伊紅染液在小組織標(biāo)本組織處理預(yù)染色中的改良應(yīng)用

楊 屹，周林艷

隨著人們健康意識不斷增強(qiáng)和醫(yī)療需求的不斷增長，尤其是不宜手術(shù)的腫瘤晚期患者明確診斷與靶向治療的需求，內(nèi)窺鏡和穿刺等微創(chuàng)技術(shù)得到廣泛應(yīng)用，使得小標(biāo)本如胃腸鏡、鼻咽鏡、細(xì)針穿刺活檢標(biāo)本不斷增多。因此小標(biāo)本的收集、取材、包埋、切片等制片環(huán)節(jié)對診斷與進(jìn)一步基因檢測至關(guān)重要。未經(jīng)預(yù)染色的小組織標(biāo)本，由于在制片過程中未經(jīng)染色預(yù)處理，色彩不明顯，與包埋的石蠟難以區(qū)分，給病理技術(shù)員的工作帶來不便，影響了工作效率的提高，甚至因為組織塊太多太小而導(dǎo)致遺漏的可能。因此良好的預(yù)染色可以提高技術(shù)員的工作效率和制片質(zhì)量。作者在日常工作中不斷實踐摸索，在原預(yù)染方法上進(jìn)行改良，發(fā)現(xiàn)在脫水最后一缸95%乙醇中添加伊紅的方法對比其他預(yù)染色方法有更好的效果，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料收集常州市金壇區(qū)病理中心活檢小標(biāo)本：穿刺活檢等小標(biāo)本共160例。全自動組織脫水機(jī)徠卡Asp300s；組織包埋儀：派斯杰BM450A型；10%中性福爾馬林；二甲苯；75%乙醇；95%乙醇；無水乙醇；醇溶性伊紅。

1.2 方法收集的穿刺標(biāo)本均固定5 h以上。160例標(biāo)本隨機(jī)分成4組，每組40例。實驗組：在最后一缸95%乙醇中添加4%伊紅，三組對照組：(1)對照組1在脫水機(jī)第1缸10%中性福爾馬林中添加4%伊紅；(2)對照組2取材時滴染(時間1 min)；(3)空白對照組未采取任何預(yù)染手段(表1)。脫水程序均按常規(guī)標(biāo)本脫水、透明、浸蠟程序相同處理。制片包括包埋、切片均按技術(shù)操作規(guī)范完成[1]。并由同一名經(jīng)驗豐富的技術(shù)員完成四組標(biāo)本的所有制片過程。

表1 四組組織處理方式

1.3 結(jié)果判定經(jīng)過脫水、透明、浸蠟處理后，組織呈現(xiàn)深紅色判定為()，組織呈現(xiàn)淡粉紅色判定為(+)，組織無著色判定為(-)(圖1)。

圖1 預(yù)染色結(jié)果：A.組織呈深紅色()；B.組織呈淡粉紅色(+)；C.組織無著色(-)

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，四種方法的各項指標(biāo)是否具有統(tǒng)計學(xué)差異采用多個樣本比較的秩和檢驗、χ2檢驗及單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 組織眼觀效果差異通過脫水、透明、浸蠟處理后的小標(biāo)本，結(jié)果顯示使用三種不同預(yù)染方法的標(biāo)本均不同程度著色，且實驗組的染色效果明顯好于其他兩種預(yù)染方法(P<0.01，表2)。

表2 四種方法的效果肉眼觀對比

2.2 鏡下染色效果4組標(biāo)本在同一位技術(shù)員、同批次制片并HE染色后在鏡下觀察，結(jié)果顯示4種方法的染色效果差異均無顯著性(圖2)。

ABCD

2.3 甲級片比例的差異實驗組、對照組1、對照組2、空白對照組的甲級片比例分別為97.5%、97.5%、92.5%、92.5%，結(jié)果顯示四組差異無顯著性(P=0.434)。

2.4 工作效率的比較分析四組實驗在工作效率中的差異，結(jié)果顯示四者包埋、切片所用時間差異具有顯著性(表3)。經(jīng)過預(yù)染色處理的三組標(biāo)本在制片效率上明顯高于空白對照組標(biāo)本(P<0.01)；且在最后一缸95%乙醇中添加伊紅的標(biāo)本(實驗組)在制片中工作效率高于使用其他兩種預(yù)染方法的標(biāo)本(P<0.01)。

表3 4種方法工作效率的比較

3 討論

內(nèi)窺鏡及穿刺小組織標(biāo)本體積小，標(biāo)本來源珍貴，且在制片過程如包埋、切片中不明顯，難以辨認(rèn)。技術(shù)員稍有不慎就可能將組織包埋在不同的平面，甚至?xí)G失組織，并且在切片過程中增加了技術(shù)員操作上的難度，也增大了診斷醫(yī)師漏診的幾率。

目前國內(nèi)病理科常采用的小標(biāo)本預(yù)染色方法有：(1)取材時使用伊紅滴染組織[2-5]；(2)在脫水機(jī)中使用伊紅-福爾馬林固定液預(yù)染小標(biāo)本[6]。作者經(jīng)過多次實踐摸索，采用在脫水機(jī)中的最后一缸95%乙醇中添加伊紅的方式對小標(biāo)本進(jìn)行預(yù)染色，與上述兩種方法在預(yù)染色效果、工作效率與最終制片質(zhì)量方面進(jìn)行了對比，結(jié)果顯示在最后一缸95%乙醇中添加伊紅的預(yù)染效果好于其他兩種預(yù)染方法，且明顯提高了制片工作的效率。四組標(biāo)本制成的HE切片鏡下觀察均顯示結(jié)構(gòu)清晰，層次分明，甲級片比例差異無顯著性。因此作者認(rèn)為在最后一缸95%乙醇中添加伊紅的方法可行且能顯著提高工作效率。

關(guān)于在最后一缸脫水95%乙醇中添加伊紅較其他兩種預(yù)染色方法效果更好的原因，可能是組織在經(jīng)乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟浸蠟后，伊紅被洗脫，造成預(yù)染色效果不佳。此外，作者沒有在脫水程序中最后兩缸無水乙醇里添加伊紅，而選擇在它們前一缸的95%乙醇中添加伊紅，是考慮到伊紅溶液中含有部分的水會影響組織的脫水效果，且經(jīng)過多次實驗，發(fā)現(xiàn)在95%乙醇中添加200 mL伊紅使?jié)舛冗_(dá)到4%即可獲得良好的預(yù)染色效果，伊紅濃度過低其預(yù)染色效果不佳，濃度過高預(yù)染色效果提升不明顯且浪費試劑。

綜上所述，小標(biāo)本的預(yù)染色是十分必要的，且在95%乙醇中添加適量伊紅可以使小標(biāo)本在制片過程中顯示鮮艷的顏色，有利于技術(shù)員進(jìn)行包埋與切片，提高了制片效率，減少不必要的差錯。該方法簡便快捷，節(jié)約試劑，效果穩(wěn)定且良好，值得推廣應(yīng)用。