納米絲素纖維敷料促進大鼠深度燒傷創(chuàng)面愈合的研究

劉寧 陳華 劉海華 沙娜

[摘要] 目的 分析納米絲素纖維敷料促進大鼠深度燒傷創(chuàng)面愈合效果。方法 選取40只SD雄性大鼠建立深Ⅱ度燒傷模型，建模成功后將大鼠隨機分為模型組（n=20）和觀察組（n=20）。模型組燙傷后予以常規(guī)紗布覆蓋創(chuàng)面處理，觀察組采用納米絲素纖維敷料覆蓋創(chuàng)面處理。觀察兩組大鼠敷藥后1、2、3周后的創(chuàng)面愈合率、新生毛細血管數(shù)、成纖維細胞計數(shù)。 結(jié)果 觀察組大鼠敷藥1周后的創(chuàng)面愈合面積，新生毛細血管數(shù)，成纖維細胞計數(shù)要明顯優(yōu)于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。觀察組大鼠敷藥2周后創(chuàng)面愈合面積，新生毛細血管數(shù)和成纖維細胞計數(shù)均明顯優(yōu)于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。觀察組大鼠敷藥3周后創(chuàng)面愈合面積明顯高于模型組，新生毛細血管數(shù)和成纖維細胞計數(shù)低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 納米絲素纖維敷料能明顯促進大面積深度燒傷創(chuàng)面愈合，促進新生毛細血管和成纖維細胞再生，縮短深度燒傷的愈合時間。

[關(guān)鍵詞] 敷料;深度燒傷;創(chuàng)面愈合

[中圖分類號] R94;R96? ? ? ? ? [文獻標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-0742（2020）08（b）-0045-03

Nano-silk Fibroin Dressing Promotes Deep Burn Wound Healing in Rats

LIU Ning， CHEN Hua， LIU Hai-hua， SHA Na

Emergency Department， Shenzhen People's Hospital （Second Clinical School of Jinan University， First Affiliated Hospital of Southern University of Science and Technology）， Shenzhen， Guangdong Province， 518020 China

[Abstract] Objective To analyze the effect of nano-silk fibroin dressing on promoting deep burn wound healing in rats. Methods 40 SD male rats were selected to establish a deep second degree burn model. After successful modeling， the rats were randomly divided into a model group （n=20） and an observation group （n=20）. The model group was treated with conventional gauze to cover the wound after scald， and the observation group was treated with nano silk fibroin dressing to cover the wound. Observe the wound healing rate， the number of new capillaries， and the count of fibroblasts in the two groups of rats after 1， 2， and 3 weeks after application. Results In the observation group， the wound healing area， the number of new capillaries， and the fibroblast count were significantly better than the model group，the difference was statistically significant（P<0.05）. In the observation group， the wound healing area， the number of new capillaries and the fibroblast count were significantly better than the model group，the difference was statistically significant（P<0.05）. The wound healing area of the observation group was significantly higher than that of the model group after 3 weeks of dressing， and the number of new capillaries and fibroblast count were lower than that of the model group，the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion Nano-silk fibroin dressing can obviously promote the healing of large area deep burn wounds， promote the regeneration of new capillaries and fibroblasts， and shorten the healing time of deep burns.

[Key words] Dressing; Deep burn; Wound healing

皮膚是人體裸露在外最多的器官，是人體最大的天然屏障，能保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，防止細菌入侵，是人體抗菌、抗感染的基本保障，同時皮膚也承擔(dān)著人體整潔美觀的作用，影響著人們的生活、工作、學(xué)習(xí)、社交等方方面面[1-2]。對于深Ⅱ度燒傷以上的嚴(yán)重傷害，皮膚本身的自愈能力常常無能為力，因為深度燒傷修復(fù)常常涉及炎癥反應(yīng)、細胞增殖、遷移、轉(zhuǎn)分化及血管生成胞外基質(zhì)沉積重塑等多個方面的共同協(xié)同作用[3]。目前臨床常采用的治療方式是自體皮膚移植，自體皮片移植排異反應(yīng)小、愈合率高，但是對于燒傷面積超過50%的大面積燒傷患者，自體皮源顯得嚴(yán)重不足，且需要二次手術(shù)，易造成供皮區(qū)創(chuàng)傷、感染等不良后果，導(dǎo)致燒傷的治療受限[4]。近年來各種新型敷料層出不窮，這些敷料通常是能夠保持創(chuàng)面濕潤，防止摩擦和感染，提供良好愈合環(huán)境的覆蓋物。而該文通過研究分析納米絲素纖維敷料在大鼠深度燒傷創(chuàng)面愈合中的作用，以期為深度燒傷的治療提供理論基礎(chǔ)和實驗數(shù)據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

