基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討葶藶大棗瀉肺湯治療新冠肺炎的作用機制

劉京華，譚旺曉，王斯維，王雨，王小瑩

(天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617)

2019年暴發(fā)的新冠肺炎(COVID-19)，具有顯著的傳染性，目前已成為全球性問題[1-2]。在COVID-19治療早期以中醫(yī)藥干預(yù)為主，通過中西醫(yī)結(jié)合的治療方針，能夠充分發(fā)揮中醫(yī)藥在疫情防治中的作用[3]。

中醫(yī)理論辯證COVID-19的發(fā)病機制為濕邪致病，初期表型為寒濕，中期以濕阻肺脾證和濕熱蘊肺證最為常見，后期多表現(xiàn)為氣陰兩虛證和肺脾氣虛證[4]。由COVID-19診療方案的中醫(yī)分期病機特點可知，在使用頻次超過兩次的17味中藥中，葶藶子居于止咳平喘藥的首位[5]，發(fā)揮藥效的主要成分為葶藶子中的芥子苷與β-谷甾醇。研究報道，β-谷甾醇具有舒張支氣管平滑肌及祛痰作用[6]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，葶藶子具有較強的利尿作用，與杏仁、大黃配伍可用于治療胸脅積水[7]；還具有廣譜抗菌作用[8]，可通過抗炎與抗氧化作用來保護心肌細胞免受損傷，從而起到保護心臟作用[9]。COVID-19疫情發(fā)生以來，復(fù)方藥在抗疫方面起到重要的作用，曹新福等[10]報道葶藶子與石膏配伍在防治COVID-19用藥中的置信度最高，而葶藶大棗瀉肺湯是由葶藶子和大棗組成的中藥復(fù)方。北宋《開寶本草》述該藥“療肺壅上氣咳嗽，止喘促，除胸中痰飲”[8]。清代名醫(yī)張璐在《千金方衍義》中指出“葶藶破水瀉肺，大棗護脾通津，乃瀉肺而不傷脾之法，保全母氣以為向后復(fù)長肺葉之根本”[11]。葶藶子具有入肺瀉氣和開結(jié)利水之功效，可使肺氣通利，痰水下引，進而喘可平，腫可退[12]。大棗的作用主要是保護肺氣，防止藥物對患者肺氣有損傷，提高治療的安全性[13]。葶藶大棗瀉肺湯臨床上主要用于病毒性肺炎、肺心病、結(jié)核性胸腔積液的治療，且應(yīng)用效果已經(jīng)得到了多方認證[14-15]。

中藥具有多成分、多靶點、系統(tǒng)調(diào)節(jié)的作用特點，但由于其成分復(fù)雜，作用靶點眾多，很難完全闡明其作用機制。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的整體性、系統(tǒng)性與中醫(yī)藥的整體觀、辨證論等基本理論趨于一致[16]，在藥物靶點鑒定、有效成分發(fā)現(xiàn)、作用機理研究、臨床前研究等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價值[17]，其主要通過對復(fù)雜的疾病網(wǎng)絡(luò)進行協(xié)同調(diào)節(jié)，以交互式的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控方式來研究整體的病理進展?；谥兴幊煞謹?shù)據(jù)庫及其與靶點、疾病之間的相關(guān)信息構(gòu)建藥材-成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)模型[18]，能夠揭示其內(nèi)在聯(lián)系，對中藥提高靶標(biāo)療效具有指導(dǎo)意義。

本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討葶藶大棗瀉肺湯治療COVID-19的潛在作用靶點與信號通路，主要運用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(TCMSP)、The Human Gene Database(GeneCards)等數(shù)據(jù)庫收集葶藶大棗瀉肺湯治療 COVID-19 的相關(guān)靶點，并運用相關(guān)數(shù)據(jù)庫進行靶點功能、通路的預(yù)測，為進一步研究葶藶大棗瀉肺湯潛在治療 COVID-19 的藥理作用機制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 葶藶大棗瀉肺湯主要活性化合物的篩選

