不同廠家黃連羊肝丸的顯微鑒別研究

趙閩家，吳 迪，王 旭，楊娜娜，劉樹森，徐蓓蕾*

(1.哈爾濱市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，哈爾濱150090；2. 哈爾濱商業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院，哈爾濱150076)

顯微鑒別(microscopic identification)是運(yùn)用電子顯微技術(shù)直接觀察中成藥中原料藥粉末的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物，借此鑒別中成藥處方組成的真實(shí)性的一種鑒別方法.大多數(shù)的中成藥直接用各種中藥粉末配制而成，因此可選擇粉末鑒定法進(jìn)行鑒定；有些濃縮丸劑、片劑等是由藥材浸膏制備的，其中殘留有藥材細(xì)胞、組織碎片及其它細(xì)微特征，因此顯微鑒定對(duì)其也有一定的應(yīng)用價(jià)值.鑒定時(shí)，根據(jù)處方和顯微觀察，選取足以說明在中成藥中是該藥所專有的特征，作為鑒別依據(jù)[1-3].

丸劑、散劑、片劑、膠囊劑等為中成藥的常見劑型，所用原料藥為部分或全部中藥材細(xì)粉，因此保留了飲片粉末的顯微特征，這類中成藥的質(zhì)量鑒別項(xiàng)下常列有顯微鑒別.中成藥所含藥味多、成分復(fù)雜且含量低、成分之間相互干擾大，因此現(xiàn)代化學(xué)方法及儀器分析方法常常不能有效測(cè)定其質(zhì)量，而顯微鑒別方法則獨(dú)具優(yōu)勢(shì).《中國(guó)藥典1977年版》初次記載了“中草藥及成方顯微鑒別法”，并在各中成藥的鑒別項(xiàng)下對(duì)其可資鑒別的顯微特征作出規(guī)定，一些省、市、自治區(qū)所編印的《藥品標(biāo)準(zhǔn)》也相繼增訂這方面內(nèi)容，《中國(guó)藥典1985年版》收載的中成藥對(duì)此又有所充實(shí)和提高，十余年來證明，顯微鑒別法對(duì)保證中成藥質(zhì)量行之有效[4-7].

《中國(guó)藥典2005年版》記載，黃連羊肝丸顯微鑒別：纖維束鮮黃色，壁稍厚，紋孔明顯，韌皮纖維淡黃色，梭形，壁厚，孔溝細(xì)，纖維束鮮黃色，周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶成片存在于薄壁組織中，種皮柵狀細(xì)胞一列，長(zhǎng)40～72 μm，其下數(shù)列細(xì)胞含草酸鈣簇晶及方晶，油管含黃色或棕黃色分泌物，不規(guī)則團(tuán)塊暗灰色，不透明，加酸產(chǎn)生氣泡[8].對(duì)黃連羊肝丸處方分析可知：黃連、胡黃連為根莖類中藥；黃芩、柴胡、龍膽為根類中藥；黃柏為皮類中藥；密蒙花為花類中藥；決明子為種子類中藥；木賊為全草類中藥；青皮、茺蔚子為果實(shí)類中藥；石決明為動(dòng)物類中藥.此中成藥，由十四味藥材組成，這些中藥藥材經(jīng)過幾千年的醫(yī)療實(shí)踐證明，皆有治療眼部疾病的作用或保肝、養(yǎng)肝之功效[9-11].羊肝補(bǔ)肝血，養(yǎng)肝陽(yáng)而治目疾；黃連有清心火、瀉肝明目的功效；決明子、茺蔚子可以涼肝明目；胡黃連、黃芩、黃柏、龍膽草的功效為清瀉肝火；柴胡、青皮可以舒肝解郁，黃連羊肝丸有清泄肝熱而明目之效[12-15].元代的《原機(jī)啟微》和明代的《證治準(zhǔn)繩》曾對(duì)此方有過記載，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究和臨床驗(yàn)證表明，黃連羊肝丸屬純中藥制劑，價(jià)格低廉，安全有效，無毒副作用，可作為病毒性角膜炎早期治療的首選藥物，是治療眼部疾病的良方.

1 方法與結(jié)果

1.1 儀器與材料

顯微鏡(XSM-20生物顯微鏡，寧波舜宇儀器有限公司)、干燥箱(XRD-HR760IN，深圳市旭日東電子設(shè)備有限公司)、黃連羊肝丸由不同廠家提供(見表1).

表1 不同廠家的黃連羊肝丸

1.2 制片及觀察

1.2.1 取樣

取不同廠家(或不同批次)的黃連羊肝丸，每盒任選其中3粒蜜丸(或3袋水蜜丸).

1.2.2 脫蜜

取蜜丸，除去外層，切成碎塊，加熱水(50～60 ℃)，振搖，使藥物溶散混懸、煉蜜溶解，靜置，傾去上液，在沉淀中再加熱水，依上法操作，如此3～4次(至上液基本無色)，最后所得的沉淀物即為樣品.可直接取沉淀制片，亦可將沉淀置干燥箱干燥后取樣制片進(jìn)行顯微鑒別.

1.2.3 制片

將需要進(jìn)行顯微觀察的粉末藥材放置于載玻片上，然后輕輕滴入2～3滴的水合氯醛，攪勻，蓋玻片必須用鑷子沿一側(cè)輕輕放下，以便液體能夠自然展勻.使用濾紙將溢出的液體吸拭或從蓋玻片邊緣補(bǔ)充液體不足的空隙.每個(gè)廠家的黃連羊肝丸粉末各制片5個(gè).

