50 g/L雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑高效液相色譜分析

張繼偉，王鵬思，朱春雨，張 博，牛洺鑫，張宗儉*

(1.中化化工科學(xué)技術(shù)研究總院有限公司，北京 100083；2.巴斯夫(中國)有限公司，北京100027)

雙丙環(huán)蟲酯(afidopyropen)發(fā)現(xiàn)于生物發(fā)酵產(chǎn)品，為丙烯類(pyropenes)化合物，是日本明治制果藥業(yè)株式會社與北里研究所共同研發(fā)的生物源殺蟲劑。其作用機(jī)制不同于常規(guī)殺蟲劑，它通過干擾昆蟲香草酸瞬時受體通道復(fù)合物的調(diào)控而發(fā)揮作用，從而干擾昆蟲的取食和其他行為，最終導(dǎo)致昆蟲饑餓而亡。該物質(zhì)被國際殺蟲劑抗性行動委員會(簡稱：IRAC)歸入9D組的首個、同時也是唯一一個殺蟲劑成分，與市面上現(xiàn)有蟲害管理系統(tǒng)無交互抗性[1]。

巴斯夫歐洲公司于2019年1月30日在我國取得了92.5%雙丙環(huán)蟲酯原藥、50 g/L雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑(商品名稱英威)和75 g/L阿維菌素·雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑(商品名稱英雷)的登記[2]。姜宜飛、吳進(jìn)龍等分別報道了雙丙環(huán)蟲酯原藥和75 g/L阿維菌素·雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑的分析方法[3-4]，但對于50 g/L雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑的分析方法目前國內(nèi)尚未見公開報道。本文采用高效液相色譜法，對巴斯夫的“英威”進(jìn)行分析，該方法操作簡便、快速、準(zhǔn)確，可以作為企業(yè)生產(chǎn)過程質(zhì)量控制和產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)管機(jī)構(gòu)分析檢測的參考方法。

1 試驗部分

1.1 材料與試劑

94.4%雙丙環(huán)蟲酯標(biāo)樣(德國Dr. Ehrenstorfer公司)；水：純凈水(屈臣氏)；乙腈：色譜純(Thermo Fisher)；磷酸：分析純(阿拉丁試劑)；商品名為英威的50 g/L雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑(從市場購買)。

1.2 儀器與設(shè)備

島津LC-20高效液相色譜儀，配有二極管陣列檢測器和自動進(jìn)樣器；安捷倫Zorbax SB-C18色譜柱(150 ×4.6 mm, 5 μm)；超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；0.45 μm 有機(jī)相針式過濾器(津騰)；50 mL容量瓶(北京化玻站有限公司)。

1.3 液相色譜操作條件

流動相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(體積比40∶60)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：230 nm；柱溫：30 ℃，進(jìn)樣體積：5.0 μL；保留時間：4.745 min。雙丙環(huán)蟲酯標(biāo)樣的高效液相色譜圖見圖1，50 g/L雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑(英威)的高效液相色譜圖見圖2。

圖1 雙丙環(huán)蟲酯標(biāo)樣的高效液相色譜圖

圖2 50 g/L雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑(英威)的高效液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取0.05 g(精確至0.000 2 g)雙丙環(huán)蟲酯標(biāo)樣于50 mL容量瓶中，加入20 mL乙腈，超聲振蕩5 min，使標(biāo)樣全部溶解，冷卻至室溫，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL 容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。用0.45 μm濾膜過濾，備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取0.05 g(精確至0.000 2g)雙丙環(huán)蟲酯的試樣于50 mL容量瓶中，加入20 mL乙腈，超聲振蕩5 min，冷卻至室溫，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。用0.45 μm濾膜過濾，備用。按照上述方法分別配置試樣溶液1和試樣溶液2。

1.4.3 測定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)進(jìn)數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針雙丙環(huán)蟲酯標(biāo)樣的響應(yīng)值相對變化小于1.5%后，按照標(biāo)樣溶液1、試樣溶液1、試樣溶液1、標(biāo)樣溶液1、標(biāo)樣溶液1、試樣溶液2、試樣溶液2、標(biāo)樣溶液1的順序進(jìn)行測定。

1.4.4 計算

將測得的2針試樣溶液中雙丙環(huán)蟲酯峰面積以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中雙丙環(huán)蟲酯響應(yīng)因子分別進(jìn)行平均。試樣中雙丙環(huán)蟲酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω1(%)按式⑴和⑵計算：