口服生物利用度(OB)表示有效成分或活性基被吸收到達體循環(huán)并被吸收的速度與程度，OB 值越高通常表示藥物的生物活性分子的類藥性(DL)越好。本研究以葶藶子、大棗兩味中藥為關(guān)鍵詞，以O(shè)B≥30%、DL≥0.18 為篩選參數(shù)，利用TCMSP(http://tcmspw.com/tcmsp.php)檢索中藥的主要活性化合物。

1.2 葶藶大棗瀉肺湯主要作用靶點和相關(guān)疾病靶點的收集

通過TCMSP搜索方中主要活性化合物的相關(guān)靶點，運用GeneCards(https://www.genecards.org/)數(shù)據(jù)庫檢索與COVID-19相關(guān)的基因。通過分析，得到葶藶大棗瀉肺湯與COVID-19的共同靶點蛋白。

1.3 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)、化合物-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將葶藶大棗瀉肺湯的主要活性化合物、靶點通過STRING數(shù)據(jù)庫(Search Tool for the Retrieval of Interacting Genes/Proteins，https://string-db.org/)和 Cytoscape3.6.1 軟件(http://www.cytoscape.org/)構(gòu)建靶標(biāo)PPI網(wǎng)絡(luò)、藥物-化合物-靶點網(wǎng)絡(luò)。

1.4 靶點通路分析

將上述篩選得到的藥物與疾病相關(guān)的靶點輸入Metascape數(shù)據(jù)庫(http://metascape.org/gp/index.html/main/step1)，通過輸入靶基因名稱列表并選定物種為“homo sapiens”，進一步點擊Custom analysis設(shè)置參數(shù)分析，選擇GO與KEGG富集分析。

1.5 分子對接

為進一步分析葶藶大棗瀉肺湯對于COVID-19 的干預(yù)作用，我們將藥物靶點中化合物度值較高的前十種與ACE2進行分子對接。對接方法如下：

(1)小分子和蛋白的處理：使用Sybyl 2.0軟件構(gòu)建中藥單體小分子化合物，并對化合物的結(jié)構(gòu)進行能量優(yōu)化，存為mol2文件。從PDB(protein data bank)數(shù)據(jù)庫中下載ACE2的蛋白晶體結(jié)構(gòu)，蛋白ID為1R4L，利用Sybyl 2.0軟件提取出蛋白中的配體，將無配體蛋白和配體分別保存為PDB文件。

(2)分子對接：通過混合Lamarckian遺傳算法(LGA)進行對接。在Autodock 4.2軟件中打開無配體蛋白文件，并為其加入電荷。通過配體文件的位置確定蛋白晶體的結(jié)合域，在結(jié)合域處設(shè)定結(jié)合晶格，晶格的xyz軸均為40格點。將小分子mol2文件加入電荷成為pdbqt文件，使用該文件在結(jié)合晶格處與蛋白進行虛擬對接。算法設(shè)定為遺傳算法(genetic algorithm，GA)，四元數(shù)(quaternion)與小分子旋轉(zhuǎn)鍵扭轉(zhuǎn)次數(shù)(torsion)都為30次，運行次數(shù)為30輪次，其他設(shè)定均為默認值。

(3)對接結(jié)果分析：將對接結(jié)果按照結(jié)合能絕對值進行排序，選取結(jié)合能絕對值最高的構(gòu)象，使用Pymol軟件對結(jié)合位點進行可視化分析。

2 結(jié)果

2.1 葶藶大棗瀉肺湯主要活性化合物

通過TCMSP檢索，設(shè)置參數(shù)OB≥30%、DL≥0.18共篩選出主要活性化合物27個，其中大棗15個，葶藶子12個。按照OB值大小排列，表1為葶藶大棗瀉肺湯的活性成分。

表1 葶藶大棗瀉肺湯活性化合物基本信息Table 1 Basic information on active compounds of Tingli Dazao Xiefei decoction

