黃芩苷介導(dǎo)光動(dòng)力療法治療宮頸癌的療效及其機(jī)制研究

郭婕　潘彥舒　龐大承　牟天龍

摘要 目的：觀察黃芩苷介導(dǎo)光動(dòng)力療法（PDT）治療宮頸癌的療效，探討其可能機(jī)制。方法：將宮頸癌Hela細(xì)胞懸液注入裸鼠皮下，構(gòu)建移植瘤模型，成模后隨機(jī)均勻分為模型組、黃芩苷-PDT觀察組、PDT觀察組、姜黃素-PDT觀察組4組，每組18只。PDT觀察組：腫瘤周?chē)⑸?00 μL生理鹽水，6 h后瘤周注射硼砂緩沖液100 μL后行PDT治療，照射劑量為80 J/cm2（435 nm波長(zhǎng)，0.60 A，0.54 W，距離腫瘤表面3～5 cm，照射2 min 28 s）;黃芩苷-PDT觀察組：以80 μg/mL的黃芩苷溶液100 μL代替生理鹽水，其他同PDT觀察組;姜黃素-PDT觀察組：以50 μmol/L的姜黃素溶液100 μL代替生理鹽水，其他同PDT觀察組;模型組：以自然光照代替PDT治療，其他同PDT觀察組。治療1 d后，各組處死6只取材腫瘤組織制備成病理切片，HE染色觀察組織病理學(xué)改變;另外處死6只，利用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)腫瘤組織中Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)情況;剩余6只分別于治療第1、3、7、14 d測(cè)量腫瘤體積，計(jì)算腫瘤體積抑瘤率。結(jié)果：模型組腫瘤體積持續(xù)增大，光動(dòng)力治療1 d后腫瘤組織出現(xiàn)壞死，腫瘤生長(zhǎng)受到抑制，黃芩苷-PDT觀察組和姜黃素-PDT觀察組腫瘤體積在3 d內(nèi)均無(wú)增大趨勢(shì)，隨后逐漸增大。黃芩苷-PDT觀察組Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：黃芩苷介導(dǎo)的PDT能夠有效抑制宮頸癌體外移植瘤的增長(zhǎng)，其機(jī)制可能通過(guò)促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡發(fā)揮作用。

關(guān)鍵詞 黃芩苷;姜黃素;光動(dòng)力療法;腫瘤抑制;凋亡機(jī)制

Abstract Objective：To observe the therapeutic effects of baicalin-mediated photodynamic therapy （PDT） on cervical cancer and explore its possible mechanism. Methods：A cervical cancer Hela cell suspension was injected subcutaneously into nude mice to construct a transplanted tumor model. After the model was formed， it was randomly and evenly divided into 4 groups： a model group， a baicalin-PDT treatment group， a PDT treatment group， and a curcumin-PDT treatment group ， with 18 cases in each group. PDT treatment group： 100μL of saline was injected around the tumor， and 100 μL of borax buffer was injected around the tumor 6 hours later， followed by PDT treatment. The irradiation dose was 80J/cm2 （435nm wavelength， 0.60A， 0.54W， 3-5cm from the tumor surface， irradiation 2 min28s）; Baicalin-PDT treatment group： 100 μL of baicalin solution at 80 μg/mL instead of normal saline， others were the same as PDT treatment group; curcumin-PDT treatment group： 50 μmol/L curcumin solution instead of 100 ml normal saline， others were the same as PDT treatment group; model group： natural light instead of PDT treatment， others were the same as PDT treatment group. After 1 day of treatment， 6 rats were sacrificed in each group and their tumor tissues were prepared for pathological sections， and the histopathological changes were observed by HE staining; another 6 were sacrificed， and the expression of Bcl-2 and Bax proteins in tumor tissues were detected by Western blot technology; their tumor volume of 6 remaining rats， was measured only on the 1st， 3rd， 7th， and 14th days of treatment， and the tumor volume inhibition rate was also calculated. Results：The tumor volume in the model group continued to increase. Tumor tissue appeared necrosis and tumor growth was inhibited after 1 day of photodynamic therapy. The tumor volume of baicalin-PDT treatment group and curcumin-PDT treatment group did not increase within 3 days， and then gradually increased. The expression of Bcl-2 and Bax proteins in the baicalin-PDT treatment group was significantly different from that in the model group （P<0.01）. Conclusion：Baicalin-mediated PDT can effectively inhibit the growth of cervical cancer xenografts in vitro， and its mechanism may play a role in promoting cancer cell apoptosis.

