凝血因子Ⅺ和凝血因子Ⅻ與急性肺栓塞患者疾病嚴重程度的關系及其作用機制研究

孟燕，馬強，潘龍飛，秦皓，張波

急性肺栓塞（acute pulmonary embolism，APE）主要因血栓堵塞肺動脈而導致急性肺循環(huán)障礙，并誘發(fā)肺動脈高壓和右心功能衰竭，患者主要表現(xiàn)為胸痛、咯血、呼吸困難、休克等癥狀，嚴重者猝死，嚴重威脅患者的生命健康。APE臨床病死率較高，但其具體發(fā)病機制尚未完全明確。凝血因子Ⅻ（coagulation factor Ⅻ，F(xiàn)Ⅻ）作為凝血接觸途徑的重要組成因子，亦是內(nèi)源性凝血途徑激活過程中的重要參與因子［1］；凝血因子Ⅺ（coagulation factor Ⅺ，F(xiàn)Ⅺ）則是維持內(nèi)源性凝血途徑及凝血級聯(lián)反應的關鍵因子［2］，二者均與血栓性疾病如靜脈血栓栓塞癥（venous thromboembolism，VTE）等有關［3-5］，而深靜脈血栓形成是APE的常見病因［6-7］。目前關于FⅪ、FⅫ在APE發(fā)生、發(fā)展中作用機制的研究較少，且其指導APE患者抗凝治療臨床意義的研究也相對較少。本研究旨在探討FⅪ、FⅫ與APE患者疾病嚴重程度的關系，并探討其在APE發(fā)生、發(fā)展中的可能作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性選取2018—2019年西安交通大學第一附屬醫(yī)院收治的APE患者45例，均符合相關指南制定的肺栓塞診斷標準［8-9］并為首次發(fā)病，且經(jīng)CT肺動脈造影（CT pulmonary arteriography，CTPA）等檢查確診。納入標準：（1）年齡≥18歲；（2）發(fā)病時間＜14 d；（3）臨床資料及隨訪資料完整。排除標準：（1）合并嚴重肝腎功能不全、嚴重感染、惡性腫瘤、結(jié)締組織病或其他血栓性疾病者；（2）近2周內(nèi)使用抗凝、溶栓藥物治療者；（3）合并嚴重創(chuàng)傷或出血性疾病者；（4）合并凝血功能異?；蜓合到y(tǒng)疾病者；（5）妊娠期或哺乳期婦女；（6）既往有急診介入治療或手術治療史者；（7）死亡者。所有患者中，男28例，女17例；年齡35～69歲，中位年齡53歲。本研究經(jīng)西安交通大學第一附屬醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核批準（No.XJTU1AF2018LSK-010），患者及家屬對本研究知情并簽署知情同意書。

1.2 治療方法 患者入院后即給予吸氧、維持生命體征穩(wěn)定等對癥支持治療［8-10］，針對高度疑似APE者給予依諾肝素鈉注射液〔商品名：克賽，賽諾菲（北京）制藥有限公司生產(chǎn)，注冊證號：H20170269〕100 U/kg，1次/12 h；待患者確診后給予華法林（上海上藥信誼藥廠有限公司生產(chǎn)，國藥準字H31022123）3 mg，口服，1次/d，待其國際標準化比值（INR）＞2后2 d停用低分子肝素鈉注射液，但需繼續(xù)口服華法林并依據(jù)INR調(diào)整劑量。INR參考范圍為2～3。

1.3 觀察指標

1.3.1 D-二聚體（D-dimer，D-D）、FⅪ、FⅫ水平 分別于治療前（入院時）及治療后2、4、6 d抽取患者肘靜脈血3 ml，1 500 ×g離心10 min，取血漿置于常溫環(huán)境下并于4 h內(nèi)應用Sysmex CS-5100全自動凝血分析儀及配套測定試劑盒進行檢測，其中D-D水平采用顆粒增強免疫比濁法測得，F(xiàn)Ⅺ、FⅫ水平采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測得。

1.3.2 肺栓塞嚴重程度 分別于治療前（入院時）及治療后2、4、6 d采用肺栓塞嚴重指數(shù)（pulmonary embolism severity index，PESI）分級［11］評估患者肺栓塞嚴重程度。

