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    老年慢性心力衰竭病人錳超氧化物歧化酶Ala-9Val基因多態(tài)性與預(yù)后的相關(guān)性研究

    2020-10-30 06:12:14閆生玲屈麗娜薛恩忠
    實用老年醫(yī)學 2020年10期
    關(guān)鍵詞:心源性亞組等位基因

    閆生玲 屈麗娜 薛恩忠

    慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)是各種心臟疾病的終末發(fā)展階段,主要表現(xiàn)為心室泵血或充盈功能低下,是心血管疾病病人喪失勞動力及死亡的重要原因。錳超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn-SOD)是超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)重要的同工酶類型,主要存在于線粒體基質(zhì)中,是機體最重要的抗氧化酶之一,參與維持機體自由基平衡。既往研究發(fā)現(xiàn),CHF病人血清SOD活性顯著降低,并與CHF病人病情嚴重程度密切相關(guān)[1-2],提示氧化應(yīng)激在CHF發(fā)生發(fā)展進程中發(fā)揮重要作用。Ala-9Val是近年來新發(fā)現(xiàn)的Mn-SOD基因多態(tài)性位點,本研究擬比較Mn-SOD基因Ala-9Val位點不同基因型CHF病人預(yù)后情況的差異,旨在探討Mn-SOD基因多態(tài)性與CHF病人預(yù)后的關(guān)系,為臨床工作提供參考。

    1 對象與方法

    1.1 研究對象 經(jīng)本院倫理委員會審核批準,連續(xù)性選擇2015年1月至2017年6月于我科住院治療的老年CHF病人,納入標準:(1)年齡≥60歲;(2)CHF診斷符合2014年中華醫(yī)學會心血管病學分會制定的《中國心力衰竭診斷和治療指南》[3];(3)隨訪資料完整。排除標準:(1)合并各種心臟瓣膜病、先天性心臟病、心包疾病、心肌炎等;(2)合并惡性腫瘤,嚴重肝腎疾病者。本研究共選取CHF病人280例,其中男179例,女101例,年齡60~82歲,平均(68.06±6.98)歲。另隨機從我院同期老年健康體檢者中選擇100例健康志愿者作為對照組,包括男60例,女40例,年齡60~79歲,平均(67.82±6.60)歲。2組性別、年齡差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

    1.2 方法

    1.2.1 基因多態(tài)性檢測及分組:采用PCR-限制性片段長度多態(tài)性法(RFLP)檢測Mn-SOD Ala-9Val基因多態(tài)性。采集清晨空腹外周靜脈血,應(yīng)用DNA提取試劑盒(北京天根生化科技有限公司)提取全血基因組DNA。嚴格按照PCR操作流程進行擴增,上、下游引物分別為5′-CAGCCCAGCCTGCGTAGACG-3′和5′-GCGTTGATGTGAGGTTCCAG-3′,均由上海生物工程有限公司合成。取延伸產(chǎn)物采用限制性內(nèi)切酶BsaW Ⅰ進行酶切。最后,取酶切產(chǎn)物進行電泳,凝膠成像系統(tǒng)判定結(jié)果。如圖1,有且只有1條88 bp電泳帶為Ala/Ala基因型,有2條長度分別為88 bp和172 bp電泳帶為Ala/Val基因型,有且只有1條172 bp電泳帶為Val/Val基因型。根據(jù)既往研究中國人群Mn-SOD Ala-9Val位點基因型分布特點及本研究檢測結(jié)果,將CHF組病人分為Val/Val亞組和Ala/Ala+Ala/Val亞組。

    注:1,2:Val/Val;3,4:Ala/Val;5,6:Ala/Ala;M:marker圖1 Mn-SOD基因Ala-9Val位點PCR-RFLP電泳圖

    1.2.2 其他臨床資料收集:包括性別、年齡、BMI、吸煙史、高血壓、DM及心肌梗死等疾病史,NYHA分級,BNP、血肌酐、估算的腎小球率過濾(estimated glomerular filtration rate,eGFR)等血液化驗指標。此外,CHF病人均接受超聲心動圖檢查,采集并記錄LVEF及左室舒張末期內(nèi)徑(left ventricular end diastolic diameter,LVEDD)等參數(shù)。

    1.2.3 隨訪:以確診CHF之日為隨訪起點,每3個月通過門診或電話隨訪1次,至少隨訪3年,以心源性死亡(猝死、CHF加重死亡以及致死性心肌梗死)為隨訪終點,并以此將CHF病人分為死亡亞組和存活亞組。

    2 結(jié)果

    2.1 2組Mn-SOD Ala-9Val基因多態(tài)性比較 280例CHF病人中,Mn-SOD Ala-9Val位點Val/Val、Ala/Val和Ala/Ala基因型分別有227例(81.07%),48例(17.14%)和5例(1.79%),對照組分別為78例(78.00%),19例(19.00%)和3例(3.00%)。2組基因型和等位基因分布頻率差異均無統(tǒng)計學意義(χ2=0.747,P=0.688;χ2=0.696,P=0.404)。2組基因型分布經(jīng)檢驗均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡(χ2=1.651,P=0.438;χ2=1.727,P=0.422),具有群體代表性。

