絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者外周血T淋巴細胞亞群檢測及臨床意義

吳高峰

【摘要】 目的：觀察絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥（OP）患者外周血T淋巴細胞亞群的變化，并分析其臨床意義。方法：選取筆者所在醫(yī)院2016年3月-2019年3月60例絕經(jīng)后女性為研究對象，其中30例OP患者設(shè)為OP組，另30例非OP患者設(shè)為對照組。兩組均采用流式細胞儀檢查其外周血T淋巴細胞亞群水平，并進行統(tǒng)計分析。結(jié)果：OP組外周血T淋巴細胞、抑制性淋巴細胞（Ts）及輔助性T細胞（Th）均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。OP組Th/Ts比值、NK細胞（CD16+CD56+）及B淋巴細胞均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：絕經(jīng)后OP患者的外周血T淋巴細胞亞群改變可能引起T淋巴細胞、Ts、Th降低，導(dǎo)致其體液免疫及免疫應(yīng)答改變，使絕經(jīng)期女性發(fā)生免疫系統(tǒng)紊亂。

【關(guān)鍵詞】 絕經(jīng) 骨質(zhì)疏松癥 T淋巴細胞亞群

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.25.026 文獻標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2020）25-00-03

[Abstract] Objective： To observe the changes of peripheral blood T lymphocyte subsets in postmenopausal osteoporosis （OP） patients and analyze its clinical significance. Method： A total of 60 postmenopausal women in our hospital from March 2016 to March 2019 were selected as the study objects， among which 30 patients with OP were set as the OP group and the other 30 non-OP patients as the control group. The peripheral blood T lymphocyte subsets of both groups were examined by flow cytometry and analyzed statistically. Result： The levels of peripheral blood T lymphocytes， inhibitory lymphocytes （Ts） and helper T cells （Th） in the OP group were lower than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The Th/Ts ratio， NK cell （CD16+CD56+） and B lymphocytes in the OP group were higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion： The change of T lymphocyte subsets in peripheral blood of postmenopausal OP patients may cause the decrease of T lymphocytes， Ts and Th， resulting in the changes of humoral immunity and immune response， and the immune system disorder of menopausal women.

[Key words] Menopause Osteoporosis T lymphocyte subsets

First-authors address： Zhongshan Hospital， Xiamen University， Xiamen 361004， China

骨質(zhì)疏松癥（OP）是一種代謝性骨病變，主要癥狀為骨組織量減少，發(fā)生于任何年齡且男女不限，多見于絕經(jīng)后女性和老年男性[1]。有研究顯示，OP與女性體內(nèi)分泌系統(tǒng)密切相關(guān)，特別表現(xiàn)為雌性激素下降，人體免疫細胞因子、生長因子等作為多溶性介質(zhì)，也可影響骨細胞[2]。人體外周血淋巴細胞主要分為T淋巴細胞、抑制性淋巴細胞（Ts）、輔助性T細胞（Th）、細胞毒性T細胞（Tc）、效應(yīng)T淋巴細胞（Te）、B淋巴細胞及NK細胞（CD16+CD56+）。有研究表明，絕經(jīng)后OP患者外周血T淋巴細胞亞群的變化可影響人體免疫功能，抑制免疫應(yīng)答發(fā)生[3]。本研究通過抽取筆者所在醫(yī)院30例絕經(jīng)后OP患者與30例絕經(jīng)后非OP患者，對比分析其外周血T淋巴細胞亞群水平，以期進一步明確OP是否能影響絕經(jīng)后女性免疫系統(tǒng)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取筆者所在醫(yī)院2016年3月-2019年3月60例絕經(jīng)后女性為研究對象，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均為絕經(jīng)后婦女;（2）近2個月未接受其他藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）近期無新生骨折;（2）長期服用治療骨組織藥物;（3）有自身免疫性疾病、感染性疾病及腫瘤等。其中30例OP患者設(shè)為OP組，另30例非OP患者設(shè)為對照組。根據(jù)世界衛(wèi)生組織OP診斷標(biāo)準(zhǔn)，T值≥-1.0為骨組織量正常，-2.50.05），有可比性。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)?；颊呒凹覍俸炇鹜鈺?。