Keywords Baicalin; Curcumin; Photodynamic therapy; Tumor suppression; Apoptosis mechanism

中圖分類(lèi)號(hào)：R284;R711.74文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.11.013

宮頸癌具有發(fā)病率高、致死率高以及發(fā)病年齡趨于年輕化的特點(diǎn)，目前在危害女性生命健康的惡性腫瘤排名中，位居第2位[1]，給女性的身心健康帶來(lái)嚴(yán)重的威脅。宮頸癌的死亡率位居全球癌癥死亡率的第4位[2]。世界衛(wèi)生組織（WHO）估計(jì)，全球?qū)m頸癌新發(fā)病例數(shù)為52.8萬(wàn)，死亡人數(shù)為26.6萬(wàn)，其中85%的病例發(fā)生在中低收入國(guó)家。我國(guó)近年來(lái)子宮頸癌發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，子宮頸癌的防治作為公共衛(wèi)生問(wèn)題已引起中國(guó)政府的高度重視和關(guān)注[3]。

在諸多治療宮頸癌的療法中，光動(dòng)力療法（Photodynaminc Therapy，PDT）是一種在腫瘤治療方面有著廣闊前景的新型療法，該療法具有對(duì)病變部位造成的創(chuàng)傷小、定位精準(zhǔn)、治療時(shí)間短、操作簡(jiǎn)便、價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn)[4-5]，而宮頸上皮是由宮頸陰道部鱗狀上皮和宮頸管柱狀上皮共同組成，宮頸鱗狀上皮一般厚度為1 mm[6]，當(dāng)其發(fā)生宮頸上皮內(nèi)瘤變（Cervical Intraepithe-lial Neoplasia，CIN）時(shí)，其局限于宮頸上皮基底膜以上的上皮組織內(nèi)，這部分組織厚2～3 mm。當(dāng)CIN發(fā)展至早期宮頸微小浸潤(rùn)癌時(shí)的浸潤(rùn)深度在3～5 mm[7]。對(duì)于大多數(shù)組織而言，PDT作用深度為5～10 mm[8]，因此使得PDT可以治療CIN和宮頸癌;加之宮頸部位特殊，容易暴露，使宮頸病變成為“淺表”病變，局部給藥和光照十分方便，對(duì)局部作用針對(duì)性強(qiáng)，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的不良反應(yīng)較全身用藥后小，不易產(chǎn)生耐藥性[9]，從而使得PDT在治療宮頸病變方面更顯優(yōu)勢(shì)。此外，PDT在保留完整器官的前提下，還可以行多次重復(fù)治療，清除剩余病變組織[10]，這樣對(duì)于病變直徑大于3 cm，累及宮頸腺腔深度超過(guò)2.5 cm的病變，更加突顯優(yōu)勢(shì)。同時(shí)，PDT治療后，女性的生育功能未受到破壞。