1.2.4 顯微觀察

將制備好的片子放在顯微鏡載物臺(tái)上，對(duì)黃連羊肝丸進(jìn)行顯微鑒定，檢出其所含的14種藥物成分，排除交叉，避免各藥物相互干擾，對(duì)其中各藥物具有鑒別價(jià)值的顯微特征進(jìn)行觀察并拍照.

1.3 結(jié)果與討論

1.3.1 各藥材顯微特征

1)黃連石細(xì)胞鮮黃色，測(cè)量其直徑平均值在25～64 μm之間，紋孔小，孔溝細(xì)，少數(shù)石細(xì)胞壁較薄而胞腔較大.

2)胡黃連棕色塊隨處散在，黃棕色，形狀、大小不一.

3)黃芩韌皮纖維微黃色.呈梭形，顯微測(cè)量其長(zhǎng)度平均值在51～200 μm之間，直徑約9～33 μm.

4)黃柏晶纖維鮮黃色，成束存在.柴胡油管管道中含黃棕色條狀分泌物.

5)龍膽草酸鈣針晶不規(guī)則散在于薄壁細(xì)胞中或充塞于細(xì)胞一角.

6)青皮中果皮薄壁組織呈無色，細(xì)胞形狀不規(guī)則，有的細(xì)胞中可見到淡黃色無定形或類圓形橙皮甙結(jié)晶，結(jié)晶大小不一.

7)木賊的內(nèi)皮層細(xì)胞表面觀呈長(zhǎng)方形，壁微波狀彎曲，有光澤.

8)茺蔚子內(nèi)果皮厚壁細(xì)胞呈黃棕色.底面觀(內(nèi)表面觀)胞間層不易被觀察到，紋孔排列疏松，存在不規(guī)則形狀裂紋，胞腔形似類圓形，多見方晶.

9)決明子的種皮柵狀細(xì)胞，無色，橫斷面觀細(xì)胞1列，呈長(zhǎng)方形.

10)密蒙花極易見其特征結(jié)構(gòu)星狀毛，體部具有2細(xì)胞，基部細(xì)胞并列存在，每個(gè)細(xì)胞具有2分叉，分叉長(zhǎng)度相當(dāng)或一長(zhǎng)一短，先端逐漸尖銳.石決明不規(guī)則團(tuán)塊暗灰色，不透明.

11)夜明砂昆蟲的觸角顯微可見.動(dòng)物類的顯微特征可鑒別動(dòng)物類用藥羊肝的存在.(見圖1～3)

圖1 表1中不同廠家的黃連羊肝丸樣品

圖2 表1中不同廠家的黃連羊肝丸樣品

圖3 表1中不同廠家的黃連羊肝丸樣品

1.3.2 專屬性特征

黃連、黃芩、黃柏、龍膽中均含有石細(xì)胞.黃連石細(xì)胞大多呈類圓形，直徑25～64 μm，紋孔小，孔溝細(xì)；黃芩石細(xì)胞直徑24～48 μm，孔溝有分叉；黃柏石細(xì)胞大多呈分枝狀，形大；龍膽石細(xì)胞少見，紋孔裂縫狀，有的胞腔內(nèi)含細(xì)小針晶.因此，可以根據(jù)所含石細(xì)胞特點(diǎn)的不同進(jìn)行黃連的鑒別.黃連與黃芩中均含有韌皮纖維.黃連韌皮纖維較粗短，長(zhǎng)136～185 μm，直徑27～37 μm.黃芩韌皮纖維長(zhǎng)51～200 μm，直徑9～33 μm.通過顯微測(cè)量法可鑒別黃芩.

1.3.3 結(jié)果

對(duì)黃連羊肝丸處方進(jìn)行分析，其組成藥物共14種，避開交叉，排除干擾，在不同廠家的黃連羊肝丸粉末所制的片子中，均可見各藥材的主要顯微特征.說明已購(gòu)買的各廠家黃連羊肝丸中藥味無缺失現(xiàn)象，表明其質(zhì)量在顯微鑒別結(jié)果上無明顯差別，若要進(jìn)一步進(jìn)行質(zhì)量控制，可以結(jié)合理化鑒別和含量測(cè)定的方法.

2 討 論

以往文獻(xiàn)鑒定黃連羊肝丸的質(zhì)量，通常只對(duì)黃連和黃芩的主要成分小檗堿及黃芩苷進(jìn)行鑒別和含量測(cè)定，此法只能確定中成藥中某味或某幾味藥的指標(biāo)性成分的含量高低，不能全面的檢測(cè)處方中的所有原料藥的有無，尤其對(duì)于沒有標(biāo)準(zhǔn)品的中藥，檢測(cè)難度更大.本文采用顯微鑒別方法，具有操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn)，可以快速、簡(jiǎn)便的對(duì)中成藥進(jìn)行質(zhì)量控制，能夠測(cè)定制劑處方中原料藥組成的真實(shí)性，是中成藥鑒定中的主要手段之一.

中成藥的顯微鑒別是在粉末藥材顯微鑒定的基礎(chǔ)上，通過排比、分析，選定中成藥原料藥材中可資鑒別的顯微特征作為檢定的依據(jù)，具有一定專屬性，且制劑的原料藥材均為整體和批量磨粉入藥，避免了個(gè)體差異和取材部位不同的影響，保證了顯微特征檢出的重現(xiàn)性.本研究所用的顯微鑒別法，可以宏觀全面的把握中成藥的質(zhì)量，完善了中藥制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步較全面地補(bǔ)充了藥典中對(duì)于中成藥顯微鑒別的內(nèi)容，為今后中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定起了示范性作用.