續(xù)表1

2.2 藥物-化合物-靶點網(wǎng)絡(luò)

將表1中27個主要活性化合物通過TCMSP數(shù)據(jù)庫預(yù)測主要活性成分調(diào)控靶點，去除重復(fù)值，共得到224個靶點。運用Cytoscape軟件構(gòu)建藥物-化合物-靶點網(wǎng)絡(luò)(圖1)，該網(wǎng)絡(luò)總共有19個節(jié)點和452條邊。其中葶藶子所調(diào)控的相關(guān)靶點主要與細胞凋亡、炎癥與氧化應(yīng)激相關(guān)，而大棗所調(diào)控的靶點主要參與炎癥反應(yīng)，二者聯(lián)用在突出調(diào)控炎癥反應(yīng)的同時，也具有調(diào)控氧化應(yīng)激及細胞凋亡等方面的作用。分析結(jié)果表明，葶藶子與大棗共同調(diào)控的靶點有45個(圖2)，其中排名靠前的靶點主要有：前列腺素G/H合酶2(PTGS2)、前列腺素G/H合酶1(PTGS1)、鈉通道蛋白5亞單位α(SCN5A)、cAMP依賴性蛋白激酶催化亞單位α(PRKACA)、γ-氨基丁酸受體亞單位α-1(GABRA1)，主要參與調(diào)控機體的炎癥反應(yīng)。因此兩藥共同作用時，能夠在抗炎方面發(fā)揮協(xié)同增效的作用。

圖1 藥物-化合物-靶點網(wǎng)絡(luò)調(diào)控圖Fig.1 The regulation diagram of compound-target-pathway network

圖2 葶藶-大棗共同調(diào)控靶點網(wǎng)絡(luò)圖Fig.2 The targets′ network diagram coregulated by Tingli and Dazao

通過拓撲分析參數(shù)表(表2)來觀察藥物的主要活性成分調(diào)控的作用程度。由化合物所對應(yīng)靶點的邊數(shù)得知，排名前十的藥物成分主要有槲皮素、山奈酚、小檗堿、異鼠李素、β-谷甾醇等，這些成分可能是葶藶大棗瀉肺湯的主要活性成分。

表2 藥物-化合物-靶點網(wǎng)絡(luò)拓撲分析參數(shù)表Table 2 Compound-target-pathway network topology analysis parameters

2.3 預(yù)測葶藶大棗瀉肺湯治療COVID-19的靶點

根據(jù)GeneCards數(shù)據(jù)庫檢索COVID-19的靶點，得到251個相關(guān)靶點。運用Venn平臺將葶藶大棗瀉肺湯的靶點與 COVID-19 的治療靶點取交集，得到39個共同靶點，見圖3。

圖3 葶藶大棗瀉肺湯治療新型冠狀病毒肺炎靶點Venn圖Fig.3 Venn diagram of the targets of COVID-19 treated with Tingli Dazao Xiefei decoction

2.4 葶藶大棗瀉肺湯與COVID-19 PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

圖3得到的39個靶點在STRING平臺進行PPI網(wǎng)絡(luò)分析，核心網(wǎng)絡(luò)圖(圖 4)包含39個節(jié)點，394條邊，其中節(jié)點表示蛋白，每條邊則表示蛋白與蛋白之間的相互作用關(guān)系，線條越多表示關(guān)聯(lián)度越大。靶蛋白平均節(jié)點度值為20.2，超過平均度值的靶蛋白有20個，說明這20個靶蛋白是PPI網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵靶點，提示葶藶大棗瀉肺湯可能通過調(diào)節(jié)這些靶點發(fā)揮治療COVID-19的作用。20個關(guān)鍵靶點依據(jù)度值由高到低排序，其與炎癥疾病相關(guān)的主要靶點有:腫瘤壞死因子(TNF)、絲裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、絲裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、C-C基序趨化因子2(CCL2)等。結(jié)果見表 3。

