老年慢性阻塞性肺疾病患者輔助性T細(xì)胞17/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平與肺功能的相關(guān)性研究

戴克芬，余倩，王文婧，楊曉蘭，汪艷麗，鄔亭亭

成都市第三人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，四川成都610000

慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD，慢阻肺）是一組氣流受限為特征的肺部疾病，氣流受限持續(xù)存在，變成進(jìn)行性的發(fā)展，嚴(yán)重可能會(huì)導(dǎo)致呼吸衰竭[1-2]。肺氣腫和慢性支氣管炎等都能發(fā)展成為慢阻肺[3]。COPD 的病因尚不清楚，近年來(lái)有研究認(rèn)為CD4+T 細(xì)胞亞群介導(dǎo)的自身免疫應(yīng)答在COPD 的發(fā)生和發(fā)展過程中起到重要作用[4]。輔助性T 細(xì)胞17 (Th17) 和調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（Treg）是CD4+T 細(xì)胞亞群的重要分支，可分泌多種炎性因子，參與機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)[5]。本研究通過分析老年COPD患者Th17/Treg細(xì)胞水平與肺功能的相關(guān)性，為COPD患者的臨床診斷及預(yù)防提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月—2020年2月在成都市第三人民醫(yī)院進(jìn)行治療的老年COPD患者110 例設(shè)為觀察組，其中61 例穩(wěn)定期患者作為穩(wěn)定期亞組，49例急性加重期患者作為急性加重期亞組；另選同期健康體檢者70 例設(shè)為對(duì)照組。穩(wěn)定期亞組中男性35 例，女性26 例；年齡為60～78 歲，平均年齡為（68.5±6.7）歲；平均病程為（9.55±1.99）年；吸煙31 例；飲酒28 例；合并疾?。汉喜⑻悄虿?0 例，合并高血壓12例，合并高血脂16 例。急性加重組中男性27 例，女性22 例；年齡為61～79 歲，平均年齡為（68.7±6.8）歲；平均病程為（9.57±1.96）年；吸煙26 例；飲酒24 例；合并糖尿病17 例，合并高血壓8 例，合并高血脂14 例。另選同期健康體檢者70 例設(shè)為對(duì)照組，男性39 例，女性31 例；年齡60～78（69.08±6.72）歲；吸煙34 例；飲酒32 例；合并疾病：合并糖尿病23 例，高血壓14 例，高血脂17 例。2 組一般資料差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本次研究獲得醫(yī)學(xué)倫理學(xué)備案，患者知情且簽署同意書。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合COPD診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；（2）資料完整；（3）年齡≥60 歲；（4）依從性高。符合上述全部選項(xiàng)的患者納入本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他肺部疾病，如肺結(jié)核、肺纖維化；（2）合并支氣管哮喘；（3）合并自身免疫性疾??；（4）合并心、肝、腎等嚴(yán)重器質(zhì)性疾病。符合上述任意1 選項(xiàng)的患者不納入本研究。

1.3 觀察指標(biāo)與方法（1）肺功能檢測(cè)：采用RSFJ900型肺功能檢測(cè)儀（成都日升電氣有限公司）檢測(cè)FEV1%和FVC%，計(jì)算FEV1/FVC 值。比較3 組受試者的肺功能相關(guān)指標(biāo)，包括FEV1%、FVC%和FEV1/FVC 比值。（2）Th17 和Treg 檢測(cè)：清晨空腹靜脈取血10mL，采用FACS Calibur 型流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD 公司生產(chǎn)）檢測(cè)，大鼠抗人IL-17-PE 單克隆抗體、大鼠抗人CD4-FITC 單克隆抗體、兔抗人CD-25-PE 單克隆抗體、大鼠抗人Foxp3-PECy5 單克隆抗體，本研究所用抗體均購(gòu)自美國(guó)BD 公司。比較3 組受試者的外周血中Th17和Treg 細(xì)胞的表達(dá)水平及Th17/Treg 細(xì)胞比值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用 檢驗(yàn)；采用Spearman 相關(guān)性及散點(diǎn)圖分析輔助性T 細(xì)胞17/調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞水平與肺功能指標(biāo)的關(guān)系。＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組外周血中Th17 和Treg 的表達(dá)水平比較 3 組受試者的Th17 細(xì)胞分?jǐn)?shù)、Th17/Treg 值、Treg 細(xì)胞分?jǐn)?shù)比較差異顯著（＜0.05）；急性加重期亞組Th17 細(xì)胞分?jǐn)?shù)、Th17/Treg 值均明顯高于對(duì)照組和穩(wěn)定期亞組，而Treg 細(xì)胞分?jǐn)?shù)低于對(duì)照組和穩(wěn)定期亞組（＜0.05）。見表1。

