祛濕通絡(luò)方對(duì)肺炎支原體感染的RAW264.7細(xì)胞 TNF-α、IL-6表達(dá)的影響*

李 娜 ，于光志 ，張葆青 ，王 曉

（1.濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒科，濟(jì)寧 272029；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院兒科，濟(jì)南 250014）

肺炎支原體肺炎（MPP）是兒童社區(qū)獲得性肺炎的常見類型之一，部分患兒在經(jīng)過正規(guī)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療1周或以上，仍見持續(xù)發(fā)熱、臨床癥狀或影像學(xué)表現(xiàn)加重，稱為難治性肺炎支原體肺炎（RMPP）[1-2]。RMPP與MPP相比，具有對(duì)常規(guī)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療效果差、病情進(jìn)展快、易產(chǎn)生嚴(yán)重并發(fā)癥等特點(diǎn)，嚴(yán)重危害患兒健康。

目前RMPP的發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，可能與大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥、免疫應(yīng)答失調(diào)、合并感染、過度的炎癥反應(yīng)及治療延遲等有關(guān)[3]。西醫(yī)對(duì)于RMPP的治療主要為在常規(guī)阿奇霉素治療基礎(chǔ)上加用糖皮質(zhì)激素和免疫球蛋白，但目前尚無規(guī)范的療程與劑量，且無法確立其獨(dú)立療效，并有導(dǎo)致免疫抑制等風(fēng)險(xiǎn)。近年來，中醫(yī)藥對(duì)于MPP及RMPP的臨床研究日益深入，其中“祛濕通絡(luò)方”是導(dǎo)師張葆青教授根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)，以“甘露消毒丹”為主方化裁而成的經(jīng)驗(yàn)方，臨床取得了良好的治療效果。因此，本研究對(duì)于RMPP的發(fā)病機(jī)制及祛濕通絡(luò)方對(duì)本病的作用機(jī)制進(jìn)行初步探索。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠，體質(zhì)量200～220 g，雄性，健康，清潔級(jí)，購買于山東百朋生物科技有限公司，動(dòng)物合格證編號(hào)：SCXK（魯）20140007。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于山東省疾病預(yù)防控制中心SPF級(jí)的動(dòng)物房中，環(huán)境溫度18～22℃，濕度40%～70%，自然光線照射，給予普通飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)食及飲水，避免噪音及其他干擾。大鼠飼料及墊料由山東魯抗集團(tuán)提供。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，每日上午電子秤稱取質(zhì)量，記錄每只大鼠體質(zhì)量。活動(dòng)、二便等均未見異常即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 細(xì)胞株及菌株 RAW264.7細(xì)胞株，購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院。MP標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC-15531），購自上海寶錄生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物 祛濕通絡(luò)方：江陰天江中藥免煎顆粒，購自山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，組成：黃芩12 g（批號(hào)：1706015），黃連 6 g（批號(hào)：18050571），虎杖12 g（批號(hào)：18071221），藿香 12 g（批號(hào)：18032561），桃仁 9 g（批號(hào)：1702029），茵陳 15 g（批號(hào)：18071081），蘆根 30 g（批號(hào)：17121121），石菖蒲 12 g（批號(hào)：18041591），甘草 6 g（批號(hào)：1802009）。阿奇霉素分散片（君潔）：魯南貝特制藥有限公司，批號(hào)：38180501，0.25 g/片。

1.4 試劑 南美特級(jí)胎牛血清（LONSERA S711-001S），1 M HePes（Solarbio H1095-100，100 mL），臺(tái)盼藍(lán)染色液（0.4%，Solarbio C0040-50，50 mL），苯酚紅（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20171026），二甲基亞砜（DMSO，Solarbio D8371-50，50 mL，批號(hào)：1213C0340），支原體肉湯（PPLO肉湯，海博HB8475，批號(hào)：20170427），支原體瓊脂培養(yǎng)基（海博HB7025-3，250 g，批號(hào)：201803028），DMEM 高糖培養(yǎng)液（Corning10-013-CVR，500mL，批號(hào)：22517004），腫瘤壞死因子-α（TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（華美 CSB-E04741m，96 T，批號(hào)：U07019527），白細(xì)胞介素-6（IL-6）ELISA試劑盒（華美CSBE04594m，96 T，批號(hào)：U02018095）。