購買SPF級SD雄性大鼠40只，大鼠周齡為8周齡，體重 200～250 g，平均（212.32±26.27）g，大鼠均購自廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心，大鼠購回后放入干凈的籠子，室溫控制在20℃左右，相對濕度控制在 60%左右，自由進食標(biāo)準(zhǔn)動物飼料和飲用水，保持飼養(yǎng)環(huán)境干凈衛(wèi)生，所有大鼠均經(jīng)1周適應(yīng)性飼養(yǎng)觀察健康狀況良好后用于實驗。

1.2? 燒傷敷料制備

運用靜電紡絲設(shè)備以及技術(shù)制作納米絲素纖維敷料，通過在碳酸鈉溶液中煮沸及在去離子水中清洗，從家蠶絲線原料中提取制得高純度膠狀絲膠蛋白，再將絲膠蛋白溶解透析除鹽，離心除雜;之后聚環(huán)氧乙烷（PEO）與絲素蛋白溶液按特定比例混合，使其經(jīng)過甲醇處理引發(fā)β-折疊構(gòu)象轉(zhuǎn)化，運用靜電紡絲技術(shù)（electrospun）將處理后的混合液注入連接靜電紡絲機噴射頭的注射器中，以恒定流量噴向緩慢旋轉(zhuǎn)的鼓形收集器。

1.3? 建模和分組方法

取經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)的大鼠禁食12 h， 消毒皮膚， 背部凈毛，每只大鼠于腹腔內(nèi)注射2.5%戊巴比妥鈉，劑量按35 mg/kg，采用彎頭剪刀剪毛，用水濕潤，按照硫化鋇2份、滑石粉2份、肥皂粉1份的比例配制硫化鋇脫毛劑后涂于大鼠身上，數(shù)分鐘后輕輕刮去，用清水擦凈。脫毛后第2天制作深Ⅱ度燙傷模型，給大鼠腹腔注射2.5%戊巴比妥鈉35 mg/kg麻醉，麻醉后仰臥位四肢固定，充分暴露裸露的背部皮膚，然后用20 mL注射器管置于背部皮膚上，保持密閉，加注95℃熱水，15 s后立即撤走，造成一個短直徑2 cm的圓形燙傷創(chuàng)面，燙傷后用干紗布揩干水漬，立即在腹腔內(nèi)注射5 mL乳酸林格氏液，分籠飼養(yǎng)。建模成功后將大鼠隨機分為模型組（n=20），觀察組（n=20）。

1.4? 燒傷處理辦法及觀察指標(biāo)

模型組燙傷后予以常規(guī)紗布覆蓋創(chuàng)面處理，觀察組采用納米絲素纖維敷料處理創(chuàng)面。比較兩組大鼠敷藥后1、2、3周后，光鏡下觀察修復(fù)后組織變化及血管新生情況，每個標(biāo)本在創(chuàng)面中心及創(chuàng)緣四周選擇5個高倍視野，計數(shù)肉芽組織中成纖維細胞數(shù)及新生毛細血管數(shù)，并求其均值。同時觀察兩組大鼠敷藥后1、2、3周后的創(chuàng)面愈合率，燙傷面積的計算應(yīng)用Meehs公式計算大鼠的體表面積（Acm2）=K×W2/3，W體重（g），K=10。燙傷部位體表面積即橢園形面積（B）= π×r1×r2 cm （r1為短軸半徑，r2為長軸半徑）。實際的燙傷面積 =B/A。按照損傷剩余面積計算創(chuàng)面愈合率=（損傷總面積-創(chuàng)面剩余面積）/總面積×100%。

