湛江駁骨消在骨折模型鼠骨折愈合過程中的作用研究

吳東明 李木英 陳桂鵬 楊苗健 黃濛偲 董 遼

廣東省湛江市第二中醫(yī)醫(yī)院骨傷三科，廣東湛江 524013

骨折是臨床常見外傷，如何促進骨折愈合，是骨傷科的重要研究方向。骨折的愈合是重新獲得骨結(jié)構(gòu)的強度，再現(xiàn)胚胎原始骨發(fā)育方式，最終恢復原有的骨結(jié)構(gòu)和性能。骨折經(jīng)歷血腫機化期，原始骨痂期，骨痂改造期，中醫(yī)將骨折愈合過程分為瘀袪、新生、骨合三個階段。中醫(yī)在不同時期辨證治療方案不同，早期以活血化瘀為主，中期以續(xù)筋接骨為主，后期以強壯筋骨為主[1-2]。湛江駁骨消是本土道地藥材，該藥在緩解骨折局部腫脹及疼痛，促進骨折愈合等方面具有較好的效果[3]，但目前缺少基礎及臨床研究。本研究探討其在骨折模型鼠骨折愈合過程中的作用，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 動物

SPF級大鼠80只，3個月齡，重量（350±25）g。隨機分為4組，每組20只，分別為駁骨消內(nèi)服組、駁骨消外敷組、接骨七厘片內(nèi)服組、對照組。研究大鼠由廣東醫(yī)科大學實驗動物中心提供；大鼠品系：SD大鼠。

1.2 骨折造模及給藥方式

腹腔麻醉，大鼠仰臥，左下肢髕骨內(nèi)緣1cm長縱切口，逐層切開，暴露股骨髁間凹，插入注射針沿髓腔擴髓值股骨粗隆間。逆行插入克氏針至股骨大粗隆外，逐層縫合切口。大鼠仰臥，左側(cè)脛骨外展內(nèi)旋為固定于造模支架的鐵砧凹槽上，用砝碼自25～30cm處自由落體撞擊，建立大鼠骨折模型。

駁骨消內(nèi)服組：正常飼養(yǎng)，駁骨消（湛江市寶滿姨草藥店提供新鮮草藥）水煎服，每次0.2g，每日2次。駁骨消外敷組：正常飼養(yǎng)，250g駁骨消粉劑溶于500mL 75%酒精，外敷患處，每只每次外敷2～3g，每日2次。接骨七厘片（湖南金沙藥業(yè)有限責任公司，國藥準字 Z20003140，規(guī)格：0.30×60s）。內(nèi)服組：正常飼養(yǎng)，接骨七厘片1片，碾碎，溶于水，灌服，每日2次。對照組僅給予正常飼養(yǎng)。

1.3 檢測指標

分別于第1、2、4、6周每周每組各處死5只大鼠，處死前行血清學分析，處死后，觀察左側(cè)脛骨骨折愈合情況。血清學檢測指標包括鈣（偶氮胂Ⅲ法）、磷濃度（磷鉬酸紫外法），血清總堿性磷酸酶（sTAP）（速率法）、血清骨鈣素（OC）（ELISA測定法）。試劑盒均有中山標佳生物科技有限公司提供。

拍攝X線片，觀察骨痂組織形成和骨折愈合進程。參考柴本甫等[4]骨折愈合評分方法，根據(jù)骨折斷端邊緣變化、骨痂量、骨痂密度、骨痂邊緣情況評1～4分，計算總得分?？偡?～16分。

1.4 統(tǒng)計學方法

應用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料以（）表示，多組比較采用F檢驗，組內(nèi)兩個時間點比較以及組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 治療后不同時間點血清骨鈣素水平比較

在治療后第1周、第2周、第4周及第6周，駁骨消內(nèi)服組、駁骨消外敷組以及接骨七厘片內(nèi)服組血清骨鈣素水平均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 治療后不同時間點各組血清總堿性磷酸酶比較

在治療后第1周、第2周、第4周及第6周，駁骨消內(nèi)服組、駁骨消外敷組以及接骨七厘片內(nèi)服組血清總堿性磷酸酶水平均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表1 治療后不同時間點血清骨鈣素水平比較

表1 治療后不同時間點血清骨鈣素水平比較

注：（1）駁骨消內(nèi)服組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05，與第4周比較，dP＜0.05；（2）駁骨消外敷組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05，與第4周比較，dP＜0.05；（3）接骨七厘片內(nèi)服組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05,與第4周比較，dP＜0.05；（4）第1周、第2周、第4周及第6周與對照組比較，cP＜0.05

組別 第1周 第2周 第4周 第6周 F P駁骨消內(nèi)服組 12.9±0.6c 15.1±1.1ac 18.8±1.2abc 13.1±1.0bdc 37.352 ＜0.05駁骨消外敷組 12.8±0.8c 15.0±1.0ac 18.6±1.3abc 13.0±1.1bdc 31.880 ＜0.05接骨七厘片內(nèi)服組 12.6±0.7c 14.6±0.9ac 18.4±1.5abc 12.8±1.0bc 31.766 ＜0.05對照組 9.5±0.6 9.8±0.7 10.3±0.7 10.1±0.8 1.237 ＞0.05 F 29.009 37.317 58.771 10.753 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 治療后不同時間點血清鈣水平比較