圖4 葶藶大棗瀉肺湯與COVID-19 PPI網(wǎng)絡(luò)圖Fig.4 Protein-protein interaction network diagram of Tingli Dazao decoction and COVID-19

表3 葶藶大棗瀉肺湯 PPI 網(wǎng)絡(luò)中大于平均度值的靶標(biāo)蛋白Table 3 Target proteins with above-average values in PPI network of Tingli Dazao Xiefei decoction

2.5 葶藶大棗瀉肺湯靶點通路分析

將39個靶點上傳到Metascape數(shù)據(jù)庫中，進行GO富集分析和KEGG通路注釋，共得到分子功能、生物過程和細胞成分GO條目232個，KEGG富集通路146條。根據(jù)P值分別得到排名前20富集柱狀圖(如圖5(a)、6(a)所示)。同時，根據(jù)相關(guān)度進行群集ID著色，如圖5(b)和6(b)，顏色區(qū)分不同類別，且節(jié)點面積與聚集程度成正相關(guān)。將所有靶點進行全連接網(wǎng)絡(luò)交互，得到圖5(c)、6(c)，不同顏色表示互作網(wǎng)絡(luò)中可識別到的子模塊，且節(jié)點面積與富集分析的頻次成正比。

通過分析發(fā)現(xiàn)，GO功能富集主要涉及凋亡信號途徑、外部刺激反應(yīng)的正向調(diào)節(jié)、對脂多糖的反應(yīng)、對細菌來源分子的反應(yīng)、細胞因子介導(dǎo)等。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)交互顯著性分析，得到子模塊如圖5(d)所示，細胞腫瘤抗原p53(TP53)、絲裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、MAPK8等為關(guān)鍵作用靶點，在GO富集中起到重要作用。

圖5 葶藶大棗瀉肺湯靶點的 GO 富集分析及相關(guān)網(wǎng)絡(luò)圖 Fig.5 GO enrichment analysis and network diagram of targets regulated by Tingli Dazao Xiefei decoction

KEGG通路注釋主要參與調(diào)控IL-17、NF-κB、甲型流感、肺結(jié)核等信號通路，其中在 AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications，Chagas disease (American trypanosomiasis)，Leishmaniasis，Hepatitis B，Toxoplasmosis五條通路上靶點富集較多。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)交互顯著性分析，得到子模塊如圖6(d)所示，TP53，MAPK1，MAPK14等為關(guān)鍵作用靶點，在治療新型冠狀病毒肺炎中起到藥效作用。

圖6 葶藶大棗瀉肺湯治療 COVID-19 的 KEGG 富集分析及相關(guān)網(wǎng)絡(luò)圖Fig.6 KEGG pathway analysis and network diagram of Tingli Dazao Xiefei decoction for the treatment of COVID-19

2.6 葶藶大棗瀉肺湯活性成分以及臨床用藥與ACE2對接結(jié)果分析

Lopes等[19]報道血管緊張素轉(zhuǎn)換酶-2(ACE2)是一種促進冠狀病毒進入細胞的蛋白質(zhì)。Willcox等[20]報道 COVID-19與ACE2結(jié)合，促進人體感染。張勇剛等[21]對結(jié)腸上皮細胞單細胞進行測序分析，結(jié)果表明共有5556個基因能夠被ACE2表達。本研究對ACE2的表達基因進行分析，發(fā)現(xiàn)其中有60個基因能夠受到葶藶大棗瀉肺湯的調(diào)控，提示葶藶大棗瀉肺湯可能通過作用于ACE2，進而對相關(guān)基因進行調(diào)控。因此在本研究中，對葶藶大棗瀉肺湯中藥主要有效成分進行分析，并按照拓撲分析將度值排名前十的成分采用分子對接的方法與ACE2受體的結(jié)合能進行預(yù)測，發(fā)現(xiàn)其均與ACE2具有較好的結(jié)合效果。我們對靶點度值前4的成分進行Pymol可視化分析，其中槲皮素、山奈酚、異鼠李素與ACE2具有共同的結(jié)合位點GLU-406；β-谷甾醇的結(jié)合位點為ARG-514；槲皮素的結(jié)合位點GLU-375也已被證明為ACE2的活性位點。因此推測葶藶大棗瀉肺湯可通過以上位點與ACE2進行結(jié)合，從而抑制病毒與ACE2間的相互作用，為葶藶大棗瀉肺湯的后續(xù)研究提供理論基礎(chǔ)。主要藥物成分與ACE2受體的結(jié)合能見表4，用PyMOL軟件顯示的藥物主要活性成分與ACE2(PDB為1R4L)的分子對接3D圖譜見圖7。