1.5 主要儀器 低溫冰箱Forma Model 702（美國Thermo公司），常溫、低溫高速離心機(jī)（德國Eppendorf公司），Infinite M200酶標(biāo)儀（瑞士Tecon公司），DMI 4000B熒光倒置顯微鏡（德國Leica公司），超凈工作臺(tái)（蘇州凈化公司），二氧化碳（CO2）細(xì)胞培養(yǎng)箱（美國 Thereto fisher公司），移液器（德國Eppendorf公司），細(xì)胞計(jì)數(shù)板（Watson 177-112C）。

2 方法

2.1 RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng) 待細(xì)胞長滿細(xì)胞瓶底部 80%時(shí)，以 1∶3傳代，置于 37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，收集對(duì)數(shù)增長期細(xì)胞備用。細(xì)胞存活率檢測(cè)（Trypan blue染色）：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)胞（死細(xì)胞呈藍(lán)色，活細(xì)胞拒染）。計(jì)數(shù)時(shí)，只計(jì)上線與右線的細(xì)胞（或只計(jì)下線與左線的細(xì)胞）。細(xì)胞存活率＝活細(xì)胞總數(shù)/（活細(xì)胞總數(shù)＋死細(xì)胞總數(shù)）×100%。細(xì)胞存活率≥96%。

2.2 肺炎支原體（MP）培養(yǎng) 將MP菌體接種于PPLO固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基中對(duì)照培養(yǎng)，置于5% CO2、37℃恒溫箱培養(yǎng)1～2周。CCU濃度測(cè)定步驟：取11支無菌小試管，按1～10編號(hào)，取PPLO肉湯完全培養(yǎng)基1.8 mL分別裝入試管。取200 μL處于對(duì)數(shù)生長期的菌種加入1號(hào)試管中，依次按1∶10遞減稀釋。將所有試管加蓋硬膠塞并用封口膜封口，于5% CO2、37℃恒溫箱中培養(yǎng)，每日觀察顏色有無變化以及液體有無渾濁改變。菌液發(fā)生顏色改變的最高稀釋度為顏色改變單位（留取濃度為106～107CCU/mL的菌液備用）。

2.3 含藥血清的制備 40只SD大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為空白對(duì)照組、中藥（低、中、高劑量）組、阿奇霉素組。祛濕通絡(luò)方免煎顆粒濃縮至2g/mL，給藥劑量參考徐叔云《藥物試驗(yàn)方法學(xué)》（第3版）：按20 kg小兒用量為中劑量折算，換算成大鼠的劑量為：人的臨床劑量×（鼠的劑量折算系數(shù)÷人的劑量折算系數(shù)）=人的臨床劑量×（0.71÷0.11），低劑量為0.5倍給藥，高劑量2倍給藥。中藥低、中、高劑量組大鼠灌胃3次/d，空白對(duì)照組和阿奇霉素組灌胃1次/d，連灌7 d，末次灌胃后1 h，均進(jìn)行心尖采血。將裝有大鼠血液的促凝管靜置2 h，無菌條件下用離心機(jī)離心（離心半徑 12 cm，3 000 r/min，15 min）分離血清。用0.22 μL的濾器分裝、標(biāo)記在1.5mLEP管中，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4 細(xì)胞分組及給藥 采用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)設(shè)置空白對(duì)照組、模型組、中藥低、中、高劑量組和阿奇霉素組，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。1）空白對(duì)照組：DMEM完全培養(yǎng)液 100 μL+空白含藥血清 100 μL。2）模型組：MP 菌液 100 μL+空白含藥血清 100 μL。3）中藥低劑量組：MP菌液100 μL+中藥低劑量含藥血清100 μL。4）中藥中劑量組：MP 菌液 100 μL+中藥中劑量含藥血清100 μL。5）中藥高劑量組：MP菌液100 μL+中藥高劑量含藥血清 100 μL。6）阿奇霉素組：MP菌液100 μL+阿奇霉素含藥血清100 μL。模型組和各給藥組分別加入MP菌液100 μL，使其最終濃度為 10 MOI（MP/細(xì)胞）細(xì)胞計(jì)數(shù)[4]，空白對(duì)照組加入等體積DMEM完全培養(yǎng)液，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h后吸出培養(yǎng)液，分別按上述要求加入含藥血清100 μL，培養(yǎng) 4、8、16、24 h 后收集細(xì)胞上清液，-80 ℃保存，備測(cè)。

