自然早產(chǎn)與足月分娩中胎盤(pán)Survivin表達(dá)量及妊娠時(shí)間的相關(guān)性研究

金亞玲　王祥珍

【摘要】 目的 探討自然早產(chǎn)與足月分娩中胎盤(pán)Survivin表達(dá)量與妊娠時(shí)間的相關(guān)性。方法 60例分娩產(chǎn)婦， 按照是否足月分娩分為早產(chǎn)組與足月產(chǎn)組， 每組30例。在產(chǎn)婦分娩后提取胎盤(pán)組織， 使用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）定量檢測(cè)胎盤(pán)Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量， 比較兩組胎盤(pán)組織中Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量， 分析Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量與妊娠時(shí)間的相關(guān)性。結(jié)果 早產(chǎn)組產(chǎn)婦胎盤(pán)組織中Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量（0.78±0.27）明顯低于足月產(chǎn)組的（1.41±0.23）， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。經(jīng)過(guò)相關(guān)性分析結(jié)果提示， 早產(chǎn)組產(chǎn)婦平均 Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量與妊娠時(shí)間呈線性正相關(guān)（r2=0.680， F=6.025， P<0.05）， 足月產(chǎn)組平均Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量與妊娠時(shí)間無(wú)線性相關(guān)性（r2=0.337， F=0.385， P>0.05）。結(jié)論 胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡與早產(chǎn)有關(guān)， 而Survivin因子表達(dá)不足會(huì)使胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡， Survivin表達(dá)量降低與早產(chǎn)的時(shí)間密切相關(guān)， 足月后Survivin表達(dá)量與妊娠時(shí)間無(wú)相關(guān)性。

【關(guān)鍵詞】 早產(chǎn);足月分娩;Survivin表達(dá);相關(guān)性;胎盤(pán)組織

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.28.016

Study on the correlation between placental Survivin expression and gestational time between Spontaneous preterm delivery and full-term delivery? ?JIN Ya-ling， WANG Xiang-zhen. Obstetrics and Gynecology Department， Shenzhen Nanshan District Maternity and Child Health Hospital， Shenzhen 518067， China

【Abstract】 Objective? ?To discuss the correlation between placental Survivin expression and gestational time between spontaneous preterm delivery and full-term delivery. Methods? A total of 60 cases of delivery women were divided into preterm delivery group and full-term delivery group according to whether they delivered at full term， with 30 cases in each group. The placental tissue was extracted after the parturients gave birth， and the relative expression of Survivin mRNA in the placenta was quantitatively detected by reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR）， and the relative expression of Survivin mRNA in the placental tissues of the two groups was compared. The correlation between Survivin mRNA relative expression and gestational time was analyzed. Results? ?The expression of Survivin mRNA in the placenta （0.78±0.27） of preterm delivery group was obviously lower than （1.41±0.23） of full-term delivery group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The results of correlation analysis showed that the mean relative expression of Survivin mRNA

was positively correlated with gestational time in preterm delivery group （r2=0.680， F=6.025， P<0.05）， but there was no linear correlation between gestational time and mean survivin mRNA expression in term delivery group （r2=0.337， F=0.385， P>0.05）. Conclusion? The apoptosis of placental trophoblast is related to premature delivery， and insufficient expression of Survivin factor can cause placental trophoblast cell apoptosis. The decrease of Survivin expression is closely related to the time of preterm delivery， and there is no correlation between Survivin expression after full-term and pregnancy time.

【Key words】 Preterm labor; Full-term labor; Survivin expression; Correlation; Placental tissue