目前臨床中使用的光敏劑由于其成分復(fù)雜，易受生物代謝的影響，光敏損傷作用的程度不易控制，且多次使用會(huì)出現(xiàn)不良反應(yīng)和耐受性[5]，因而限制了PDT治療作用的發(fā)揮。而黃芩苷具有感光效應(yīng)，在加入硼砂溶液后，其光敏性明顯增強(qiáng)[11-12]，此外，黃芩苷具有明顯的抗腫瘤、抗炎、防止炎癌轉(zhuǎn)化以及調(diào)經(jīng)等功效[13]，對(duì)比我們前期研究的姜黃素結(jié)合PDT療法[14]，黃芩苷具有治療婦科相關(guān)病癥的藥效，在相關(guān)婦科疾病的對(duì)癥治療上，可能其結(jié)合PDT后會(huì)有優(yōu)于姜黃素的療效;黃芩苷有望成為一種高效、低毒且具有多重抗腫瘤作用的新型光敏劑。因此，本實(shí)驗(yàn)擬采用黃芩苷介導(dǎo)PDT療法治療宮頸癌，觀察該療法對(duì)腫瘤組織的治療作用，并初步探討其可能的抑瘤機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 健康雌性BALB/c裸鼠，4周齡，SPF級(jí)，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006，飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)室IVC動(dòng)物房，自由進(jìn)食和飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)北京中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批號(hào)：BUCM-4-2018122101-4065）。

1.1.2 細(xì)胞 宮頸癌Hela細(xì)胞，由北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院饋贈(zèng)，用含10%的胎牛血清的完全培養(yǎng)基于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.1.3 藥物 黃芩苷（Biorule公司，美國(guó)，貨號(hào)：RB11127），姜黃素（Bioruler公司，美國(guó)，貨號(hào)：RB12712）。

1.1.4 試劑與儀器 硼砂-氫氧化鈉緩沖液0.1 mol/L pH10.1（北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，貨號(hào)：BF-0091）;4%固定液（南京凱基生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：備KGIHC016CS）;Bcl-2一抗（Abcam公司，英國(guó)，批號(hào)：ab692）;Bax一抗（CST公司，美國(guó)，批號(hào)：14796S）;RIPA裂解液（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：R0020）;蛋白磷酸酶抑制劑混合物（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：P1260）;脫脂奶粉（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：D8340）;BSA（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：A8010）;蛋白Marker（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：PR1920）;PVDF膜（0.45 μm）（Millipore公司，美國(guó)，批號(hào)：IPVH00010）;ECL超敏發(fā)光液（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：PE0010A+B）;30%丙烯酰胺（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：0933）;TEMED（Sigma公司，美國(guó)，批號(hào)：T8133）;BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：PC0020）;β-tubulin（中山金橋生物有限公司，批號(hào)：TA-09）;山羊抗鼠-HRP（中山金橋生物技術(shù)有限公司：批號(hào)：134560）;山羊抗兔-HRP（中山金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：ZB-2301）;兔抗山羊-HRP（中山金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：ZB-2306）;光動(dòng)力治療儀（北京鐳志威光技術(shù)有限公司，型號(hào)：BL18111611）;數(shù)顯游標(biāo)卡尺（寧波得力工具有限公司，型號(hào)：DL91150）;電泳儀（北京六一生物科技有限公司，型號(hào)：DYY-7C）;水平搖床（ORBITAL公司，美國(guó)，型號(hào)：TS-1）;pH計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司雷磁儀器廠，型號(hào)：PHS-3C）;電子天平（Precisa公司，瑞士，型號(hào)：321LS）;磁力攪拌器（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司，型號(hào)：CJ-78-1A）;酶標(biāo)儀（BioTek Synergy公司，美國(guó)，型號(hào)：H4）;離心機(jī)（Thermo公司，美國(guó)，型號(hào)：lablerv ls）;化學(xué)發(fā)光成像儀（上海天能科技有限公司，型號(hào)：Tanon-5200）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 將培養(yǎng)好的宮頸癌Hela細(xì)胞調(diào)整計(jì)數(shù)為5×107/mL，在每只裸鼠的背部皮下注入100 μL細(xì)胞懸液，經(jīng)過(guò)一周潛伏期，背部出現(xiàn)近似于米粒大小的腫塊，提示宮頸癌體外移植瘤模型造模成功。待腫塊直徑大于等于0.5 cm時(shí)，將造模成功的模型鼠隨機(jī)分為4組，即：模型組、黃芩苷-PDT觀察組、PDT觀察組、姜黃素-PDT觀察組，18只/組。