2.5 TNF-α、IL-6檢測(cè) 采取ELISA方法檢測(cè)，操作按試劑盒說明書進(jìn)行。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)均重復(fù)至少3次，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 RAW264.7細(xì)胞24 h形態(tài)學(xué)表現(xiàn)（20×）

圖2 MP誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞24 h形態(tài)學(xué)表現(xiàn)（20×）

3 結(jié)果

3.1 MP形態(tài) MP生長緩慢，培養(yǎng)10 d后，菌落中心致密隆起，深入瓊脂，周邊較薄，形成“荷包蛋樣”菌落。生化鑒定結(jié)果為培養(yǎng)物能發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵尿素和精氨酸，符合MP的特性[5]。

3.2 MP誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn) 鏡下發(fā)現(xiàn)，空白對(duì)照組細(xì)胞小而圓，視野下輪廓清晰，有光澤，如葡萄串珠狀。細(xì)胞在MP刺激后，形狀變大，光澤度減弱，伸出偽足，多為不規(guī)則形態(tài)或梭形。見圖1及圖2。

3.3 祛濕通絡(luò)方含藥血清對(duì)MP感染的RAW264.7細(xì)胞TNF-α表達(dá)的影響 結(jié)果顯示，模型組、各給藥組與空白對(duì)照組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明在MP的感染下，各組RAW264.7細(xì)胞TNF-α的分泌均顯著上升；各給藥組與模型組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表示各給藥組均對(duì)TNF-α具有不同程度的下調(diào)作用，其中阿奇霉素組對(duì)TNF-α的調(diào)節(jié)作用最優(yōu)，中藥含藥血清各組呈現(xiàn)出劑量依賴性。見表1。

3.4 祛濕通絡(luò)方含藥血清對(duì)MP感染RAW264.7細(xì)胞IL-6表達(dá)的影響 模型組及各給藥組與空白對(duì)照組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明在MP的感染下，各組RAW264.7細(xì)胞IL-6的分泌顯著上升；與模型組比較，中藥低劑量組在干預(yù)4、8、16、24 h 時(shí)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），其余各組均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），表明阿奇霉素組對(duì)IL-6的調(diào)節(jié)作用最優(yōu)，除中藥低劑量組外，中藥中、高劑量組對(duì)IL-6均具有不同程度的下調(diào)作用。見表2。

4 討論

MP是兒童社區(qū)獲得性呼吸道感染的重要病原，可引起以間質(zhì)病變?yōu)橹鞯募毙苑尾垦装Y，同時(shí)也是引起全身性病變（如腦炎、心肌炎、肝炎、關(guān)節(jié)炎、凝血功能障礙、免疫紊亂等肺外組織或器官病變）的重要致病菌之一。由于其結(jié)構(gòu)缺乏細(xì)胞壁，對(duì)作用于細(xì)胞壁的抗生素藥物（如青霉素與頭孢菌素類）固有耐藥，主要選用大環(huán)內(nèi)酯類藥物（紅霉素、阿奇霉素等）治療，但近年來發(fā)現(xiàn)耐藥率明顯增加，治療效果欠佳。而且由于抗生素耐藥、過強(qiáng)的免疫炎癥反應(yīng)等多種原因，少數(shù)患者遷延不愈，易發(fā)展成為RMPP。