1.2 方法

采用流式細胞儀檢測兩組外周血T淋巴細胞亞群：（1）制備單細胞懸液，將1X10-7的細胞放入1.5 ml離心管中3 000 r/min離心5 min，棄上清液，然后加入FACS緩沖液100 μl懸浮細胞;（2）封閉表面Fc受體，在步驟（1）得到的液體中加入Fc受體抗體0.5 μl（0.5 mg/ml），水浴3 min;（3）細胞與熒光抗體結(jié)合，在步驟（2）得到的液體中加入熒光抗體1 μl（0.5 mg/ml），水浴30 min;（4）洗細胞去除游離的熒光抗體，在步驟（3）中加入FACS緩沖液350 μl，輕輕搖晃混勻，放置3 000 r/min的離心機離心5 min，棄上清液，重復(fù)步驟此操作2次;（5）上樣前處理，取100 μl儀器緩沖液加入細胞沉淀中，輕輕混勻懸浮細胞，將細胞懸液移入FACS專用管中，準(zhǔn)備進行儀器檢測和分析[6]。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組T淋巴細胞、Ts、Th、Th/Ts、CD16+CD56+、B淋巴細胞水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析和處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血T淋巴細胞、Ts、Th比較

OP組T淋巴細胞、Ts、Th均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 兩組外周血Th/Ts、CD16+CD56+及B淋巴細胞水平比較

OP組外周血Th/Ts、CD16+CD56+及B淋巴細胞水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

OP是由于人體正常骨質(zhì)量低下，骨結(jié)構(gòu)受損引起骨脆性升高的一種全身性骨病，分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類，發(fā)病機制包括內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂、機體代謝紊亂及其他因素，臨床上主要癥狀有腰背疼痛、骨折、呼吸功能下降。人到中老年時期，由于免疫功能低下，可能會引起此疾病產(chǎn)生，部分女性絕經(jīng)后雌性激素下降也可導(dǎo)致OP發(fā)生。有研究顯示，絕經(jīng)年齡可判斷OP發(fā)病率，即年齡越晚，發(fā)病率越低，與女性絕經(jīng)后體內(nèi)雌性激素水平下降有關(guān)，由于雌性激素能抑制破骨細胞的活性，雌性激素水平越低，破骨細胞活性越強，骨組織吸收量遠大于骨形成量[7]。

T細胞是人體內(nèi)重要的免疫細胞，也是淋巴細胞的主要組分，能直接殺死靶細胞，輔助B細胞產(chǎn)生抗體，其分泌的炎性因子與配體，能有效促進骨組織的形成吸收，另外，T淋巴細胞通過CD40配體及刺激分子，共同調(diào)節(jié)骨間質(zhì)細胞及成骨細胞之間的代謝，維持骨形成和骨吸收的動態(tài)平衡，這些細胞按功能可分為三個亞群，包括Th、Ts和Tc，Th通過與多肽發(fā)生反應(yīng)并分泌細胞因子，調(diào)節(jié)機體免疫反應(yīng)，增生免疫細胞;Th會協(xié)助B細胞產(chǎn)生抗體，與巨噬細胞結(jié)合后會去辨認(rèn)抗原，抗原刺激后釋放白介素，使得B細胞大量繁殖;Ts能抑制Th活性，從而抑制B細胞分化及Tc殺傷功能，負向調(diào)節(jié)體液免疫和細胞免疫;Tc分泌各種細胞因子參與免疫作用，能殺死某種病毒及腫瘤細胞等抗原物質(zhì)，與NK細胞構(gòu)成機體抗病毒、抗腫瘤免疫的重要防線。本研究中，OP組外周血T淋巴細胞、Ts及Th均低于對照組，表明OP能改變患者T淋巴細胞亞群水平，從而影響免疫系統(tǒng)，使得細胞免疫及體液免疫出現(xiàn)異常，這與劉欣榮等[8]的研究結(jié)果一致。OP組Th/Ts比值、CD16+CD56+及B淋巴細胞均高于對照組，也表明T淋巴細胞亞群的變化，導(dǎo)致人體免疫系統(tǒng)紊亂，方虹等[9]的研究結(jié)果也證實了這一點。絕經(jīng)后女性免疫系統(tǒng)與成骨細胞和破骨細胞相互影響，T淋巴細胞亞群的改變導(dǎo)致免疫系統(tǒng)紊亂，進而引起自身免疫性疾病，出現(xiàn)關(guān)節(jié)、骨骼等功能受損。