1.2.2 干預(yù)方法 PDT觀察組：腫瘤周?chē)⑸?00 μL生理鹽水，6 h后瘤周注射硼砂緩沖液0.01 mol/L 100 μL后行PDT治療，照射劑量80 J/cm2（435 nm波長(zhǎng)，0.60 A，0.54 W，距離腫瘤表面3～5 cm，照射2 min 28 s）;黃芩苷-PDT觀察組：以80 μg/mL的黃芩苷溶液100 μL代替生理鹽水，其他同PDT觀察組;姜黃素-PDT觀察組：以50 μmol/L的姜黃素溶液100 μL代替生理鹽水，其他同PDT觀察組;模型組：以自然光照代替PDT治療，其他同PDT觀察組。治療1 d后，各組處死6只取材腫瘤組織制備成病理切片，HE染色觀察組織病理學(xué)改變，另外處死6只，利用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)腫瘤組織中Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)情況;剩余6只分別于治療第1、3、7、14天測(cè)量腫瘤體積，計(jì)算腫瘤體積抑制率。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法 腫瘤體積及抑瘤率測(cè)算，利用數(shù)顯游標(biāo)卡尺對(duì)腫瘤進(jìn)行測(cè)量。計(jì)算各組裸鼠腫瘤體積均值并制作相關(guān)生長(zhǎng)曲線圖：腫瘤體積V=a×b2/2（a為腫瘤的最大直徑;b為腫瘤的最短直徑）;計(jì)算觀察組抑瘤率：抑瘤率（%）=[（模型組體積-觀察組體積）/模型組體積]×100%。

HE染色進(jìn)行組織病理學(xué)分析，將取材后的瘤體迅速置于4%的多聚甲醛溶液中固定12 h，經(jīng)過(guò)常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片后進(jìn)行HE染色，于光鏡下觀察各組腫瘤組織不同放大倍數(shù)下的病理改變情況。

蛋白質(zhì)印跡法對(duì)凋亡相關(guān)蛋白Bax和Bcl-2進(jìn)行檢測(cè)，從超低溫冰箱取出腫瘤組織放于冰盒上，剪碎組織后用天平稱(chēng)量30 mg左右，加入適量提前配置好的盛有裂解液的離心管中，冰上裂解30 min，于4 ℃下12 000 r/min離心15 min，收集上清液，BCA測(cè)定樣品蛋白濃度，之后根據(jù)濃度測(cè)定結(jié)果加入5×Loading Buffer混合后于100 ℃處理5 min，使蛋白充分變性，分裝備用;進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳;然后用聚偏二氟乙烯膜（PVDF膜）轉(zhuǎn)膜90 min;PBS沖洗后用5%脫脂牛奶封閉2 h;用1%BSA封閉液稀釋相應(yīng)的一抗（Bcl-2 1∶500稀釋;Bax 1∶1 000稀釋?zhuān)筆VDF膜浸泡于一抗孵育液中，4 ℃過(guò)夜;TBST充分洗滌PVDF膜3次，10 min/次;用封閉液稀釋HRP標(biāo)記二抗（1∶5 000稀釋?zhuān)?7 ℃搖床孵育1 h，TBST充分洗滌PVDF膜3次，10 min/次;采用ECL超敏發(fā)光液顯影成像，拍照。用β-tubulin作為內(nèi)參同法檢測(cè)（β-tubulin1∶5 000稀釋?zhuān)?/p>

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，若數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布且方差齊，采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD檢驗(yàn);方差不齊則采用非參數(shù)檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)，各組間差異采用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組宮頸癌體外移植瘤體積變化情況

2.1.1 各組移植瘤體積估算均值比較

PDT治療后，3組觀察組腫瘤體積在治療后1～3 d保持不變或略減小，3 d后體積逐漸增大;模型組腫瘤體積則呈現(xiàn)逐漸增大的趨勢(shì)。各觀察組與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)圖1。