表1 含藥血清對(duì)MP感染RAW264.7細(xì)胞的TNF-α表達(dá)影響（±s）pg/mL

表1 含藥血清對(duì)MP感染RAW264.7細(xì)胞的TNF-α表達(dá)影響（±s）pg/mL

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別 n 4 h 8 h 1 6 h 2 4 h空白對(duì)照組 3 8 7.5 6 0± 2.8 0 0 8 8.2 3 5± 2.4 4 8 8 9.8 6 5± 2.5 3 2 8 8.6 3 5±2.3 5 7模型組 3 3 2 6.6 8 2±2 4.4 7 2* 3 0 1.5 4 0±1 1.0 7 8* 2 8 6.3 5 9±1 0.4 0 0* 2 7 5.5 0 5±4.9 5 0*中藥低劑量組 3 2 5 0.3 8 2± 8.5 8 1*# 2 5 0.6 2 0±1 7.1 7 3*# 2 4 6.5 1 6±1 9.3 8 3*# 2 3 2.8 8 2±7.0 2 6*#中藥中劑量組 3 2 2 2.1 5 0±1 5.0 7 6*# 2 3 6.2 2 5± 4.8 3 0*# 2 3 8.5 6 2± 8.1 3 5*# 2 3 1.7 3 8±6.3 0 8*#中藥高劑量組 3 1 7 8.7 7 7± 6.1 1 4*# 1 8 0.9 1 5± 3.0 9 0*# 1 8 3.1 4 9± 6.2 4 9*# 1 7 2.3 5 9±2.9 6 1*#阿奇霉素組 3 1 1 3.5 0 2± 8.4 4 8*# 1 0 4.9 3 5±1 1.9 1 5*# 1 0 4.7 2 3± 3.9 6 8*# 9 9.2 1 4±3.8 2 3*#

表2 各組RAW264.7細(xì)胞IL-6表達(dá)水平（±s）ng/mL

表2 各組RAW264.7細(xì)胞IL-6表達(dá)水平（±s）ng/mL

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別 n 4 h 8 h 1 6 h 2 4 h空白對(duì)照組 3 8.2 2 0±0.3 3 0 7.4 2 8±0.1 0 1 6.7 4 4±0.2 0 4 6.4 7 3±0.5 4 3模型組 3 4 2.8 0 0±0.4 0 8* 4 0.8 1 9±0.3 2 7* 3 8.9 4 0±0.2 0 4* 3 8.6 1 4±0.5 7 4*中藥低劑量組 3 4 0.2 0 8±0.2 8 6* 3 8.3 9 6±0.2 9 8* 3 6.7 5 4±0.2 0 4* 3 6.4 6 5±0.5 7 3*中藥中劑量組 3 3 9.3 3 3±0.3 6 8*# 3 7.7 2 6±0.3 1 9*# 3 6.2 5 5±0.2 0 4*# 3 6.1 7 6±0.4 2 6*#中藥高劑量組 3 3 8.5 8 5±0.3 0 9*# 3 6.2 9 4±0.3 0 0*# 3 4.3 7 4±0.3 7 7*# 3 4.3 7 0±0.6 8 0*#阿奇霉素組 3 3 2.3 2 0±0.3 3 0*# 3 2.7 0 1±1.3 1 5*# 3 0.2 3 5±2.2 0 4*# 3 1.1 7 2±1.2 2 3*#