在治療后第2周、第4周，駁骨消內(nèi)服組、駁骨消外敷組以及接骨七厘片內(nèi)服組血清鈣水平均顯著低于對照組，第6周顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

2.4 治療后不同時間點血清磷水平比較

在治療后第2周、4周及6周，駁骨消內(nèi)服組、駁骨消外敷組以及接骨七厘片內(nèi)服組血清磷水平均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4。

2.5 治療后不同時間點X線片檢查結(jié)果比較

術(shù)后第1周、第2周、第4周以及第6周駁骨消內(nèi)服組、駁骨消外敷組以及接骨七厘片內(nèi)服X線片檢查骨折愈合評分均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表5。

3 討論

骨折愈合經(jīng)過三個時期，骨折后血腫逐漸機化，骨內(nèi)外模處開始形成骨樣組織，進入膜內(nèi)化骨及軟骨化骨過程，形成原始骨痂，然后原始骨痂進行改造塑形。年齡、全身健康狀況、骨折局部情況是影響骨折后骨折愈合的主要因素。全身健康狀況差，如營養(yǎng)不良、糖尿病、鈣磷代謝紊亂、惡性腫瘤等患者，骨折愈合延遲[5-6]。另外，骨折部位的血運情況也是影響骨折愈合的重要因素。血液循環(huán)不佳，容易發(fā)生延遲連續(xù)、不連續(xù)或者骨壞死。

表2 治療后不同時間點各組血清總堿性磷酸酶比較（，U/L）

表2 治療后不同時間點各組血清總堿性磷酸酶比較（，U/L）

注：（1） 駁骨消內(nèi)服組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；與第4周比較，dP＜0.05；（2）駁骨消外敷組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05，與第4周比較，dP＜0.05；（3）接骨七厘片內(nèi)服組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05,與第4周比較，dP＜0.05；（4）對照組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（5）第1周、第2周、第4周及第6周與對照組比較，cP＜0.05

組別 第1周 第2周 第4周 第6周 F P駁骨消內(nèi)服組 46.4±4.1c 71.6±8.8ac 64.2±7.5ac 56.8±6.8abdc 11.763 ＜0.05駁骨消外敷組 45.9±5.0c 72.1±8.9ac 65.1±7.2ac 55.3±6.0abdc 13.631 ＜0.05接骨七厘片內(nèi)服組 46.0±4.8c 71.8±9.0ac 65.3±7.6ac 54.8±5.9abdc 13.199 ＜0.05對照組 39.4±2.5 53.6±5.7a 49.4±6.6a 44.1±6.0b 4.742 ＜0.05 F 3.170 6.156 5.734 4.440 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表3 治療后不同時間點血清鈣水平比較

表3 治療后不同時間點血清鈣水平比較

注：（1）駁骨消內(nèi)服組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05；（2）駁骨消外敷組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05；（3）接骨七厘片內(nèi)服組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05；（4）第2周、第4周及第6周與對照組比較，cP＜0.05

組別 第1周 第2周 第4周 第6周 F P駁骨消內(nèi)服組 2.8±0.4 2.2±0.2ac 2.0±0.2ac 2.7±0.3c 3.379 ＜0.05駁骨消外敷組 2.8±0.5 2.1±0.2ac 1.9±0.1ac 2.6±0.2c 3.140 ＜0.05接骨七厘片內(nèi)服組 2.7±0.4 2.2±0.2ac 2.0±0.2ac 2.6±0.3c 4.561 ＜0.05對照組 2.7±0.3 2.5±0.2 2.3±0.2 2.2±0.2 2.778 ＞0.05 F 0.101 3.750 4.615 3.782 P＞0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表4 治療后不同時間點血清磷水平比較

表4 治療后不同時間點血清磷水平比較

注：（1）駁骨消內(nèi)服組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05，第4周與第2周比較，bP＜0.05；（2）駁骨消外敷組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（3）接骨七厘片內(nèi)服組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（4）對照組組內(nèi)比較，與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（5）第2周、第4周及第6周與對照組比較，cP＜0.05

組別 第1周 第2周 第4周 第6周 F P駁骨消內(nèi)服組 0.8±0.2 1.5±0.2ac 1.9±0.3abc 1.6±0.2ac 16.667 ＜0.05駁骨消外敷組 0.9±0.2 1.4±0.3ac 1.8±0.3abc 1.5±0.3ac 7.368 ＜0.05接骨七厘片內(nèi)服組 0.8±0.2 1.4±0.4ac 1.9±0.2abc 1.6±0.3ac 9.593 ＜0.05對照組 0.7±0.2 1.0±0.2 1.4±0.1ab 1.1±0.2a 8.817 ＜0.05 F 0.833 2.980 3.116 4.359 P＞0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表5 治療后不同時間點X線片檢查結(jié)果比較（，分）