早產(chǎn)是產(chǎn)科面臨的棘手問(wèn)題， 且全球發(fā)病率逐年增加， 給提高孕產(chǎn)婦安全帶來(lái)了極大的挑戰(zhàn)。導(dǎo)致早產(chǎn)的因素眾多， 主要包括胎盤(pán)因素和胎盤(pán)外因素。胎盤(pán)因素包括胎膜早破、雙胎及多胎、前置胎盤(pán)、胎盤(pán)早剝等， 胎盤(pán)外因素包括妊娠期高血壓綜合征、妊娠合并癥、妊娠期糖尿病或糖耐量異常[1]， 甚至孕婦微生態(tài)菌落均可影響分娩結(jié)局。目前， 主要研究更多關(guān)注在胎盤(pán)病變， 其中胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞的異常發(fā)育是導(dǎo)致早產(chǎn)的重要原因。研究表明， 胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡與早產(chǎn)有關(guān)， 其中胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞Survivin因子表達(dá)不足所致的細(xì)胞過(guò)度凋亡可能是其引起胎盤(pán)功能低下的原因， 最終導(dǎo)致早產(chǎn)發(fā)生的重要機(jī)制[2]。盡管抗凋亡因子Survivin與早產(chǎn)關(guān)系密切， 但是否與早產(chǎn)分娩的時(shí)間有相關(guān)性尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。為此， 本研究選擇本院的孕產(chǎn)婦為研究對(duì)象， 進(jìn)一步分析Survivin表達(dá)量與妊娠時(shí)間的相關(guān)性， 現(xiàn)在報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2018年5月～2019年5月收治的60例分娩產(chǎn)婦， 年齡22～35歲， 妊娠時(shí)間28～42周， 本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。按照是否足月分娩分為早產(chǎn)組與足月產(chǎn)組， 每組30例。早產(chǎn)組產(chǎn)婦平均年齡（28.4±3.8）歲， 平均妊娠時(shí)間（32.7±3.2）周;足月產(chǎn)組產(chǎn)婦平均年齡（29.2±4.5）歲， 平均妊娠時(shí)間（39.2±2.2）周。兩組年齡比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①產(chǎn)婦均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格產(chǎn)檢， 不具有妊娠高血壓綜合征;②無(wú)糖尿病、肝炎、甲狀腺功能亢進(jìn)（甲亢）、心臟病、肺結(jié)核、陰道炎等合并癥;③無(wú)子宮占位性病變及子宮肌層、宮頸等異常發(fā)育;④精神無(wú)異常;⑤全部患者均自愿參與研究并簽署知情同意書(shū)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①產(chǎn)婦產(chǎn)檢過(guò)程有異常指標(biāo)， 如胎兒窘迫、凝血異常等高風(fēng)險(xiǎn)并發(fā)癥;②拒絕捐獻(xiàn)胎盤(pán)進(jìn)行醫(yī)學(xué)研究;③有遺傳學(xué)異常或家族性疾病史。

1. 2 方法 收集產(chǎn)婦妊娠時(shí)間。在產(chǎn)婦自然分娩出（或剖宮產(chǎn)娩出）胎盤(pán)后， 迅速在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移胎盤(pán)至冰塊上， 提取胎盤(pán)母體面中央垂直位置至胎兒面， 約1 cm3 大小的組織， 放入-80℃液氮罐中速凍。取出標(biāo)本冰上超聲勻漿機(jī)研磨， 參照TRizol法提取總RNA， 用ddH2O稀釋1 μl樣品200倍后測(cè)定RNA濃度與純度。引物由Primer軟件設(shè)計(jì)、Takara公司合成， 參照反轉(zhuǎn)錄試劑盒自帶實(shí)驗(yàn)流程建議說(shuō)明， 選擇42℃反轉(zhuǎn)錄50 min， 95℃ 5 min滅活反轉(zhuǎn)錄酶。使用ABI 7300 Real-Time PCR System進(jìn)行Syber Green 熒光定量RT-PCR檢測(cè)， 其反應(yīng)體系為 SYBR Premix Ex Taq II（2X）12.5 μl、上下游引物各1 μl、cDNA 2 μl和dH2O 8.5 μl， 擴(kuò)增條件為95℃預(yù)變性30 s;95℃變性5 s， 60℃退火30 s， 共40個(gè)循環(huán)。分析Survivin mRNA/ GADPH mRNA， 采用2-ΔΔCt法進(jìn)行計(jì)算。本研究中的Survivin mRNA引物序列F-5′-GCAGGGGACAGGTGGGAAGT3′， R-5′GACTCCTGCCACTGGTTCATAC3′。GADPH mRNA引物序列F-5′CGGAGTCAACGGATTTGGTCGTAT 3′， R-5′AGCCTTCTCCATGGTGGTGAAGAC 3′。