2.1.2 各組抑瘤率比較

治療后1～14 d，PDT觀察組抑瘤率呈下降趨勢(shì)。黃芩苷-PDT組和姜黃素-PDT組在治療1～3 d，抑瘤率呈上升趨勢(shì);3～14 d呈下降趨勢(shì);黃芩苷-PDT組抑瘤率高于其他2個(gè)觀察組。治療1～3 d，黃芩苷-PDT組抑瘤效果明顯，抑瘤率上升幅度大于姜黃素-PDT組;而治療7～14 d，黃芩苷-PDT組抑瘤率雖高于其他2組，但是姜黃素-PDT組抑瘤率下降幅度小于黃芩苷-PDT組。

2.2 腫瘤的組織病理學(xué)變化

鏡下可見(jiàn)：觀察組腫瘤組織均小于模型組腫瘤組織，且觀察組腫瘤組織壞死面積大于模型組腫瘤組織。黃芩苷-PDT觀察組治療區(qū)域腫瘤組織壞死面積大于其余2個(gè)觀察組;且姜黃素-PDT組腫瘤組織內(nèi)有出血現(xiàn)象。鏡下4×可見(jiàn)模型組模型組腫瘤細(xì)胞成分相對(duì)單一，呈團(tuán)巢狀排列，細(xì)胞大小不等，邊界不清，呈圓形或卵圓形，核漿比增大，染色質(zhì)粗糙，核分裂像常見(jiàn)，偶見(jiàn)壞死。與模型組比較，其余各觀察組可見(jiàn)壞死灶，灶內(nèi)細(xì)胞核固縮，胞質(zhì)嗜酸性變，其他腫瘤組織細(xì)胞排列較稀疏，核分裂象較模型組少見(jiàn)，其中以黃芩苷-PDT觀察組最為明顯，姜黃素-PDT觀察組比較明顯。見(jiàn)圖2～4。

2.3 凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)情況變化

2.3.1 Bcl-2的表達(dá)情況

治療1 d后，與模型組比較黃芩苷-PDT觀察組與PDT觀察組表達(dá)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;見(jiàn)圖5，表2。

治療14 d后，與模型組比較，其余3組表達(dá)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與黃芩苷-PDT觀察組比較，其余3組表達(dá)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與PDT觀察組比較，其余3組表達(dá)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;見(jiàn)圖6，表2。

2.3.2 各組Bax的表達(dá)比較

治療1 d后，與模型組比較黃芩苷-PDT觀察組與姜黃素-PDT觀察組表達(dá)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與黃芩苷-PDT觀察組比較模型組與PDT觀察組表達(dá)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與PDT觀察組比較黃芩苷-PDT觀察組與姜黃素-PDT觀察組表達(dá)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;結(jié)果見(jiàn)圖7，表3。

治療14 d后，與模型組比較黃芩苷-PDT觀察組與姜黃素-PDT觀察組表達(dá)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與黃芩苷-PDT觀察組比較其余3組表達(dá)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與PDT觀察組比較黃芩苷-PDT觀察組與姜黃素-PDT觀察組表達(dá)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;結(jié)果見(jiàn)圖8，表3。

3 討論

近年來(lái)研究表明，目前臨床對(duì)于宮頸癌的主要治療手段包括手術(shù)治療、放療和化療，這些傳統(tǒng)的治療方法，給患者帶來(lái)了嚴(yán)重的身體及心理負(fù)擔(dān)，尤其對(duì)于年輕女性而言，甚至?xí)绊懫渖芰Γ档突颊吆笃谏|(zhì)量[4]。所以尋找創(chuàng)傷性小、不良反應(yīng)小并且治療效果好的方法對(duì)于提高宮頸癌患者生存率和后期生命質(zhì)量至關(guān)重要，這也是臨床研究的熱點(diǎn)方向。

光動(dòng)力療法是一種無(wú)創(chuàng)或微創(chuàng)的新型治療技術(shù)，通過(guò)在病患部位局部注射光敏劑，光敏劑經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后特異性富集在病變組織，之后利用選定的特定波長(zhǎng)的光源照射并激發(fā)光敏劑產(chǎn)生活性氧，從而導(dǎo)致病變組織細(xì)胞發(fā)生一系列凋亡、壞死以及過(guò)度自噬等過(guò)程，最終達(dá)到治療目的[15]。因該療法具有操作簡(jiǎn)單，對(duì)患者傷害小，治療后可保護(hù)器官結(jié)構(gòu)的完整性以及可重復(fù)治療等優(yōu)勢(shì)[10]，結(jié)合宮頸本身結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，該療法適用于治療宮頸癌。