目前RMPP的治療主要以大環(huán)內(nèi)酯類抗生素為主，但其用藥時(shí)間長，不良反應(yīng)明顯，且耐藥性日趨嚴(yán)重，療效亦有所下降，因此探求有效的中醫(yī)藥制劑已成為廣泛關(guān)注的熱點(diǎn)。中醫(yī)學(xué)對(duì)RMPP的病因認(rèn)識(shí)大致分為內(nèi)、外因兩個(gè)方面，強(qiáng)調(diào)其發(fā)病與肺、脾兩臟關(guān)系密切。就其內(nèi)因而言，肺、脾功能失調(diào)，是發(fā)病的基礎(chǔ)。究其外因，多責(zé)之于外感六淫邪氣及非時(shí)之感，寒熱失調(diào)，邪犯肺衛(wèi)而發(fā)病。羅磐真認(rèn)為RMPP是由外邪犯肺，毒蘊(yùn)化熱，煉液為痰，痰阻氣機(jī)，肺氣上逆，則見咳喘氣急；邪正抗?fàn)?，相持未減，則高熱不退，強(qiáng)調(diào)邪氣外犯是其發(fā)病主因[6]。姚鳳莉根據(jù)“濕為陰邪，其性氤氳黏膩”，并結(jié)合RMPP纏綿難愈的特點(diǎn)，認(rèn)為RMPP屬于濕熱證范疇[7]。李新民認(rèn)為濕邪內(nèi)生、濕熱互結(jié)為重癥MP的病機(jī)關(guān)鍵，濕熱內(nèi)蘊(yùn)，肺氣郁閉，出現(xiàn)熱勢(shì)高、稽留難退的臨床特點(diǎn)[8]。李貴尤強(qiáng)調(diào)血瘀的重要性，認(rèn)為肺炎難愈之根本，多由病程日久，氣機(jī)被郁而出現(xiàn)血瘀之象，進(jìn)一步得出痰、瘀、閉、虛為RMPP的發(fā)病機(jī)制[9]。治療上馬融提出清熱解毒、活血化瘀、瀉下通腑3大治療大法[10]。姜之炎靈活運(yùn)用“通補(bǔ)肺絡(luò)法”，以益氣健脾、祛瘀消痰為主要治則[11]。李新民采取清上、暢中、滲下三焦同治，清熱、利濕、解毒三法并行[12]。王雪峰重視清肺解毒，配以活血化瘀法，提出應(yīng)注意中病即止，以防過用苦寒，損脾傷胃[13]。綜上，筆者認(rèn)為濕熱內(nèi)蘊(yùn)是RMPP的病理基礎(chǔ)，MPP患兒的發(fā)熱多表現(xiàn)為弛張熱，午后熱甚，發(fā)熱而不欲飲，面色如常而無紅赤，此為濕遏熱伏，郁蒸于內(nèi)而致。濕熱內(nèi)蘊(yùn)，氣機(jī)阻滯，可見脘腹脹悶；濕性纏綿黏滯，則汗出熱不解，口中黏膩，便溏不爽。痰、瘀、閉、虛為其病機(jī)關(guān)鍵，治療上應(yīng)清熱祛濕與化痰通絡(luò)相結(jié)合，則濕熱得解，痰瘀得消，病癥得除。

“祛濕通絡(luò)方”是以“甘露消毒丹”為主方，根據(jù)張葆青教授多年臨床經(jīng)驗(yàn)化裁而成?！案事断镜ぁ睘榍宕~天士所創(chuàng)，首載于《續(xù)名醫(yī)類案》，后由王孟英收入《溫?zé)峤?jīng)緯》，善利濕化濁、清熱解毒，主治濕溫初起，邪在氣分，濕熱并重證?！办顫裢ńj(luò)方”（組成：黃芩、黃連、虎杖、藿香、桃仁、茵陳、蘆根、石菖蒲、甘草）是由“甘露消毒丹”去滑石、川貝母、木通、白豆蔻、薄荷、連翹、射干，加桃仁、虎杖、黃連、蘆根組成。方中茵陳、黃芩、黃連、虎杖并用增強(qiáng)清利濕熱之功，蘆根清熱生津以防熱盛津耗，桃仁、虎杖活血通絡(luò)以調(diào)暢肺氣。在甘露消毒丹清熱、芳化、利濕的基礎(chǔ)上加上通絡(luò)之法，與RMPP的濕-毒-瘀互結(jié)的病理機(jī)制更加契合。諸藥合用，共奏清熱解毒、化痰祛濕、祛瘀通絡(luò)之效。