T細胞能刺激或抑制成骨細胞、破骨細胞，與其亞群、細胞因子等因素有相似作用，還可產(chǎn)生調(diào)節(jié)因子影響骨組織與細胞之間的代謝，活化后的T細胞產(chǎn)生破骨細胞必要的效應(yīng)因子，通過酶切效應(yīng)因子分泌可溶性因子，對骨轉(zhuǎn)移及絕經(jīng)后OP患者也起著非常重要的作用，人體B淋巴細胞分化過程為前B細胞、不成熟B細胞、成熟B細胞、活化B細胞和漿細胞。其中前兩期增殖分化過程在骨髓中進行，后階段的增殖分化過程主要在免疫器官中進行，人體淋巴細胞的增殖分化與其骨髓造血微環(huán)境處于同一個環(huán)境中，可共享微環(huán)境中多種細胞因子、調(diào)節(jié)分子等[10-12]。通過細胞因子調(diào)節(jié)造血細胞的增殖分化，使得免疫系統(tǒng)與骨骼系統(tǒng)保持動態(tài)平衡，當(dāng)免疫系統(tǒng)處于異常狀態(tài)，骨骼系統(tǒng)任何功能變化都會導(dǎo)致骨細胞出現(xiàn)嚴(yán)重危害，從而使得免疫功能紊亂。

綜上所述，絕經(jīng)后OP能使T淋巴細胞、Ts、Th指標(biāo)降低，Th/Ts，CD16+CD56+及B淋巴細胞水平升高，導(dǎo)致患者體液免疫及免疫應(yīng)答出現(xiàn)相應(yīng)的改變，使絕經(jīng)期女性發(fā)生免疫系統(tǒng)紊亂。

參考文獻

[1]陳旭，陳瀚宇.骨質(zhì)疏松癥從肝脾腎三臟論治探析[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2017，15（23）：1533-1535.

[2]周曉方.老年內(nèi)分泌失調(diào)性骨質(zhì)疏松癥內(nèi)分泌綜合治療73例臨床分析[J/OL].實用婦科內(nèi)分泌雜志：電子版，2017，2（23）：46-48.

[3]徐玉善，江艷，李紅，等.絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的T細胞亞群的變化及意義[J]，昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2015，36（4）：34-36.

[4]許一帆，樊炳楷，黃金山，等.肌少-骨質(zhì)疏松癥的研究進展[J].中醫(yī)正骨，2019，31（5）：22-25.

[5]李東.血清E2與E2、T比值對中老年婦女骨質(zhì)疏松診斷與病情進展的檢測效果分析[J].包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2019，24（4）：25-27.

[6]吳澤，許瑞環(huán)，陳思曼.首發(fā)精神分裂癥患者血清細胞因子水平與外周血T淋巴細胞亞群的表達及意義[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2019，13（15）：82-83.

[7]趙利濤，呂海文，薛鵬舉.年齡和雌激素對絕經(jīng)后婦女骨轉(zhuǎn)換生化指標(biāo)的影響[J].中國骨質(zhì)疏松雜志，2019，25（3）：334-338.

[8]劉欣榮，蘇俊平，陳云霞，等.Graves病骨質(zhì)疏松患者免疫功能狀況及引起骨質(zhì)疏松的作用機制研究[J].中國OP雜志，2019，15（6）：813-816.

[9]方虹，魯林.絕經(jīng)后女性Prdxs蛋白家族水平與骨質(zhì)疏松的關(guān)系[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2019，25（11）：839-844.

[10]田曉玲，楊菲，吳宇軒.造血干細胞及其應(yīng)用研究進展[J].中國細胞生物學(xué)學(xué)報，2019，23（6）：1003-1011.

[11]林紅曉，王東巖.骨代謝標(biāo)志物對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松人群骨折的預(yù)測價值[J].海南醫(yī)學(xué)，2018，29（2）：199-201.

[12]吳迎星，譚家余，吳賽珠，等.絕經(jīng)后婦女雌激素缺乏與外周血T淋巴細胞亞群改變的關(guān)系研究[J].中華老年多器官疾病雜志，2003，2（2）：110-113.

（收稿日期：2020-03-27） （本文編輯：桑茹南）