不同外植體和激素對喜樹愈傷組織誘導的影響

葉水英

摘 要：為了探索喜樹組織培養(yǎng)愈傷組織誘導的最佳配方，利用喜樹不同外植體（帶腋芽莖段、側芽和葉片），在MS培養(yǎng)基中添加不同激素（2，4-D，6-BA和NAA）的不同濃度和不同配比，進行愈傷組織的誘導。結果表明：在MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，帶腋芽莖段添加NAA 0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L+ 2，4-D 2mg/L，愈傷組織誘導效果最佳，愈傷組織的誘導率達到了60%。

關鍵詞：喜樹;外植體;激素;愈傷組織;誘導率

中圖分類號 S79文獻標識碼 A文章編號 1007-7731（2020）19-0029-02

喜樹（學名：Camptotheca acuminate），別名旱蓮、水栗、水桐樹、天梓樹、旱蓮子、千丈樹、野芭蕉、水漠子，屬藍果樹科、喜樹屬落葉喬木，高可達20～30m，樹干端直。喜樹是我國特有的樹種，其根、樹皮、枝葉及種子中含喜樹堿，具有極高的藥用價值。

喜樹主產(chǎn)我國江蘇南部、浙江、福建、江西、湖北、湖南、四川、貴州、廣東、廣西、云南等省區(qū)，在四川西部成都平原和江西東南部均較為常見。為暖地速生樹種，喜光，不耐嚴寒干燥。從其果、皮、葉中分離出來的生物堿喜樹具堿有很強的抗癌活性，是制備高級抗癌藥的原料。另外，喜樹還具有綠化觀賞及生態(tài)防護等多種價值。1999年8月，經(jīng)中華人民共和國國務院批準，喜樹被列為第一批國家重點保護野生植物，保護級別為Ⅱ級。

如果僅依靠直接從采伐喜樹中提取喜樹堿，既破壞生態(tài)環(huán)境又滿足不了需求，而通過化學合成喜樹堿非常困難，導致喜樹堿提取物價格昂貴，供應緊張。為了保護喜樹資源，可以通過組織培養(yǎng)產(chǎn)物不斷產(chǎn)生喜樹堿以及高產(chǎn)喜樹堿植株來解決喜樹堿原料不足的問題。近幾十年來，關于喜樹組織培養(yǎng)的研究有很多，主要包括愈傷組織的誘導、喜樹植株再生方法的研究、喜樹細胞培養(yǎng)和喜樹毛狀根的誘導培養(yǎng)等。其中，采用的外植體種類有幼葉、莖段、莖尖、帶芽莖段、葉柄、離體胚、胚軸等，并且已能利用幼葉、莖段、莖尖和離體胚培養(yǎng)獲得再生植株。本研究以不同外植體為試驗對象，在MS培養(yǎng)基中添加不同激素的濃度和配比，探究其對喜樹組織培養(yǎng)愈傷組織誘導率的影響，以期為喜樹組織培養(yǎng)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 外植體及其消毒 2019年4月份，在景德鎮(zhèn)學院老校區(qū)，選擇生長健壯、無病蟲害的喜樹植株，取當年生帶腋芽的莖段、側芽和葉片作為外植體。將喜樹外植體材料在實驗室的水龍頭下沖洗干凈。將處理帶腋芽的莖段、側芽和葉片先用流動的自來水沖洗干凈，再分別放于500mL燒杯中，10%用雙氧水浸泡6min，無菌水清洗3～4遍，然后用70%的酒精溶液浸泡1min，無菌水沖洗。接著用飽和的漂白粉溶液浸泡8min，用無菌水沖洗3～5遍。最后用0.1%升汞溶液（加入吐溫2滴）浸泡10min，期間不斷搖動溶液，用無菌水洗滌3～5遍待用。將外植體切成1.5cm左右小段進行接種。

1.2 試驗方法 使用MS培養(yǎng)基培養(yǎng)，pH5.8。激素分別用NAA、2，4-D、6-BA。外植體用帶腋芽的莖段、側芽和葉片。開展單獨添加激素2，4-D、6-BA、NAA，NAA與6-BA2種激素不同濃度配比，以及NAA、2，4-D、6-BA3種激素不同濃度配比3組試驗。培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度為（25±2）℃;每天光照12h;光照度1500～2000Lx。

2 結果與分析

2.1 不同激素對愈傷組織誘導的影響 在MS培養(yǎng)基中使用不同的外植體在添加1種激素條件下進行培養(yǎng)，其中用到的激素濃度分別是0.5mg/L2，4-D、1.0mg/L6-BA、0.5mg/LNAA，每種激素培養(yǎng)的每種外植體做4組試驗，每組接種數(shù)均為20個，24d后觀察外植體的生長情況如表1所示。由表1可知，3種外植體在添加1.0mg/L 6-BA的MS培養(yǎng)基中成活率最高，其中以帶腋芽的莖段在添加1.0mg/L 6-BA的MS培養(yǎng)基中成活率最高為38.3%。

2.2 不同激素濃度配比對愈傷組織誘導的影響

2.2.1 2種激素濃度配比 利用NAA和6-BA不同濃度配比對不同外植體進行愈傷組織的誘導，24d后進行觀察試驗情況，其結果見表2。由表2可知，在MS培養(yǎng)基中添加0.5mg/LNAA+1.0mg/L6-BA激素配比條件下對外植體的愈傷化效果最好，對帶腋芽莖段的愈傷率最高，愈傷率達45%，葉片的愈傷率也達到25%，側芽的愈傷率為10.5%。愈傷率最低的是添加0.5mg/LNAA+0.5mg/L6-BA激素，帶腋芽莖段的愈傷率為15%，葉片的愈傷率12.5%，側芽的愈傷率為0.05%。

2.2.2 3種不同激素濃度配比 利用NAA、6-BA和2，4-D不同濃度配比對不同外植體進行愈傷組織的誘導，24d后進行觀察試驗情況，其結果見表3。由表3可知，添加0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+2mg/L2，4-D的激素，愈傷率最高，其中以帶腋芽莖段作為外植體，愈傷率最高，達到60%。而添加1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+2mg/L2，4-D的愈傷率最低，以帶腋芽莖段作為外植體，愈傷率在這組中較高，也只達到43%。

3 結論與討論

本試驗結果表明：帶腋芽莖段在MS培養(yǎng)基中添加0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+2mg/L2，4-D激素中的愈傷化最高，最高可達60%。在MS培養(yǎng)基中添加3種激素不同濃度配比愈傷組織的誘導率，比添加2種不同激素濃度配比愈傷組織的誘導率高。外植體以選用帶腋芽的莖段誘導愈傷率高。

本試驗所用的外植體是在室外采取，增加了消毒的難度，特別是葉片消毒難度大，如果葉片較嫩，消毒易致死，葉片的褐變率也較高，這對試驗的結果有一定的影響。另外，不同培養(yǎng)基添加不同激素對喜樹愈傷組織的誘導有待于進一步研究。

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（責編：張宏民）