腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞在口腔部鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及價值

周湘，杜寧，劉昕

口腔部的鱗狀細(xì)胞癌是臨床較為常見的一種頭頸部的惡性腫瘤，有較強(qiáng)的浸潤性［1-2］，極易發(fā)生血行轉(zhuǎn)移及粘膜下的擴(kuò)散等，預(yù)后不良。近年，關(guān)于免疫系統(tǒng)與腫瘤發(fā)病的相關(guān)性研究不斷進(jìn)展，惡性腫瘤的免疫治療法逐漸推廣［3-4］，研究發(fā)現(xiàn)腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞可將惡性腫瘤病人體內(nèi)的上述特異性物質(zhì)呈遞至T淋巴細(xì)胞，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖分化、誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T 細(xì)胞等生成，對惡性腫瘤的免疫耐受發(fā)揮調(diào)節(jié)作用并抑制癌細(xì)胞生長［5-6］，也有研究發(fā)現(xiàn)某些惡性腫瘤病人體內(nèi)腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞生成減少、未分化細(xì)胞較多、表達(dá)水平出現(xiàn)異常等［7］。本研究旨在探討口腔部鱗狀細(xì)胞癌病人癌組織中腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的表達(dá)及其價值，為該類惡性腫瘤免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制及免疫治療等提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2017 年6 月至2018 年6 月河北省兒童醫(yī)院收治的口腔部鱗狀細(xì)胞癌病人進(jìn)行研究，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合口腔部鱗狀細(xì)胞癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡范圍18～75 歲；本次入院前未進(jìn)行手術(shù)、放化療、分子生物學(xué)等治療；未使用免疫調(diào)節(jié)劑類藥物進(jìn)行治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他部位或臟器的惡性腫瘤；合并有嚴(yán)重的感染性疾病、免疫性疾病等；伴有心、肝、腎等多器官的功能障礙；本次治療為口腔部鱗狀細(xì)胞癌復(fù)發(fā)再次入院；研究過程中自動退出的。

根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，共納入50例口腔部鱗狀細(xì)胞癌病人作為本研究的觀察組，選取50 例同時期來我院進(jìn)行治療的口腔良性腫物病人作為本研究的對照組。本研究已通過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會的審議［倫審（2017）11號］，研究對象均簽署本次研究的知情同意書。比較兩組病人的性別、年齡及合并癥等一般資料，均差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 口腔部鱗狀細(xì)胞癌與口腔良性腫物病人各50例一般資料比較

1.2 方法入院后進(jìn)行腫瘤組織切除術(shù)治療，觀察組取部分腫瘤組織標(biāo)本，對照組取良性腫物組織標(biāo)本，行免疫組織化學(xué)染色，方法如下：用石蠟包埋標(biāo)本后進(jìn)行切片、脫蠟、孵育等，再經(jīng)蒸餾水沖洗后浸泡于PBS 溶液中，進(jìn)行抗原修復(fù)后添加一抗（白細(xì)胞抗原1a 單克隆抗體、白細(xì)胞抗原83單克隆抗體）置于37 ℃條件下孵育2 h，再經(jīng)PBS溶液沖洗后添加二抗，再次沖洗后滴入工作液置于37 ℃條件下孵育20 min，最后用PBS 溶液沖洗后加入顯色劑，經(jīng)過10 min 顯色反應(yīng)后再次沖洗、復(fù)染，最后將切片脫水，透明后封片，在顯微鏡400 倍鏡頭下隨機(jī)選取五個視野對腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，取均值作為該組織的腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞密度計數(shù)［8］。另取兩組病人的部分標(biāo)本，在RPMI1640 培養(yǎng)基中經(jīng)過消化等形成細(xì)胞懸液，使用流式細(xì)胞儀（型號為Epics XL，美國Beckman coulter 公司生產(chǎn)）計數(shù)腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的MHC-Ⅱ陽性細(xì)胞比例和CD54 陽性細(xì)胞比例。

1.3 觀察指標(biāo)觀察組病人腫瘤的TNM 分期、腫瘤組織直徑、分化程度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等；計數(shù)腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞陽性表達(dá)情況、MHC-Ⅱ陽性細(xì)胞比例和CD54陽性細(xì)胞比例。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件對本研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計處理分析，計量資料采用±s表示，采用成組t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組腫瘤組織中腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的表達(dá)水平、表型與病人臨床病理特征的相關(guān)性觀察組腫瘤TNM 分期為Ⅲ期的腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞密度、MHC-Ⅱ陽性腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞比例及CD54陽性腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞比例均明顯低于Ⅰ/Ⅱ期（P＜0.05）；腫瘤組織的最大直徑≥5 cm的腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞密度、MHC-Ⅱ陽性腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞比例及CD54陽性腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞比例均明顯低于腫瘤組織直徑＜5 cm 的病人（P＜0.05）；觀察組腫瘤分化程度不同的病人上述指標(biāo)相比均差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 口腔部鱗狀細(xì)胞癌50例腫瘤組織中腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的表達(dá)水平、表型與病人臨床病理特征的相關(guān)性比較/±s