表4 主要藥物成分與ACE2受體的結(jié)合能表Table 4 Binding energy analysis of main components with ACE2 receptor

圖7 藥物主要活性成分與ACE2的分子對接3D圖譜Fig.7 3D image of main active components binded with ACE2 receptor

3 討論

COVID-19屬于中醫(yī)理論的“溫病”范疇，其表現(xiàn)為外感溫邪，以發(fā)熱為主癥，易化燥傷陰，易內(nèi)陷生變，具備溫邪致病的特性[22]。病機表現(xiàn)為“濕、熱、毒、瘀、虛”[23]，由瘟疫論解析可知，其發(fā)病突然，具有一定的傳染性及特異性[24]。在防疫期間COVID-19診療方案里含有葶藶子的處方藥所對應(yīng)的癥狀分別有：寒濕郁肺癥、濕毒郁肺癥、疫毒閉肺癥、氣營兩燔癥。而葶藶大棗瀉肺湯中君藥為葶藶子，因此探究其對于COVID-19的潛在防疫作用，可以為當(dāng)前的抗疫工作提供一定的基礎(chǔ)支持。

葶藶大棗瀉肺湯組方由葶藶子和大棗組成，葶藶子味苦、辛，具有破堅逐邪、通利水道的作用，治療咳嗽氣喘。為防葶藶子性猛峻瀉而傷正氣，故佐以大棗，安中以緩和藥性[25]?，F(xiàn)階段藥理研究中，葶藶子具有止咳平喘、抗菌、抗炎、調(diào)血脂等藥理作用[7]，大棗具有抗氧化、提高免疫、保護肝臟等作用[26]，葶藶大棗瀉肺湯治療肺炎的主要療效成分與靶點尚不明確。本文利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，以中藥有效成分和藥物靶標(biāo)為研究對象，預(yù)測藥物所對應(yīng)的靶點與通路，探討葶藶大棗瀉肺湯對于COVID-19的潛在靶標(biāo)療效意義。

本研究篩選得到葶藶大棗瀉肺湯的主要活性成分 27 個，通過藥物靶點分析得到，槲皮素、山奈酚、小檗堿、異鼠李素等化合物對應(yīng)靶點的關(guān)聯(lián)度較高。槲皮素具有抗病毒、減輕肺臟炎癥、抗氧化等作用，可通過抑制JAK2/STAT3信號通路激活而改善氣體交換功能，抑制炎性介質(zhì)的釋放，從而減輕LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷[27]。山奈酚具有抗炎、抗菌、免疫調(diào)節(jié)、疾病預(yù)防等作用[28]，可明顯改善小鼠肺組織X線照射后的炎性滲出，對放射性肺損傷具有一定的防治作用，并可降低炎性因子TNF-α，IL-6的釋放，抑制NF-κB和MAPK通路的激活，進一步阻止炎性因子的生成，最終通過抗炎、抗氧化作用減少組織損傷[29]。大棗中的成分小檗堿可抑制細胞 TLR4/MyD88 依賴型信號通路，進一步抑制 NF-κB 激活，顯著減少 NLRP3 炎癥小體的表達，從而達到一定的抑制炎癥反應(yīng)作用[30]。綜上所述，預(yù)測葶藶大棗瀉肺湯可由其主要活性成分調(diào)節(jié)肺部疾病，并進一步調(diào)控炎癥反應(yīng)，達到協(xié)同增效的作用，預(yù)測其可通過抑制炎癥反應(yīng)對COVID-19達到一定的輔助治療效果。