黃芩苷是一種從中藥黃芩中提取出的黃酮類(lèi)化合物，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于黃芩苷抗腫瘤作用的研究日漸深入，現(xiàn)已被證實(shí)在乳腺癌[16]、卵巢癌[17]、宮頸癌[18-19]等婦科疾病中均有療效。但關(guān)于黃芩苷聯(lián)合光動(dòng)力療法的研究，國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道。黃芩苷可通過(guò)促凋亡作用、抑制腫瘤血管新生、逆轉(zhuǎn)抗藥性及誘導(dǎo)分化等方面抑制腫瘤的生長(zhǎng)[13]。Liang等[20]研究證實(shí)黃芩苷有廣泛的抗腫瘤作用，并且對(duì)于正常的細(xì)胞沒(méi)有明顯的不良反應(yīng)。此外，在杜永峰等[11]和孟曉彩等[12]的研究中發(fā)現(xiàn)，黃芩苷有弱感光性但在加入硼砂溶液后，其感光性有所加強(qiáng)。據(jù)此，黃芩苷可作為一種新型的高效低毒且符合治療宮頸癌的優(yōu)質(zhì)光敏劑，將其聯(lián)合PDT來(lái)對(duì)癥治療宮頸癌具有一定的可行性。本研究發(fā)現(xiàn)，黃芩苷聯(lián)合PDT療法在治療前期能夠有效抑制腫瘤生長(zhǎng)，其效果優(yōu)于單純PDT和姜黃素聯(lián)合PDT療法。

腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程較為復(fù)雜，相關(guān)研究表明，Bcl-2突變?cè)趯m頸組織發(fā)生癌變的過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用[21]。而促/抑凋亡基因Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。Bcl-2是一種抑制凋亡相關(guān)的蛋白，它主要通過(guò)影響線粒體凋亡途徑引發(fā)細(xì)胞凋亡，而B(niǎo)ax主要通過(guò)抑制Bcl-2的生物學(xué)活性從而促進(jìn)凋亡[22]。

本實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，治療1 d后，各觀察組與模型組比較，Bcl-2表達(dá)均降低;Bax表達(dá)均升高。治療14 d后，PDT觀察組與姜黃素-PDT觀察組與模型組比較，Bcl-2表達(dá)降低;黃芩苷-PDT觀察組與姜黃素-PDT觀察組與模型組比較，Bax表達(dá)升高。這些結(jié)果表明黃芩苷介導(dǎo)的PDT療法對(duì)腫瘤可有抑制作用，且作用效果呈時(shí)間性，在治療前期黃芩苷-PDT療法治療效果優(yōu)于其余2個(gè)觀察組，但是后期效果不佳，且這種抑制作用可能是通過(guò)抑制Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)Bax的表達(dá)，從而誘發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述，黃芩苷介導(dǎo)的PDT療法可以抑制宮頸癌腫瘤組織的生長(zhǎng)，其機(jī)制可能與下調(diào)腫瘤組織Bcl-2的表達(dá)，增加Bax的表達(dá)從而發(fā)揮其抑瘤的作用相關(guān)，提示Bcl-2和Bax在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起到重要的作用，黃芩苷-PDT治療可以在前期通過(guò)有效抑制Bcl-2表達(dá)和促進(jìn)Bax表達(dá)從而發(fā)揮抑瘤效果，但是其作用隨著時(shí)間延長(zhǎng)而減弱，可能需要進(jìn)行多次重復(fù)治療，其過(guò)程及最佳作用時(shí)效，有待后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步深入探討、分析。

參考文獻(xiàn)

[1]Zaman MS，Chauhan N，Yallapu MM，et al.Curcumin Nanoformulation for Cervical Cancer Treatment[J].Sci Rep，2016，6：20051.