表2 口腔部鱗狀細(xì)胞癌50例腫瘤組織中腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的表達(dá)水平、表型與病人臨床病理特征的相關(guān)性比較/±s

類別TNM 分期Ⅰ/Ⅱ期Ⅲ期t 值P 值腫瘤最大直徑≥5 cm＜5 cm t 值P 值分化程度中/低分化高分化t 值P 值例數(shù) 2 8 22 24 26 21 29腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞密度8.65±1.42 7.61±1.43 2.561 0.014 7.14±1.85 9.07±2.11 3.427 0.001 7.93±1.65 8.33±1.82 0.797 0.429 MHC-Ⅱ陽性腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞比例/%7.46±1.95 5.31±1.80 4.042 0.000 5.42±1.84 7.73±1.85 4.423 0.000 6.44±1.97 6.87±1.91 0.775 0.442 CD54陽性腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞比例/%8.21±1.86 6.62±2.11 2.784 0.008 6.34±2.06 8.47±1.91 3.794 0.000 7.11±1.86 7.75±1.83 1.212 0.231

2.2 兩組病人腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的表達(dá)水平及表型比較觀察組腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞密度明顯低于對照組，MHC-Ⅱ陽性腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞比例明顯低于對照組，CD54陽性腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞比例明顯低于對照組，見表3。

表3 口腔部鱗狀細(xì)胞癌與口腔良性腫物病人各50例腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的表達(dá)水平及表型比較/±s

表3 口腔部鱗狀細(xì)胞癌與口腔良性腫物病人各50例腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的表達(dá)水平及表型比較/±s

組別對照組觀察組t 值P 值例數(shù) 5 0 50腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞密度9.68±2.38 8.27±2.11 3.135 0.002 MHC-Ⅱ陽性腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞比例/%9.79±2.58 6.67±2.20 6.507 0.000 CD54陽性腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞比例/%9.83±2.54 7.46±2.31 4.881 0.000

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)機(jī)體免疫系統(tǒng)的功能紊亂與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［9-10］，本研究探討口腔部鱗狀細(xì)胞癌病人腫瘤組織內(nèi)腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的表達(dá)情況，與良性腫物對照組相比，觀察組病人的腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的密度、MHC-Ⅱ陽性腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞比例及CD54陽性腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞比例均明顯下降，觀察組病人TNM分期較高、腫瘤直徑較大的病人上述指標(biāo)下降更明顯。

20 世紀(jì)30 年代加拿大研究人員首次提出樹突狀細(xì)胞這一名稱，作為免疫系統(tǒng)內(nèi)重要的組成部分，該類細(xì)胞具有強(qiáng)大的抗原呈遞功能［11］，對腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的殺傷性，使體內(nèi)共刺激分子能夠大量表達(dá)、促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖分化［12-14］。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞在識別腫瘤組織的相關(guān)性抗原時能表達(dá)出MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ類分子，誘發(fā)MHC-Ⅰ類限制性細(xì)胞毒性的T細(xì)胞免疫反應(yīng)、MHC-Ⅱ類限制性CD4+T 輔助性細(xì)胞l 細(xì)胞相關(guān)反應(yīng)等［15-16］。腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子是白細(xì)胞介素1（IL-1）、白細(xì)胞介素12（IL-12）等，可致體內(nèi)Th1/Th2 失衡，甚至出現(xiàn)Th1 細(xì)胞的漂移，促使大量細(xì)胞毒性T細(xì)胞的生成［17］。T淋巴細(xì)胞在腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的促進(jìn)下聚集于腫瘤組織周邊，使抗血管生成的IFN-γ 和IL-12 等大量合成，減少腫瘤組織中血管的生成［18］。隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤病人體內(nèi)腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞表達(dá)水平下降，其中MHC-Ⅱ陽性及CD54陽性的腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞明顯減少、不成熟的細(xì)胞增多，對機(jī)體免疫系統(tǒng)的抗原呈遞、激活功能下降［19-20］，影響惡性腫瘤病人的預(yù)后水平，本研究的結(jié)果與前人研究成果一致，口腔部鱗狀細(xì)胞癌病人癌組織內(nèi)腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的密度下降、MHC-Ⅱ陽性及CD54 陽性的細(xì)胞比例降低，且隨著TNM 分期及腫瘤直徑的增大，腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的表達(dá)水平更低。

綜上可見，口腔部鱗狀細(xì)胞癌病人癌組織內(nèi)腫瘤浸潤性樹突狀細(xì)胞的表達(dá)水平降低，且與癌組織TNM分期、直徑大小等有關(guān)。