Ct 值≤38，且擴(kuò)增曲線呈典型的S 型，則判斷為陽(yáng)性；若待檢樣本Ct 欄都顯示“No Ct”，檢測(cè)樣本判定為陰性；如果待檢樣本Ct 值在38～40 之間，需重復(fù)測(cè)定，如仍在38～40 之間，且擴(kuò)增曲線呈典型的S 型，則判斷為陽(yáng)性，若非典型S 型曲線，則判為陰性；當(dāng)待檢樣本HPV（IC）核酸熒光PCR 檢測(cè)混合液的VIC 通道Ct 值＞32，且在其他混合液中均為陰性，則無(wú)法判讀結(jié)果，說明提取存在問題或者PCR 檢測(cè)存在問題，需重復(fù)試驗(yàn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，計(jì)數(shù)資料用%表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV 感染總體情況

3 650 例受檢者中共檢測(cè)到HPV 感染陽(yáng)性患者825 例，總檢出率為22.60%（825/3650）。HPV 陽(yáng)性患者中，HPV 高危型745 例，占90.30%，低危型172 例，占20.85%，既感染高危型又感染低危型92例，占11.15%；多重感染情況見表1。

表1 北京市海淀區(qū)女性HPV 陽(yáng)性檢測(cè)中多重感染情況Table 1 Multiplex HPV infection results of women from Haidian District of Beijing

2.2 不同年齡段HPV 感染情況及亞型情況分析

3 650 例受檢人群以40～49 歲人群為主，＜20歲組和20 歲～年齡組感染率較高（59.09%，45.67%），顯著高于其他年齡組患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 北京市海淀區(qū)不同年齡段女性HPV 感染情況［n（%）］Table 2 HPV positive rate of each group of women from Haidian District of Beijing［n（%）］

2.3 不同HPV 亞型檢出情況

對(duì)825 例HPV 感染陽(yáng)性患者進(jìn)行分析，總體感染率高的五種亞型從高到底依次為HPV 52、HPV 6+11、HPV 16、HPV 58、HPV 51 型，單一感染和多重感染率高的三種亞型從高到底依次為HPV 52、HPV 6+11、HPV 16 型，見表3。

2.4 不同年齡段HPV 感染亞型情況分析

不同年齡組女性感染HPV 的亞型各不相同，但是基本以HPV 52、HPV 6+11、HPV 16 型為主，與總感染率基本一致，見表4。

3 討論

宮頸癌是威脅女性健康的最常見惡性腫瘤之一，雖然近年來我國(guó)積極推進(jìn)宮頸癌的篩查與防治工作，但是新發(fā)宮頸癌病例仍然呈逐年增加趨勢(shì)，發(fā)病年齡日益年輕化。HPV 感染，特別是持續(xù)的高危型HPV 感染是導(dǎo)致宮頸癌的最重要因素［4-5］。研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本幾乎都可以檢測(cè)到HPV 的感染，并且隨著宮頸病變的加重而提高，且HPV 感染類型的不同對(duì)患者產(chǎn)生的影響也不同［2］。

表3 北京市海淀區(qū)女性HPV 感染亞型情況［n（%）］Table 3 HPV positive rate of each group of women from Haidian District of Beijing［n（%）］

表4 北京市海淀區(qū)不同年齡段女性HPV 感染分布情況［n（%）］Table 4 HPV infection distribution of each age group of women from Haidian District of Beijing［n（%）］

HPV 的感染率會(huì)因地區(qū)和人群而有所不同，報(bào)道的范圍為1.4%～25.6%，分析認(rèn)為形成差異的主要原因，應(yīng)該是我國(guó)地域遼闊、民族眾多，各地區(qū)間經(jīng)濟(jì)發(fā)展不平衡所導(dǎo)致的生化活水平和條件不同造成的［6］。不少省市區(qū)發(fā)表了各地區(qū)HPV 感染情況的報(bào)告，如南京地區(qū)為33.47%［7］，上海浦東地區(qū)為23.43%［8］，連云港地區(qū)為25.31%［9］，福建省南平市為22.64%［10］，山東地區(qū)為29.38%［11］，西安地區(qū)為30.45%［12］。本研究H PV 的總感染率略低于其他地區(qū)，高危型HPV 感染的比例高于低危型HPV 感染的比例。Garg 等［13］研究結(jié)果顯示HPV亞型的分布與種族、年齡、地域有關(guān)，全世界范圍內(nèi)共同最常見的感染亞型為16、18、31 型。本文研究結(jié)果與我國(guó)常見的HPV 優(yōu)勢(shì)型別類型基本一致，蘇州地區(qū)報(bào)道的是HPV 52、HPV 81、HPV 16型［14］，貴陽(yáng)地區(qū)是HPV 52、HPV 16、HPV 58 型［15］，南京地區(qū)是HPV 16、HPV 58、HPV 52 型［7］，安徽地區(qū)是HPV16、HPV 52、HPV 58 型［16］，上海浦東地區(qū)是HPV 52、HPV 16、HPV 58 型［17］，北京地區(qū)天壇醫(yī)院報(bào)道的是HPV 52、HPV 58、HPV 16 型［6］。但是各地區(qū)檢出頻次構(gòu)成比略有差異，這與全世界范圍內(nèi)共同的最常見感染為HPV 16，HPV 18 型位居第二位有差異，HPV 52、HPV 58 型的感染率在國(guó)內(nèi)其他地區(qū)是否也遠(yuǎn)超HPV 18 型，這有待于進(jìn)一步研究確定。HPV 感染的型別具有人群地域的特點(diǎn)，造成亞型分布差異的原因可能研究對(duì)象不同、檢測(cè)試劑不同有關(guān)，但也可能與地理環(huán)境、社會(huì)生物因素或者遺傳免疫因素有關(guān)，這也提示各地區(qū)在篩查和預(yù)防HPV、進(jìn)行HPV 疫苗研究時(shí)，應(yīng)針對(duì)本地區(qū)的高致病亞型開展相關(guān)工作［6］。

本文研究顯示＜20 歲組感染率最高，為59.09%（13/22），排除＜20 歲組收集數(shù)據(jù)過少的原因，可能與女性宮頸發(fā)育不成熟，機(jī)體免疫系統(tǒng)在特殊時(shí)期變化調(diào)節(jié)，自身防御功能差有關(guān)，導(dǎo)致感染概率增高。HPV 感染是一個(gè)漫長(zhǎng)的過程，初次感染高危HPV 病毒后可長(zhǎng)期潛伏在細(xì)胞內(nèi)，而當(dāng)機(jī)體免疫低下時(shí)HPV 病毒恢復(fù)活性［18］，持續(xù)感染高危型HPV 感染時(shí)會(huì)誘發(fā)宮頸癌［19-20］。目前宮頸HPV 單一感染與多重感染對(duì)宮頸病變的影響尚無(wú)一致性結(jié)論，還需要更深入、更大樣本量以及更多地區(qū)的研究探討。

綜上所述，北京市海淀區(qū)解放軍總醫(yī)院第四醫(yī)學(xué)中心就診女性HPV 感染趨向低齡化，以單一感染為主，不同年齡組女性感染HPV 的亞型各不相同，總體感染率高的五種亞型從高到底依次為HPV 52、HPV6+11、HPV16、HPV58、HPV51 型，＜20歲組和20～29 歲組感染率較高。應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)年輕女性HPV 感染的監(jiān)測(cè)力度，通過引入和推廣HPV疫苗，并制定綜合合適的防治措施并有效應(yīng)用于特定人群，降低HPV 感染。