1. 3 觀察指標(biāo) 比較兩組胎盤(pán)組織中Survivin mRNA 相對(duì)表達(dá)量[Survivin mRNA（/GADPH）]， 分析Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量與妊娠時(shí)間的相關(guān)性。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn);相關(guān)性檢驗(yàn)采用應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩組胎盤(pán)組織中Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量比較

早產(chǎn)組產(chǎn)婦胎盤(pán)組織中Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量（0.78±0.27）明顯低于足月產(chǎn)組的（1.41±0.23）， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2. 2 Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量與妊娠時(shí)間的相關(guān)性分析 經(jīng)過(guò)相關(guān)性分析結(jié)果提示， 早產(chǎn)組產(chǎn)婦平均 Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量與妊娠時(shí)間呈線性正相關(guān)（r2=0.680， F=6.025， P<0.05）， 足月產(chǎn)組平均Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量與妊娠時(shí)間無(wú)線性相關(guān)性（r2=0.337， F=0.385， P>0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

早產(chǎn)主要是指母體妊娠時(shí)間8～37周就分娩， 是常見(jiàn)的妊娠并發(fā)癥。主要臨床表現(xiàn)為子宮收縮、陰道少量出血、羊水流出、持續(xù)性腰痛等癥狀， 給產(chǎn)婦的生命安全造成威脅。此外， 早產(chǎn)對(duì)新生兒的影響也較大， 容易使新生兒出現(xiàn)低體溫、呼吸窘迫綜合征、動(dòng)脈導(dǎo)管閉合、腦出血、慢性腎病、肺功能障礙等并發(fā)癥， 對(duì)新生兒的生命健康和發(fā)育影響較大， 導(dǎo)致新生兒的生存率下降， 致殘率升高。有研究顯示， 約15%早產(chǎn)的新生兒最終死亡[3]。目前， 早產(chǎn)的病因仍不是十分清楚， 但是可以由多因素導(dǎo)致。隨著科技不斷進(jìn)步， 人們的生活條件有所改善， 許多不合理的飲食習(xí)慣和不良的生活習(xí)慣都會(huì)增加早產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)， 如吸煙、飲酒等。在人們研究胎盤(pán)病變過(guò)程中， 發(fā)現(xiàn)胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞的異常發(fā)育是導(dǎo)致早產(chǎn)的重要原因， 其中胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞Survivin因子表達(dá)不足能夠使細(xì)胞過(guò)度凋亡， 進(jìn)而可以引起胎盤(pán)功能低下， 最終導(dǎo)致早產(chǎn)。Survivin是胚胎組織及腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制新基因?？芍苯幼饔糜贑aspase-3和Caspase-7活性減輕細(xì)胞凋亡[4]， 也可參與調(diào)控周期蛋白激酶CDK4和CDK2相互作用阻斷凋亡信號(hào)通路[5]。Survivin的表達(dá)對(duì)于妊娠的結(jié)局有著極為重要的調(diào)控效果。研究發(fā)現(xiàn)， 胎盤(pán)Survivin表達(dá)降低是導(dǎo)致妊娠期高血壓尤其是重度子癇的關(guān)鍵原因， 也與反復(fù)性、復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)密切相關(guān)[6]。同時(shí)， 胎盤(pán)Survivin表達(dá)量與胎盤(pán)重量、新生兒體重也呈正相關(guān)[7]。然而， 胎盤(pán)的重量和成熟度關(guān)系密切。在自然早產(chǎn)患者中凋亡抑制因子Survivin的表達(dá)水平下降會(huì)促使細(xì)胞過(guò)度凋亡現(xiàn)象的發(fā)生， 致使胎盤(pán)功能下降， 不利于胎盤(pán)成熟[8]。王莉等[9]觀察早產(chǎn)患者的胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)現(xiàn)， 其中Survivin表達(dá)量顯著性下降， 從而導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲不足、胎盤(pán)著床過(guò)淺， 進(jìn)而發(fā)生早產(chǎn)[9， 10]。