2.2 3 組患者肺功能的比較 3 組受試者的FEV1(%)、FEV1/FVC、FVC (%) 差異顯著（＜0.05）；急性加重期亞組的FEV1(%)、FEV1/FVC、FVC (%) 低于穩(wěn)定期亞組和對(duì)照組（＜0.05）。見表2。

2.3 老年COPD 患者外周血中Th17/Treg 水平與肺功能值的相關(guān)性分析Spearman 相關(guān)性分析顯示，老年COPD 患者中外周血Treg 細(xì)胞分?jǐn)?shù)與FVC、FEV1、FEV1/FVC 呈正相關(guān)（＜0.05）；Th17 與FEV1、FEV1/FVC 呈負(fù)相關(guān)（＜0.05）；Th17/Treg 值與FVC、FEV1、FEV1/FVC 呈負(fù)相關(guān)（＜0.05）。直線散點(diǎn)圖顯示Treg細(xì)胞分?jǐn)?shù)、Th17/Treg 值與FVC、FEV1、FEV1/FVC 有直線相關(guān)性（2=0.219、 0.237、 0.184；2=0.151、0.175、 0.168），Th17 細(xì)胞分?jǐn)?shù)與FEV1、FEV1/FVC有直線相關(guān)性（2=0.218,0.174）。見表3和圖1。

3 討論

COPD 是臨床常見疾病，臨床表現(xiàn)為慢性咳嗽、咳痰、呼吸困難等癥狀，多發(fā)于中老年人群[7-8]。老年人群由于免疫力較差，且大多患有基礎(chǔ)性疾病，病情容易惡化，為臨床治療增加一定的難度。老年COPD患者的發(fā)病率和病死率較高，嚴(yán)重威脅患者的生命安全，也增加了社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，COPD 的防治成為醫(yī)學(xué)工作者的研究熱點(diǎn)。