MP感染的免疫應(yīng)答包括機(jī)體的免疫清除、免疫紊亂、病原體的免疫逃逸，這些免疫機(jī)制異常均促進(jìn)了RMPP的發(fā)生。多項(xiàng)研究表明炎癥細(xì)胞因子參與了MP感染的免疫發(fā)病機(jī)制[14-15]。RMPP患兒存在高細(xì)胞因子血癥，過度產(chǎn)生的細(xì)胞因子TNF-α、IL-6等[16]通過與細(xì)胞膜上特異性受體結(jié)合而發(fā)揮作用，是造成患兒肺部損傷的重要原因。

TNF-α是由激活的單核-巨噬細(xì)胞合成和釋放，且具有廣泛生物學(xué)活性的炎性介質(zhì)，其生物學(xué)活性作用可根據(jù)其濃度高低而有所不同。在正常情況下，機(jī)體內(nèi)TNF-α的濃度較低，有抗腫瘤、抗感染、促進(jìn)B細(xì)胞增殖分化等多種生理功能，可調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，是機(jī)體免疫防護(hù)的重要介質(zhì)。當(dāng)TNF-α濃度過高時(shí)，反而會(huì)作為重要的炎癥遞質(zhì)介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的病理生理過程，能增加微血管壁的通透性，并刺激中性粒細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞表面黏附受體，趨化中性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞，啟動(dòng)炎癥反應(yīng)，介導(dǎo)感染引起的炎癥損害。MP感染亦可誘發(fā)TNF-α的產(chǎn)生，而增加的TNF-α還可刺激淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等產(chǎn)生其他細(xì)胞因子參與免疫炎癥反應(yīng)。研究表明[17]，RMPP患兒血清TNF-α水平明顯高于非RMPP。此外，RMPP患兒TNF-α水平明顯升高[18]，且與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[19]。

IL-6是機(jī)體T細(xì)胞經(jīng)過活化后分泌的一種重要免疫調(diào)節(jié)因子，也可被TNF-α誘導(dǎo)或多細(xì)胞生成。在機(jī)體免疫應(yīng)答初期，作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，可與TNF-α共同參與調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。IL-6作為一種促炎因子，是細(xì)胞因子家族中的核心成員。研究表明[20]，IL-6與過度免疫有關(guān)，可作為病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的評(píng)估指標(biāo)。饒鳴皋[21]發(fā)現(xiàn)RMPP患兒的IL-6水平明顯高于普通MPP組，認(rèn)為RMPP的病情演變極有可能與IL-6有關(guān)。史良俊等[22]指出在急性期和恢復(fù)期RMPP的IL-6水平均高于普通MPP組，提示RMPP患兒伴有肺組織細(xì)胞損傷，且在恢復(fù)期仍持續(xù)存在。提示IL-6在RMPP發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用，并與病情輕重密切相關(guān)，對(duì)RMPP的診斷和治療具有重要參考價(jià)值。

本研究結(jié)果顯示，阿奇霉素、祛濕通絡(luò)方均對(duì)MP誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞IL-6、TNF-α高表達(dá)具有下調(diào)作用，為目前中醫(yī)藥治療MPP提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但MP感染是多細(xì)胞因子共同參與的過程，其感染后細(xì)胞因子的表達(dá)也是一個(gè)復(fù)雜過程，并且體外細(xì)胞上細(xì)胞因子的表達(dá)與臨床上兒童MPP或RMPP仍有區(qū)別。由于炎癥反應(yīng)調(diào)控機(jī)制及中藥成分的復(fù)雜性，幾個(gè)炎癥反應(yīng)調(diào)控指標(biāo)的觀察尚不能確定祛濕通絡(luò)方的確切作用靶點(diǎn)及作用機(jī)制。因此，MP感染后IL-6、TNF-α如何在基因水平上表達(dá)以及祛濕通絡(luò)方如何在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的表達(dá)，需要進(jìn)一步研究。