1.3.3 肺動脈阻塞指數(shù) 治療前采用Mastora評分方法［12］根據(jù)31支肺動脈內(nèi)栓子的數(shù)量和肺動脈截面阻塞程度評分計算患者肺動脈阻塞指數(shù)，其中肺動脈截面阻塞程度評分標準為：血管阻塞程度＜25%計1分，血管阻塞程度為25%～49%計2分，血管阻塞程度為50%～74%計3分，血管阻塞程度為75%～99%計4分，血管阻塞程度為100%計5分［13］。肺動脈阻塞指數(shù)=〔Σ（肺動脈內(nèi)栓子的數(shù)量×肺動脈截面阻塞程度評分）/155〕×100%。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理。計量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)兩兩比較采用LSD-t檢驗；計數(shù)資料以相對數(shù)表示，重復測量的等級資料比較采用Friedman檢驗；APE患者血漿FⅪ、FⅫ水平與肺動脈阻塞指數(shù)的相關性分析采用Pearson相關分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 APE患者不同治療時間血漿D-D、FⅪ、FⅫ水平及PESI分級 APE患者不同治療時間的血漿D-D、FⅪ、FⅫ水平及PESI分級比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。其中APE患者治療后6 d的血漿D-D、FⅪ、FⅫ水平低于治療前及治療后2、4 d，PESI分級優(yōu)于治療前及治療后2 d，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；APE患者治療后4 d的血漿D-D、FⅪ、FⅫ水平低于治療前及治療后2 d，PESI分級優(yōu)于治療前，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；APE患者治療后2 d的血漿D-D、FⅪ、FⅫ水平低于治療前，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，見表1）。APE患者治療前肺動脈阻塞指數(shù)為（36.72±15.47）%。

2.2 治療前不同PESI分級的APE患者血漿FⅪ、FⅫ水平比較 治療前不同PESI分級的APE患者血漿FⅪ、FⅫ水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。其中，治療前PESI分級Ⅴ級的APE患者血漿FⅪ、FⅫ水平高于Ⅰ～Ⅳ級者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；治療前PESI分級Ⅲ、Ⅳ級的APE患者血漿FⅪ、FⅫ水平高于Ⅰ～Ⅱ級者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；治療前PESI分級Ⅱ級的APE患者血漿FⅫ水平高于Ⅰ級者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，見表2）。

表1 APE患者不同治療時間血漿D-D、FⅪ、FⅫ水平及PESI分級比較（n=45）Table 1 Comparison of plasma levels of D-D，F(xiàn)Ⅺ，F(xiàn)Ⅻ and PESI grade at different time of treatment in patients with APE

表2 治療前不同PESI分級的APE患者血漿FⅪ、FⅫ水平比較（±s，%）Table 2 Comparison of plasma levels of FⅪ and FⅫ in APE patients with different PESI grades before treatment

注： 與Ⅰ級比較，aP＜0.05；與Ⅱ級比較，bP＜0.05；與Ⅲ級比較，cP＜0.05；與Ⅳ級比較，dP＜0.05

PESI分級 例數(shù) FⅪ FⅫⅠ級 8 79.98±2.82 73.44±3.55Ⅱ級 11 81.34±4.48 77.23±3.34aⅢ級 12 84.53±2.89ab 80.35±2.75abⅣ級 9 86.97±2.26ab 82.38±3.21abⅤ級 5 92.34±1.24abcd 86.20±1.86abcd F值 16.047 17.374 P 值 ＜0.001 ＜0.001

2.3 治療前APE患者血漿FⅪ、FⅫ水平與肺動脈阻塞指數(shù)的相關性 Pearson相關分析結(jié)果顯示，治療前APE患者血漿FⅪ、FⅫ水平與肺動脈阻塞指數(shù)呈正相關（r值分別為0.762、0.837，P 值均 ＜0.001，見圖 1～2）。

3 討論

肺栓塞的主要病理改變?yōu)檠旱母吣隣顟B(tài)和纖溶能力下降，進而導致肺動脈出現(xiàn)不同程度阻塞［14］，在此過程中，機體的凝血系統(tǒng)與纖溶系統(tǒng)失衡，導致深靜脈血栓形成，游離后堵塞肺部血管床［15］。近年關于凝血/纖溶系統(tǒng)指標與肺栓塞患者病情嚴重程度的關系一直是臨床研究的熱點［16-17］。

圖1 治療前APE患者血漿FⅪ水平與肺動脈阻塞指數(shù)關系的散點圖Figure 1 Scatter plot of relationship between plasma level of FⅪ and pulmonary artery occlusion index in patients with APE before treatment

圖2 治療前APE患者血漿FⅫ水平與肺動脈阻塞指數(shù)關系的散點圖Figure 2 Scatter plot of relationship between plasma level of FⅫ and pulmonary artery occlusion index in patients with APE before treatment