表5 治療后不同時間點X線片檢查結(jié)果比較（，分）

注：（1）駁骨消內(nèi)服組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（2）駁骨消外敷組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（3）接骨七厘片內(nèi)服組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（4）對照組組內(nèi)比較：與第1周比較，aP＜0.05；與第2周比較，bP＜0.05；與第4周比較，dP＜0.05；（5）第1周、第2周、第4周及第6周與對照組比較，cP＜0.05

組別 第1周 第2周 第4周 第6周 F P駁骨消內(nèi)服組 5.4±0.5c 13.8±1.0ac 16.0±0.1abc 16.0±0.1abc 406.610 ＜0.05駁骨消外敷組 5.3±0.6c 13.6±1.1ac 15.9±0.1abc 16.0±0.1abc 321.590 ＜0.05接骨七厘片內(nèi)服組 5.3±0.5c 13.7±1.1ac 15.8±0.2abc 16.0±0.1abc 336.690 ＜0.05對照組 4.3±0.4 10.4±1.0a 15.0±0.5ab 15.7±0.2abd 361.780 ＜0.05 F 5.278 12.349 13.495 6.429 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

中醫(yī)對骨折的治療有悠久的歷史[7-8]。明代薛己《正體類要·序》中指出“肢體傷于外，則氣血傷于內(nèi)，營衛(wèi)有所不貫，臟腑由之不和”，強調(diào)了氣滯血瘀是骨折后的主要病理變化。清代陳士鐸在《百病辨證錄》中指出：“血不活則瘀不去，瘀不去則骨不能接。”指出骨折早期中在去瘀生新，中期當以續(xù)筋接骨藥物促進骨折愈合，后期主要補益類藥物增強肝腎功能，加速骨折愈合。中醫(yī)根據(jù)辨證分型，在不同的愈合時期給予不同的治療方案。在早期，主要為氣血瘀阻，以活血化瘀、消腫止痛為主；中期主要為血瘀氣滯，以續(xù)筋接骨、行氣活血為主；后期主要為肝腎虧虛，以補益肝腎、強壯筋骨為主。中醫(yī)歷代醫(yī)家在不斷的總結(jié)和創(chuàng)新中，積累了豐富的經(jīng)驗，認為不管以內(nèi)服或者外用藥物均有活血化瘀、消腫止痛、續(xù)筋接骨的作用，補腎藥物還有壯骨長骨的功能[9]。

湛江駁骨消是一種本都道地藥材，性味苦、甘、平，有祛風止痛，袪瘀，續(xù)筋接骨，在當?shù)孛耖g骨傷科應用流傳已久，用法上包括外敷與內(nèi)服。該藥在緩解骨折后局部腫脹及疼痛、促進骨折愈合等方面具有明顯的效果[10-11]。在本研究中，駁骨消無論外敷或者內(nèi)服，均可通過改善血清鈣、磷水平，提高堿性磷酸酶、骨鈣素水平，促進骨折的愈合，其效果與傳統(tǒng)中藥接骨七厘片相似，骨折愈合時間情況顯著優(yōu)于對照組。鈣磷代謝是復雜的過程，體液中鈣磷濃度直接和間接影響身體生理功能。正常情況下，骨鹽不斷被溶解，釋放鈣進入血液，而骨組織又不斷從血液中攝取鈣原色以供骨細胞鈣化，以維持骨的更新及血鈣、血磷的平衡。骨折后，斷端附近骨細胞繁殖、分化、增生活躍，形成骨樣組織，進而鈣化、骨化，這個過程中大量的骨鹽形成并沉積于此，在全身個組織器官調(diào)節(jié)下，骨細胞從血液中攝取的鈣增加，可見在骨折愈合期，鈣元素因大量沉積在骨折部位，因此血鈣水平會反而下降，給機體為了維持正常的鈣磷乘積，血磷水平升高[12-13]。本研究中可看出，在第1周四組血鈣水平?jīng)]有顯著差異，進入第2周至第4周，駁骨消內(nèi)服組與外敷組以及接骨七厘片內(nèi)服組血鈣水平均顯著下降，明顯低于對照組，X線片檢查結(jié)果顯示，在第4周，藥物治療的三組骨折基本愈合，因此在第6周，該三組的血鈣水平逐漸回升，而對照組的血鈣水平仍維持在較低水平，這也證實，對照組骨折愈合延遲，而藥物治療促進了骨折愈合。王愛明等[14]研究顯示，駁骨膏骨折后外敷，可顯著縮短骨折愈合時間，在骨折后第2、3、4周患者血管水平下降，血磷水平升高，這與本研究結(jié)果一致。張迪暉等[15]研究顯示，使用夾板內(nèi)固定配合駁骨油紗外敷治療Colles骨折時，可促進骨折腫脹消失，提示其具有祛瘀消腫的作用。

綜上所述，湛江駁骨消可顯著促進骨折模型鼠骨折愈合，促進鈣元素向骨折部位沉積，內(nèi)服與外敷具有相似的作用。