本研究觀察了不同孕周期（28～42周）產(chǎn)婦胎盤(pán)中Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量， 結(jié)果顯示早產(chǎn)組產(chǎn)婦胎盤(pán)組織中Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量（0.78±0.27）明顯低于足月產(chǎn)組的（1.41±0.23）， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這與徐小華等[8]研究結(jié)果一致。同時(shí)， 本研究還發(fā)現(xiàn)， 在早產(chǎn)組產(chǎn)婦胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞中Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量與妊娠時(shí)間成線性正相關(guān)， 這也進(jìn)一步證實(shí)了Survivin在促進(jìn)胎盤(pán)成熟中的作用。

綜上所述， 早產(chǎn)是一項(xiàng)威脅產(chǎn)婦和新生兒生命健康的重要問(wèn)題， 雖然病因尚未明確， 但可以發(fā)現(xiàn)許多誘發(fā)因素可以導(dǎo)致早產(chǎn)。通過(guò)不斷研究發(fā)現(xiàn)， 胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡與早產(chǎn)有關(guān)， 而Survivin因子表達(dá)不足會(huì)使胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡， 進(jìn)而使胎盤(pán)功能低下， 最終導(dǎo)致早產(chǎn)的發(fā)生。通過(guò)本次研究， 為以后臨床研究相關(guān)內(nèi)容提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 黃玉晶， 王靈巧， 蘭蘭， 等. 2005-2011年我國(guó)早產(chǎn)相關(guān)因素的Meta分析. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)， 2014， 41（12）：2129-2133.

[2] 黃玲玲. 細(xì)胞凋亡抑制因子在自然早產(chǎn)胎盤(pán)的表達(dá)及其臨床意義. 海南醫(yī)學(xué)， 2011（13）：9-11.

[3] 鄭雙云， 徐小華， 張仙， 等. 細(xì)胞凋亡抑制因子Survivin的表達(dá)水平與自發(fā)性早產(chǎn)的關(guān)系研究. 中國(guó)婦幼衛(wèi)生雜志， 2018， 9（3）：10-12.

[4] Davoodi R， Esmailzadeh bahabadi S， Najafi SH， et al. Effect of Hydro Alcoholic Extract of Citrullus Colocynthis Fruit on Caspase 3 Gene Expression in MCF-7 Breast Cancer Cell Line. Journal of Shahid Sadoughi University of Medical Sciences， 2015， 23（5）：508-518.

[5] Deng L， Lu Y， Zhao X， et al. Ran GTPase protein promotes human pancreatic cancer proliferation by deregulating the expression of Survivin and cell cycle proteins. Biochemical & Biophysical Research Communications， 2013， 440（2）：322-329.

[6] 張素芝， 杜麗榮， 韓宏偉， 等. 反復(fù)自然流產(chǎn)患者妊娠組織中Survivin、VEGF及Stat3的表達(dá)及相關(guān)性. 河北醫(yī)藥， 2012， （11）：14-16.

[7] 李宗英， 趙得熊， 張海燕， 等. 高原地區(qū)妊娠期高血壓產(chǎn)婦胎盤(pán)Stat3、Survivin及MMP-2的表達(dá)水平及意義. 中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志， 2019（14）：40-44.

[8] 徐小華， 鄭雙蕓， 金亞玲， 等. 自然早產(chǎn)胎盤(pán)中細(xì)胞凋亡抑制因子survivin表達(dá)水平. 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志， 2016（4）：28-30.

[9] 王莉， 李清雪， 宋春紅， 等. Survivin、S100A12的表達(dá)與早產(chǎn)關(guān)系的研究. 中國(guó)計(jì)劃生育和婦產(chǎn)科， 2016， 8（7）：9-11.

[10] 周杰， 孟靜雯， 肖建平. 孕婦血清學(xué)標(biāo)志物預(yù)測(cè)胎盤(pán)缺血性疾病的研究進(jìn)展. 中國(guó)婦幼保健， 2018， 33（22）：5294-5297.

[收稿日期：2020-06-08]