本研究發(fā)現(xiàn)3 組受試者的Th17 細(xì)胞分?jǐn)?shù)、Th17/Treg 值、Treg 細(xì)胞分?jǐn)?shù)比較差異顯著。Th17 細(xì)胞作為一種CD4+輔助性T 細(xì)胞，在自身免疫疾病、炎性疾病中發(fā)揮重要作用，可以分泌IL-17、IL-22 等促炎癥因子介入引導(dǎo)自身免疫應(yīng)答[9]。Treg 細(xì)胞是一類具有顯著免疫抑制作用的CD4+T 細(xì)胞亞群，能抑制其他細(xì)胞的免疫應(yīng)答，維持機(jī)體的免疫平衡，可通過分泌IL-10 和TGF-b 等因子發(fā)揮免疫抑制作用[10]。Th17 和Treg 通過相互拮抗、抑制，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。研究結(jié)果表明COPD 患者的Th17 和Treg 表達(dá)失衡，Treg 低表達(dá)，對(duì)免疫耐受和炎癥反應(yīng)控制減弱，導(dǎo)致CD4+T 細(xì)胞向Th17 細(xì)胞分化增高，Th17 呈高表達(dá)，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，加重COPD 患者病情進(jìn)展，且隨著病情的進(jìn)展，Th17/Treg 細(xì)胞失衡約嚴(yán)重。提示外周血Th17 細(xì)胞分?jǐn)?shù)、Th17/Treg 細(xì)胞比值、Treg 細(xì)胞分?jǐn)?shù)可作為COPD 患者的診斷指標(biāo)。李玲春等[11]研究認(rèn)為Th17/Treg 細(xì)胞失衡與COPD 患者病情變化及肺功能指標(biāo)密切相關(guān)，本研究在此基礎(chǔ)上從免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)等機(jī)制對(duì)Th17/Treg 細(xì)胞失衡造成肺功能損傷機(jī)制做了進(jìn)一步研究。林琳等[12]研究結(jié)果認(rèn)為COPD 且吸煙患者的Th17 細(xì)胞分?jǐn)?shù)、Treg 細(xì)胞分?jǐn)?shù)均高于健康吸煙患者和健康人群，該研究認(rèn)為香煙中一些成分會(huì)導(dǎo)致慢性炎癥，使得Th17 大幅升高，Th17 產(chǎn)生更強(qiáng)的炎癥反應(yīng)大于Treg 的抗炎效應(yīng)，打破了Th17 和Treg 表達(dá)平衡，與本研究有所出入。研究結(jié)果顯示3 組受試者的FEV1(%)、FEV1/FVC、FVC(%) 差異顯著。FEV1(%)、FEV1/FVC、FVC (%) 肺功能指標(biāo)能夠客觀的評(píng)估氣流受限程度，在一定程度反應(yīng)病情的嚴(yán)重程度、肺功能受損情況[13]。COPD 患者通常病情較長(zhǎng)，對(duì)患者肺功能出現(xiàn)不同程度的損傷，導(dǎo)致患者呼吸困難，F(xiàn)EV1(%)、FEV1/FVC 值降低。張晶等[14]研究發(fā)現(xiàn)COPD 患者的FEV1 (%)、FEV1/FVC、FVC 和Treg 細(xì)胞比例低于正常健康者，Th17細(xì)胞比例高于正常健康者，研究認(rèn)為Treg 和Th17 介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)可能會(huì)影響患者的肺功能，與本研究基本一致。經(jīng)Spearman 和直線散點(diǎn)圖結(jié)果顯示，Treg細(xì)胞分?jǐn)?shù)與FVC、FEV1、FEV1/FVC 均呈正相關(guān)；Th17細(xì)胞分?jǐn)?shù)與FEV1、FEV1/FVC 呈負(fù)相關(guān)；Th17/Treg值與FVC、FEV1、FEV1/FVC 呈負(fù)相關(guān)?？赡苁荰reg細(xì)胞分?jǐn)?shù)降低，對(duì)機(jī)體免疫抑制作用的控制減弱，使得CD4+T 細(xì)胞向Th17 分化增加，炎癥因子分泌增加，加重肺部的炎癥反應(yīng)，破壞肺部組織，使得氣流受限程度加重，影響肺部的換氣功能，吸氣和換氣能力下降[15]。提示Treg 細(xì)胞、Th17 細(xì)胞水平與COPD 患者的肺功能損傷程度密切相關(guān)，可能參與COPD 疾病的發(fā)生與進(jìn)展。本研究通過觀察COPD 患者穩(wěn)定期與急

性期的Th17/Treg 細(xì)胞變化，分析其與肺功能損傷程度的相關(guān)性，為研究COPD 的免疫機(jī)制及干預(yù)靶點(diǎn)提供參考依據(jù)。

表1 3 組外周血中Th17 和Treg 的表達(dá)水平比較

表2 3 組患者肺功能的比較

表3 老年COPD 患者外周血中Th17/Treg 水平與肺功能值的相關(guān)性分析

綜上所述，老年COPD 患者的Th17 呈高表達(dá)，Treg 呈低表達(dá)，Th17 細(xì)胞分?jǐn)?shù)、Treg 細(xì)胞分?jǐn)?shù)、Th17/Treg細(xì)胞分?jǐn)?shù)與肺功能損傷密切相關(guān)，對(duì)Treg和Th17細(xì)胞相關(guān)因子的檢測(cè)有助于了解患者病情，也可以作為免疫治療的參考依據(jù)。然而，本研究存在一些不足之處，本研究選取的觀察指標(biāo)較少，缺乏對(duì)Treg 和Th17 細(xì)胞相關(guān)因子參與COPD 患者的發(fā)病機(jī)制的研究，有待完善。