通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，有45個靶點受到葶藶子與大棗的共同調(diào)控，主要涉及對NF-κB，p38/MAPK及JAK2/STAT3等信號通路的抑制，提示葶藶子與大棗配伍使用能夠通過以上靶點發(fā)揮對炎癥反應(yīng)的抑制作用。大棗中的主要成分小檗堿還能夠抑制炎癥小體NLRP3的表達，與葶藶子配伍后，能夠從不同角度發(fā)揮抗炎作用，增強藥物的抗炎效果，發(fā)揮協(xié)同增效的作用。盡管已有研究證實葶藶子具有一定的抗炎作用，但其主要通過利水功效減輕肺部損傷[31]。由于葶藶子的藥效過猛，對機體的正氣具有一定的損傷，大棗藥性溫和，可緩和葶藶子的藥性，保護心脾[32-33]，二者配伍使用，在改善機體功能的同時[34]，還能增強抗炎的效果，從而對炎癥風(fēng)暴的產(chǎn)生具有一定的抑制作用，對COVID-19發(fā)揮防治功效。

同時對得到的活性成分進行靶點預(yù)測，發(fā)現(xiàn)葶藶大棗瀉肺湯中發(fā)揮主要作用的靶點有39個，經(jīng)PPI網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)葶藶大棗瀉肺湯干預(yù)COVID-19發(fā)揮主要作用的靶點為TNF，CASP3，MAPK8，MAPK1，CCL2等。TNF可通過提高白細胞的吞噬能力、氧化爆發(fā)和釋放蛋白酶來加強其對入侵微生物的殺傷作用，在SARS-CoV感染者急性期血清中 TNF水平與對照組比較顯著增高，感染控制后TNF有所下降，說明TNF與肺部感染的發(fā)病有關(guān)[35]。MAPK1和MAPK8是絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)家族成員，MAPK通路在控制炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)中具有重要作用[36]，據(jù)報道MAPK信號通路是病毒RNA合成中高效輸出病毒NP所必需的，抑制該通路則可減少流感病毒的復(fù)制和炎癥癥狀[37]。此外當(dāng)病原體攻擊機體時MAPKs與炎癥細胞因子和趨化因子的表達密切相關(guān)，其中趨化因子 CCL2能夠特異性地趨化嗜酸性粒細胞聚集到氣道黏膜表面，引起支氣管上皮組織的損傷[38]。綜上所述，葶藶大棗瀉肺湯中關(guān)鍵成分可能通過調(diào)控TNF，MAPK，CCL2等靶點而發(fā)揮抗炎作用，保護肺損傷，從而輔助治療COVID-19。

研究報道COVID-19病理檢查發(fā)現(xiàn)肺組織有水腫、蛋白樣滲出物、局灶性反應(yīng)性肺細胞增生伴斑片狀炎性細胞浸潤[39]。由此說明當(dāng)組織受到損傷或者感染，炎癥反應(yīng)是機體抵抗病原體的常見方式之一，有助于加強機體對病毒的清除作用[40]。促炎和抗炎機制的平衡對于維持機體免疫穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要[41]，若機體從“自我保護”演變?yōu)椤斑^度保護”的狀態(tài)，打破炎癥反應(yīng)的平衡狀態(tài)，使免疫細胞產(chǎn)生正反饋反應(yīng)進而誘導(dǎo)大量的促炎因子TNF-α，IL-1β，IL-8等的生成，可觸發(fā)機體導(dǎo)致過度炎癥反應(yīng)即細胞因子風(fēng)暴，短時間內(nèi)大量產(chǎn)生炎癥因子并對組織、器官造成嚴(yán)重病理損傷[42]。因此探索葶藶大棗瀉肺湯對炎癥相關(guān)通路的調(diào)節(jié)作用，及防止細胞因子風(fēng)暴的產(chǎn)生具有重要意義。