    2.2 不同基因型老年CHF病人一般臨床特點比較 Val/Val亞組病人合并心肌梗死比例高于Ala/Ala+Ala/Val亞組(χ2=4.340,P=0.037),2個亞組其他指標差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。見表1。

    表1 不同基因型CHF病人臨床資料比較

    2.3 不同基因型老年CHF病人3年死亡率比較 280例CHF病人隨訪3年時間內(nèi)失訪19例,非心源性死亡6例,剩余255例,其中攜帶Val/Val、Ala/Val和Ala/Ala基因型病人分別為204例(80.00%),46例(18.04%)和5例(1.96%)。255例CHF病人中共73例病人發(fā)生心源性死亡,Val/Val亞組和Ala/Val+Ala/Ala亞組分別有67例(31.86%)和6例(15.69%),2個亞組3年死亡率比較差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=8.872,P=0.003)。

    2.4 老年CHF病人預(yù)后的影響因素分析 單因素分析顯示,死亡亞組BMI、心肌梗死比例,NYHA Ⅲ~Ⅳ級比例、LgBNP和LVEDD水平高于存活亞組,eGFR和LVEF低于存活亞組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。2個亞組間Mn-SOD基因Ala-9Val位點基因型和等位基因分布頻率差異均具有統(tǒng)計學意義(χ2=9.056,P<0.05)。見表2。進一步Logistic回歸分析顯示,攜帶Val/Val基因型是老年CHF病人3年心源性死亡的獨立危險因素(OR=1.759,95%CI:1.151~2.687,P=0.003)。

    表2 不同預(yù)后CHF病人臨床資料比較

    3 討論

    越來越多研究證據(jù)表明,機體氧化應(yīng)激水平失衡是CHF病人病情進展的重要因素[1-2,4]。SOD是一類廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶,人體中存在Mn-SOD、Fe-SOD、Ni-SOD和CuZn-SOD等多種同工酶形式,Mn-SOD主要分布于細胞線?;|(zhì)內(nèi),是機體最主要的自由基清除劑之一,對維持機體細胞氧化還原平衡至關(guān)重要。

    人類Mn-SOD基因位于6q25上,Ala-9Val是目前研究最多的Mn-SOD基因單核苷酸多態(tài)性位點,可將Mn-SOD線粒體靶序列第9位的氨基酸由丙氨酸(Ala)替換為絲氨酸(Val),進而導致信號肽構(gòu)象由親水的α-螺旋結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變?yōu)槭杷摩?折疊層結(jié)構(gòu),阻礙Mn-SOD在線粒體膜上轉(zhuǎn)運,顯著降低Mn-SOD活性。大量研究結(jié)果顯示Ala-9Val位點多態(tài)性與多種疾病發(fā)生相關(guān)[5-6]。此外,既往國內(nèi)外研究結(jié)果表明,不同地區(qū)、不同種族人群該位點基因型和等位基因分布頻率存在顯著差異,亞洲人群Ala等位基因分布頻率顯著低于歐洲人群。多數(shù)國外研究結(jié)果顯示西方白種人Ala等位基因分布頻率約為70%[7-8]。Lee等[9]在臺灣地區(qū)人群中發(fā)現(xiàn)攜帶Ala等位基因(Ala/Ala+Ala/Val)者約占26.29%,張超賢等[10]以國人為研究對象的結(jié)果與之相似。本研究健康對照組攜帶Ala等位基因占22%,再次提示有必要在不同地區(qū)、不同種族人群中進一步開展該位點基因多態(tài)性研究分析。

    本研究結(jié)果顯示攜帶Val/Val基因型是老年CHF病人3年內(nèi)發(fā)生心源性死亡的獨立危險因素,提示基因型的差異可能會導致病人對缺血缺氧的耐受程度發(fā)生改變,干預(yù)心肌重構(gòu)進程,影響病人預(yù)后,進一步驗證了氧化/抗氧化系統(tǒng)失衡在CHF疾病進展中的關(guān)鍵作用。

    綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)Mn-SOD基因Ala-9Val多態(tài)性與老年CHF病人預(yù)后相關(guān),Val/Val基因型可能成為預(yù)測老年CHF病人預(yù)后不良的新指標。本研究也存在不足之處:首先,本研究所納入研究對象例數(shù)有限,尤以Ala/Ala基因型病人例數(shù)較少,所得到的結(jié)果可能存在偏差,期待后續(xù)多中心大樣本研究結(jié)果進一步驗證;其次,限于條件,本研究未就Mn-SOD活性進行檢測,不能直接說明不同基因型病人Mn-SOD活性的差異;最后,Mn-SOD基因還存在其他多態(tài)性位點,它們與CHF預(yù)后的關(guān)系,以及各位點之間的相互關(guān)系有待繼續(xù)研究。

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