改良高效液相色譜法 快速測定豇豆中滅蠅胺

周楊 陳悅

滅蠅胺，又名環(huán)丙氨嗪，是一種高效、低毒的生態(tài)農(nóng)藥，針對雙翅目昆蟲有非常強(qiáng)的選擇性。該藥具有觸殺和胃毒作用，內(nèi)吸傳導(dǎo)性強(qiáng)、持效期長，但作用速度較慢。目前，《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)？食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中規(guī)定，測定豇豆中滅蠅胺殘留限量值不得超過0.5mg/kg，每日允許攝入量0.06mg/kg？bw。為保障食品安全，需要不斷探尋更優(yōu)質(zhì)、便捷的檢測方法。

一、實驗部分

1.儀器、試劑和標(biāo)準(zhǔn)品。儀器：電子天平、高效液相色譜儀。試劑：甲醇、乙腈、乙酸銨、鹽酸、氨水。標(biāo)準(zhǔn)品：見表1。

2.分析步驟。（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。①標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取環(huán)丙氨嗪標(biāo)準(zhǔn)品0.100g（精確至0.0001g），用甲醇水（體積比為1： 1）溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中并定容至刻度，貯存于-20℃至-16℃冰柜中備用。②標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：吸取一定體積的環(huán)丙氨嗪標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用水將其稀釋成標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

（2）試樣制備。稱取試樣10g（精確至0.01g）于100mL燒杯中，加入25mL乙酸銨-乙腈溶液（0.05mol/L，乙酸鈉：乙腈=1： 5），用均質(zhì)器混勻，靜置10min，超聲提取20min。過濾，再用約15mL乙酸銨-乙腈溶液（0.05mol/L，乙酸鈉：乙腈=1： 5）提取，重復(fù)上述操作，收集流出液，濾入50mL具塞比色管中，并用乙酸銨-乙腈（0.05mol/L，乙酸鈉：乙腈=1：5）溶液定容。蓋上塞子，將濾液混合均勻。

準(zhǔn)確吸取5mL提取液至圓底燒瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上40℃濃縮至近干，加入0.1mol/L鹽酸溶液約2mL，待凈化。

用甲醇5mL、水5mL活化SCX萃取柱，將所得待測液轉(zhuǎn)移至SCX柱中。用-5mL？的0.1mol/L鹽酸溶液將圓底燒瓶中的殘余物洗入SCX柱中，并重復(fù)一次。然后用水5mL、甲醇5mL淋洗SCX柱，棄去所有流出液并將小柱抽干。

用5mL氨水-甲醇溶液（氨水：甲醇=5：95）洗脫SCX柱，重復(fù)上述操作兩遍，收集洗脫液于圓底燒瓶中。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上40℃濃縮至近干，氮氣吹干后用1.00mL乙腈-水（30：70）溶液溶解蒸殘物，過膜，待測。

（3）儀器參數(shù)條件。色譜柱：ZORBAX？ SB-C18？4.6×150mm；流動相：甲醇：水=1：1；流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；檢測器：紫外檢測器。

（4）以豇豆為試驗對象進(jìn)行研究。依據(jù)NY/T？ 1725-2009，對改變液相條件、色譜柱條件得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。通過對樣品本身及實驗全過程進(jìn)行比較，分析豇豆中滅蠅胺殘留量的測定思路。對方法中以下幾點進(jìn)行改良：①NH2不銹鋼柱改成C18柱；②流動相由乙腈+水（體積比，97+3）改為甲醇+水（體積比，50+50）；③標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇+水（體積比，50+50）溶解。

二、結(jié)果與討論

1.實驗數(shù)據(jù)分析。以環(huán)丙氨嗪的濃度（ng/mL）作為橫坐標(biāo)，響應(yīng)度（峰面積）作為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析（如表2所示）。

2.加標(biāo)回收試驗。將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液配置成20ng/mL、200ng/mL、600ng/mL工作液。稱取10g陰性樣品，分別加入工作液1mL，同時進(jìn)行低、中、高三個水平加標(biāo)回收，每個水平測定3次，同時取20g空白基質(zhì)同步處理，作為空白對照。表3為三個水平下，加標(biāo)回收試驗（n=6）的回收率的具體結(jié)果。

三、討論

NH2不銹鋼柱可以同時用于正相條件和反相條件，但是正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的，如果保存溶劑和使用的流動相極性不同的話，需要用異丙醇過渡。并且NH2不銹鋼使用壽命較短，易損壞，將NH2不銹鋼柱改成C18柱，維護(hù)較為便利，且通用性佳，這一改變大大節(jié)省了實驗成本。

標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇水（體積比為1：1）進(jìn)行稀釋，可降低溶劑效應(yīng)，確保目標(biāo)峰不被溶劑峰影響，增加準(zhǔn)確性。

對比230nm、220nm和215nm波長下相同小瓶的數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，在215nm波長下，環(huán)丙氨嗪的響應(yīng)度最佳、靈敏度最好，根據(jù)光譜圖可以看出最大吸收峰在206nm處，與數(shù)據(jù)結(jié)果相吻合。

流動相由乙腈+水（體積比，97+3）改為甲醇+水（體積比，50+50），降低溶劑效應(yīng)，節(jié)約實驗成本。

綜上，通過數(shù)據(jù)比對發(fā)現(xiàn)改進(jìn)后的方法穩(wěn)定性好，可滿足檢測需求。