研究表明，血漿凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ水平升高可明顯增加下肢深靜脈血栓形成的發(fā)生風險［18］。其中FⅫ是由肝臟合成的一種絲氨酸蛋白酶，是凝血接觸途徑的重要組成因子，也是內(nèi)源性凝血途徑激活過程中的重要參與因子［1］，其能與負電荷物質(zhì)表面、促凝物質(zhì)等接觸后形成活化的FⅫ，進而促進凝血酶和纖維蛋白形成［19］。目前，關于FⅫ的生理功能尚不完全明確，但有研究發(fā)現(xiàn)其與血栓形成密切相關［20］。多項研究證實，冠心病、腦梗死、VTE等疾病患者血漿FⅫ水平均較高［21-23］，推測FⅫ是血栓形成的影響因素；動物實驗表明，通過外源性途徑激活FⅫ基因缺陷大鼠的多聚磷酸鹽/FⅫ通路后，可增加APE發(fā)生風險，而多聚磷酸鹽/FⅫ通路又可能是腫瘤導致VTE甚至APE的重要途徑［24］，進一步推測FⅫ是APE的影響因素。

FⅪ同樣作為由肝臟合成的一種絲氨酸蛋白酶，不僅可在活化FⅫ的作用下被激活并進一步激活凝血因子Ⅸ，也可在凝血酶的反饋作用下激活凝血因子Ⅸ［6］。另外，活化的FⅪ可激活凝血因子Ⅴ和凝血因子Ⅷ［25］，因此，F(xiàn)Ⅺ是內(nèi)源性凝血途徑的重要因子，同時也是凝血級聯(lián)反應的關鍵因素。研究表明，F(xiàn)Ⅺ與VTE、心腦血管病等血栓性疾病有關［4］；FⅪ缺乏的患者血栓性疾病發(fā)生風險明顯降低，而通過抑制FⅪ表達可發(fā)揮明顯的抗凝作用，因此目前FⅪ已被認為是抗血栓治療的新靶點［26］。但FⅪ在APE中的具體作用機制尚未明確。

本研究結(jié)果顯示，APE患者血漿FⅪ、FⅫ水平與肺動脈阻塞指數(shù)均呈正相關，且該指標水平隨著PESI分級的加重而逐漸升高，分析原因為：活化的FⅫ需與FⅪ的Arg369-Ile370位點結(jié)合來激活后者，而封閉FⅪ的A2結(jié)構(gòu)域可阻斷活化的FⅫ對FⅪ的激活作用，進而減少外源性組織因子導致的肺栓塞［27-28］，提示FⅪ與FⅫ存在某種協(xié)同作用共同參與APE的發(fā)生、發(fā)展，亦進一步提示抗凝治療可能降低了FⅪ、FⅫ在APE患者血栓形成中的作用，但FⅫ在其中的具體作用機制仍需深入研究。

血漿D-D雖不能用于診斷APE，但其對APE的陰性預測價值較高［9，29-30］，且與患者的肺動脈阻塞程度呈正相關［15，31］。本研究結(jié)果顯示，隨著抗凝治療時間的延長，APE患者血漿D-D、FⅪ、FⅫ水平逐漸降低，分析原因可能為血栓形成導致FⅪ、FⅫ消耗增加；也可能是在抗凝治療早期，抗凝藥物導致凝血-纖溶系統(tǒng)發(fā)生改變，間接導致凝血功能亢進并加重FⅪ、FⅫ消耗。有研究表明，除凝血作用外，F(xiàn)Ⅻ還具有促進纖溶的作用，而FⅪ具有抑制纖溶的作用［28，32-35］。因此，APE患者在接受抗凝治療后，血漿FⅪ、FⅫ水平降低的原因仍需進一步探索。

綜上所述，F(xiàn)Ⅺ、FⅫ活性與APE患者疾病嚴重程度呈正相關，而抗凝治療可能會減弱FⅪ、FⅫ對APE患者血栓形成的影響。但本研究納入樣本量較少、觀察時間較短，且在患者治療后2、4、6 d未檢查肺動脈阻塞指數(shù)，缺乏該指標的動態(tài)觀察，導致結(jié)論可能存在偏倚；另外，本研究僅納入了采用華法林抗凝治療的患者，而溶栓治療及利伐沙班等新型口服抗凝藥治療是否同樣會對FⅪ、FⅫ活性產(chǎn)生影響尚需進一步探討。

作者貢獻：孟燕、馬強、潘龍飛進行文章的構(gòu)思與設計，研究的實施與可行性分析；孟燕、馬強、秦皓、張波進行數(shù)據(jù)收集、整理、分析；孟燕、潘龍飛進行結(jié)果分析與解釋；孟燕負責撰寫論文及文章的質(zhì)量控制、審校，并對文章整體負責、監(jiān)督管理；潘龍飛進行論文的修訂。

本文無利益沖突。