1.5? 統(tǒng)計方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料用（x±s）表示，進行t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 兩組大鼠敷藥后的1、2、3周后的創(chuàng)面愈合面積比較

觀察組大鼠敷藥1、2、3周后創(chuàng)面愈合率均明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2? 兩組大鼠敷藥后的1、2、3周后的新生毛細血管數(shù)

觀察組大鼠敷藥1周以及2周后的新生毛細血管數(shù)要明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），觀察組大鼠敷藥后3周后新生毛細血管數(shù)明顯低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3? 兩組大鼠敷藥后的1、2、3周后的成纖維細胞計數(shù)

觀察組大鼠敷藥1、2周后的成纖維細胞計數(shù)要明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），觀察組大鼠敷藥后3周后成纖維細胞計數(shù)明顯低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表3。

3? 討論

大面積深度燒傷易造成患者感染、休克、內(nèi)臟損傷、殘疾和長期反復(fù)住院等嚴(yán)重后果，除了給患者帶來巨大痛苦外，給家庭和社會帶來長期巨大經(jīng)濟負(fù)擔(dān)[5-6]。燒傷使維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和阻止細菌入侵的皮膚、黏膜屏障功能遭受破壞，加之大量壞死組織液化適于細菌繁殖，體液和營養(yǎng)物質(zhì)喪失導(dǎo)致機體抵抗力和創(chuàng)面修復(fù)能力顯著降低，若無法及時有效的醫(yī)治容易造成局部和全身性感染，引發(fā)各種嚴(yán)重并發(fā)癥和社會問題，因而尋求有效實惠的深度燒傷治療方法極其必要[7]。因此，該研究使用納米絲素纖維敷料進行燒傷干預(yù)，通過實驗對比分析納米絲素纖維敷料促進鼠大面積深度燒傷創(chuàng)面愈合效果。

該研究顯示，使用納米絲素纖維敷料的大鼠敷藥在整個創(chuàng)面愈合過程中創(chuàng)面愈合率要明顯高于自然愈合的大鼠。觀察組大鼠敷藥1周后的創(chuàng)面愈合面積、新生毛細血管數(shù)、成纖維細胞計數(shù)要明顯優(yōu)于模型組，提示使用敷料后效果明顯優(yōu)于自然愈合。隨著愈合時間至敷藥后2周，觀察組大鼠敷藥后創(chuàng)面愈合面積、新生毛細血管數(shù)和成纖維細胞計數(shù)均明顯優(yōu)于模型組，幾乎愈合，隨著觀察的深入，兩組敷藥3周后，觀察組大鼠敷藥后創(chuàng)面愈合面積明顯高于模型組，新生毛細血管數(shù)和成纖維細胞計數(shù)低于模型組，提示創(chuàng)面基本愈合，該結(jié)果還提示了納米絲素纖維敷料能夠讓燒傷創(chuàng)面在2周左右愈合，毛細血管和成纖維細胞盡快完成修復(fù)，而自然愈合的恢復(fù)速度稍慢。創(chuàng)面的愈合是細胞分裂、組織重建的過程，其中包括細胞的排列、活性、粘附、分化、遷移及合成細胞外基質(zhì)等行為，同時一些新型敷料具有很好的抑菌能力，在創(chuàng)面愈合中能有效地減少皮膚的炎癥反應(yīng)，幫助皮膚盡快愈合[8-9]，而納米絲素纖維敷料為細胞的分化生長提供了適宜的環(huán)境，可以幫助燒傷創(chuàng)面盡快愈合。這極大地拓寬了納米絲素纖維敷料應(yīng)用范圍，為皮膚燒傷創(chuàng)面的治療提供新的可能，其具體分子機制需進一步實驗探求。

綜上所述，納米絲素纖維敷料能明顯促進大面積深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面愈合，促進新生毛細血管和成纖維細胞再生，縮短深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面的愈合時間。

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（收稿日期：2020-05-16）