本研究進一步對有效靶點分別進行GO與KEGG富集分析，得到GO條目232個，KEGG通路146條，GO富集分析結(jié)果顯示靶點主要富集在凋亡信號途徑、外部刺激反應(yīng)的正向調(diào)節(jié)、脂多糖應(yīng)答等。KEGG通路結(jié)果顯示，葶藶大棗瀉肺湯主要涉及IL-17信號通路、NF-κB 信號通路、肺結(jié)核等。IL-17信號通路在自身免疫和感染中誘導(dǎo)病理變化，可通過MAPK與NF-κB等途徑誘導(dǎo)炎癥因子IL-1β，IL-6，TNF的產(chǎn)生并協(xié)同加重炎癥損傷[43]，在中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)的血清中檢測出IL-17，IL-6含量明顯增高[44]，其中IL-6是誘發(fā)炎癥風(fēng)暴的重要通路，當(dāng)機體的炎癥平衡狀態(tài)被打破，免疫系統(tǒng)在殺死病毒的同時，也會殺死大量肺的正常細胞，嚴(yán)重破壞肺的換氣功能，從而產(chǎn)生“白肺”[45]。表明細胞因子風(fēng)暴與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，另外IL-17通路的激活對膿毒癥引起的肺部炎癥起關(guān)鍵作用[46]。NF-κB作為一種涉及炎癥介質(zhì)產(chǎn)生、細胞增殖、細胞外基質(zhì)交聯(lián)和細胞凋亡轉(zhuǎn)錄因子，參與了多種炎癥反應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程[47]。研究報道重癥支氣管肺炎組的NF-κB表達水平均顯著高于空白對照組，同時，其上游PI3K/AKT的磷酸化刺激NF-κB的活性增強，產(chǎn)生二聚體入核，從而調(diào)控炎癥因子的合成和釋放，導(dǎo)致血漿中的趨化因子和細胞因子處于動態(tài)變化水平，與肺組織病理損傷息息相關(guān)[48]。綜合上述研究結(jié)果，預(yù)測葶藶大棗瀉肺湯具有抑制促炎因子的表達，減輕肺部炎性損傷的潛在機制，還可通過調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)信號通路來抑制細胞因子風(fēng)暴的爆發(fā)，可為進一步防治COVID-19提供一定的基礎(chǔ)支持。

ACE2受體是一種可溶性的重組蛋白，藥物成分與之結(jié)合后，可以抑制病毒與其活性部位相結(jié)合，從而防止病毒的傳播[49]。分子對接結(jié)果顯示，葶藶大棗瀉肺湯中的主要活性成分與ACE2受體的結(jié)合能均遠小于-25.10 kJ/mol，提示以上成分均與ACE2具有較好的結(jié)合效果。由此可見，藥物活性成分與該受體結(jié)合較為穩(wěn)定，推測葶藶大棗瀉肺湯可通過與ACE2受體結(jié)合，從而抑制病毒與ACE2間的相互作用，進而存在潛在地治療COVID-19的作用。排名前十的成分中6種來源于葶藶子，分別為：β-谷甾醇、蛇床子素、豆甾醇、槲皮素、山奈酚與異鼠李素；另外4種來源于大棗，分別為：(S)-椰油堿、斯特法林、香豆素、小檗堿。表明葶藶子與大棗中的成分均與ACE2具有一定的結(jié)合能力，可共同作用于機體，進而發(fā)揮治療COVID-19的作用。

綜上所述，本文通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，預(yù)測葶藶大棗瀉肺湯對于COVID-19潛在的治療靶點及調(diào)控通路，得到葶藶大棗瀉肺湯具有潛在抑制機體產(chǎn)生炎癥風(fēng)暴的作用。本研究為葶藶大棗瀉肺湯治療COVID-19的藥效機制研究提供了初步的預(yù)測，其確切的機制仍需后續(xù)的實驗研究驗證。