[2]Koh WJ，Abu-Rustum NR，Bean S，et al.Cervical Cancer，Version 3.2019，NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology[J].J Natl Compr Canc Netw，2019，17（1）：64-84.

[3]王臨虹，趙更力.中國(guó)子宮頸癌綜合防控指南[J].中國(guó)婦幼健康研究，2018，29（1）：1-3.

[4]趙藝，郝淑維，崔澂.宮頸癌的個(gè)體化綜合化治療進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2017，23（1）：76-81.

[5]陳文暉，浦宇.光動(dòng)力療法的起源和發(fā)展史[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)文摘：皮膚科學(xué)，2015，32（2）：109-118，101.

[6]成令忠.現(xiàn)代組織學(xué)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2003：10.

[7]Pecorelli S，Zigliani L，Odicino F.Revised FIGO staging for carcinoma of the cervix[J].Int J Gynaecol Obstet，2009，105（2）：107-108.

[8]卞美璐，劉樹(shù)范.子宮頸疾病的診治[M].北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2001：271.

[9]Wan MT，Lin JY.Current evidence and applications of photodynamic therapy in dermatology[J].Clin Cosmet Investig Dermatol，2014，7（9）：145-163.

[10]Muroya T，Suehiro Y，Umayahara K，et al.Photodynamic therapy（PDT）for early cervical cancer[J].Gan To Kagaku Ryoho，1996，23（1）：47-56.

[11]杜永峰，周健，姚秉華.紫外分光光度法測(cè)定黃芩中黃芩苷的含量[J].化學(xué)分析計(jì)量，2008，17（5）：43-45.

[12]孟曉彩，秦身鈞，魏永巨.黃芩苷-硼砂體系的熒光光譜研究[J].分析化學(xué)，2009，37（z1）：206.

[13]王婷婷，趙鵬翔，謝飛.黃芩苷的抗腫瘤作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J].生物技術(shù)進(jìn)展，2019，9（1）：13-20.

[14]牟天龍，潘彥舒，賀桂芳，等.姜黃素介導(dǎo)PDT治療宮頸癌的療效及其機(jī)制研究[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，10（6）：764-766.

[15]Shi X，Zhang CY，Gao J，et al.Recent advances in photodynamic therapy for cancer and infectious diseases[J].Wiley Interdiscip Rev Nanomed Nanobiotechnol，2019，11（5）：e1560.

[16]戴新軍.黃芩苷抗乳腺癌的作用及對(duì)腫瘤缺氧微環(huán)境影響的實(shí)驗(yàn)研究[D].長(zhǎng)沙：湖南中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

[17]閻皓，張恒，劉金東，等.黃芩苷對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3、CAOV3增殖侵襲的作用機(jī)制研究[J].河北中醫(yī)，2018，40（2）：260-264.

[18]蘇佩華.黃芩素—黃芩苷復(fù)合物對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡作用的研究[D].秦皇島：燕山大學(xué)，2018.

[19]陳璐，張娟，欒麗平.黃芩苷通過(guò)增強(qiáng)自噬介導(dǎo)順鉑對(duì)宮頸癌C-33A/cis細(xì)胞敏感性的影響[J].中藥藥理與臨床，2018，34（5）：44-47.

[20]Liang RR，Zhang S，Qi JA，et al.Preferential inhibition of hepatocellular carcinoma by the flavonoid Baicalein through blocking MEK-ERK signaling[J].Int J Oncol，2012，41（3）：969-978.

[21]林韻，陳建國(guó).新輔助化療對(duì)宮頸癌組織CD34和Bcl-2表達(dá)影響的研究進(jìn)展[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志，2018，32（12）：1240-1242.

[22]Riedl SJ，Salvesen GS.The apoptosome：signalling platform of cell death[J].Nat Rev Mol Cell Biol，2007，8（5）：405-413.

（2020-02-01收稿 責(zé)任編輯：楊覺(jué)雄）