式中：f為標(biāo)樣溶液中雙丙環(huán)蟲酯的響應(yīng)因子；m1為雙丙環(huán)蟲酯標(biāo)樣的質(zhì)量，g；A1為標(biāo)樣溶液中雙丙環(huán)蟲酯峰面積的平均值；ω1為試樣中雙丙環(huán)蟲酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；A2為試樣溶液中雙丙環(huán)蟲酯峰面積的平均值；ω為雙丙環(huán)蟲酯標(biāo)樣的純度，%；m2為試樣的質(zhì)量，g。

將試樣溶液1和試樣溶液2中測得的雙丙環(huán)蟲酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)的平均值作為測定結(jié)果。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

采用自帶DAD檢測器光譜數(shù)據(jù)采集功能的島津LC-20，在200～400 nm，對試樣溶液進(jìn)行紫外掃描，得到雙丙環(huán)蟲酯的吸收波長與響應(yīng)值的紫外吸收光譜圖(圖3)。發(fā)現(xiàn)雙丙環(huán)蟲酯在230 nm附近有最大紫外吸收，雜質(zhì)干擾小，且流動相無吸收，故將檢測波長選定為230 nm。

圖3 雙丙環(huán)蟲酯的紫外吸收光譜圖

2.2 流動相的選擇

采用安捷倫 SB-C18(150 ×4.6 mm，5 μm)色譜柱進(jìn)行反相液相色譜分析。結(jié)合雙丙環(huán)蟲酯自身的理化性質(zhì)特點，采用常用的乙腈-水體系作為流動相。為了得到更好的峰形，在水相體系里加入0.1%的磷酸。通過對不同配比的乙腈-0.1%的磷酸水體系的分離效果對比，確定最佳的流動相配比為乙腈-0.1%磷酸水(體積比40∶60)，流速為1.0 mL/min。此時，有效成分的保留時間為4.7 min左右，且有效成分能與雜質(zhì)很好地分離。譜圖基線平穩(wěn)，峰形尖銳且對稱，分析時間較短。

2.3 方法的特異性

采用二極管陣列檢測器，在200～400 nm，對50 g/L雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑樣品溶液進(jìn)行光譜純度檢查，4.746 min色譜峰的光譜純度為1.000 000(圖4)，表明此波長處雜質(zhì)對有效成分沒有干擾，符合定量分析要求。

圖4 50 g/L雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑HPLC-PDA峰純度色譜圖

2.4 方法線性相關(guān)性的測定

以乙腈為溶劑，分別配制質(zhì)量濃度約為 0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 g/L的雙丙環(huán)蟲酯標(biāo)樣溶液，按照上述色譜條件，依次進(jìn)行測定。將測得的結(jié)果，以雙丙環(huán)蟲酯質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，不同質(zhì)量濃度溶液的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制雙丙環(huán)蟲酯的線性相關(guān)曲線。結(jié)果表明：雙丙環(huán)蟲酯在質(zhì)量濃度為0.02～0.50 g/L時呈線性關(guān)系，其線性方程為y=1×107x+10 400，線性相關(guān)系數(shù)R2為1.000 0，雙丙環(huán)蟲酯在測定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(圖5)。

圖5 雙丙環(huán)蟲酯峰面積與質(zhì)量濃度關(guān)系圖

2.5 方法精密度的測定

在上述色譜分析條件下，從同一個50 g/L雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑樣品中準(zhǔn)確稱取6個試樣，進(jìn)行平行測定，考察方法的精密度(表1)。從表1可知，雙丙環(huán)蟲酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01%，變異系數(shù)為0.21%。這表明該方法的重現(xiàn)性良好，精密度高，能夠滿足定量分析的要求。

2.6 方法準(zhǔn)確度的測定

從已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)(4.71%)的50 g/L雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑中準(zhǔn)確稱取6個試樣，分別加入一定量的雙丙環(huán)蟲酯標(biāo)準(zhǔn)品，按照 1.3節(jié)的液相色譜條件測定待測樣品中雙丙環(huán)蟲酯的質(zhì)量，計算得雙丙環(huán)蟲酯的平均回收率為 100.06%。這表明該方法回收率較好，準(zhǔn)確度高。

表1 精密度試驗

表2 準(zhǔn)確度試驗

3 結(jié) 論

研究和建立了反相高效液相色譜法分析巴斯夫的市售產(chǎn)品50 g/L雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑的方法。試驗結(jié)果表明，該方法具有較高的精密度和準(zhǔn)確度，線性關(guān)系良好，簡單快速，適用于50 g/L雙丙環(huán)蟲酯可分散液劑的定性定量分析，為相關(guān)產(chǎn)品監(jiān)管部門提供了檢測依據(jù)。