灰樹花工廠化栽培適宜菌株篩選試驗

金宇昌 馮 占，* 李峙凈 楊永凱 李賀文 楊瑞恒

（1江蘇華駿生物科技有限公司，江蘇宿遷223700；2江蘇華綠生物科技股份有限公司，江蘇宿遷223700；3上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，上海奉賢201403）

灰樹花（Grifola frondosa）又稱貝葉多孔菌、栗子蘑、千佛菌、舞茸（日本）等，是一種食藥兩用菌。新鮮灰樹花肉質(zhì)柔軟味美，具有松口蘑（Tricholoma matsutake）的香味，有很高的藥用價值[1]?；覙浠ㄗ訉嶓w或菌絲體所含的多糖成分已被相關(guān)研究證實在抗 HIV 病毒[2]、抗腫瘤[3]、降血糖[4]及提高機(jī)體免疫功能等方面具有一定的功效[5-7]。

日本在20 世紀(jì)70 年代后期用木屑開始商業(yè)化栽培灰樹花，并且于80 年代中期開始了大規(guī)模生產(chǎn)[8-9]。我國對灰樹花的研究則起步較晚，始于20世紀(jì)80年代初，自主選育的適宜工廠化生產(chǎn)的灰樹花菌株數(shù)量寥寥[10]，因此，工廠化栽培的灰樹花菌株選育工作亟待加強(qiáng)。為此筆者進(jìn)行4個灰樹花菌株對比試驗，以期篩選出適宜工廠化栽培的灰樹花菌株。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）供試菌株及其來源：試驗菌株H1、H2 和H5購自日本公司，慶1購自浙江慶元，這些菌株適用于傳統(tǒng)栽培方式，但未進(jìn)行過工廠化模式栽培性能評價。所有菌株保藏于江蘇華綠生物科技股份有限公司菌種保藏中心。（2）培養(yǎng)基配方：母種培養(yǎng)基為PDA 培養(yǎng)基。原種及栽培種配方為木屑50%，玉米芯15%，棉籽殼13%，麩皮20%，石灰1%，石膏1%。料含水量66%。

1.2 試驗方法

1.2.1 平板培養(yǎng)菌絲及性狀評價

用接種鉤將平板菌種表面氣生菌絲輕輕刮掉（避免觸碰培養(yǎng)基表面），用打孔器從平板菌種中心接種點向外2 cm 處以同心圓的方向打孔取菌種塊，接種至待接種的平板中心，置于培養(yǎng)箱中25 ℃恒溫避光培養(yǎng)，空氣相對濕度50%～60%。

在平板培養(yǎng)皿背面，以接種點為中心劃十字坐標(biāo)軸，自接種后每3 d 劃線并拍照、觀察氣生菌絲生長長勢。氣生菌絲距離平板邊緣4～5 mm 時視為滿板，計算菌絲平均生長速度。

1.2.2 三角瓶培養(yǎng)菌絲及性狀評價

從三角瓶培養(yǎng)基中間打孔至底部，將平板菌種用接種鉤劃邊長2 cm 的三角塊，將菌種塊接入中心孔底部，置于培養(yǎng)箱中25 ℃恒溫避光培養(yǎng)。觀察菌絲生長及長勢，記錄滿瓶時間，計算平均生長速度，菌絲性狀評價等均參照平板培養(yǎng)的評價標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.3 栽培試驗

采用裝袋機(jī)裝料，每袋濕料重（1200±10）g。培養(yǎng)基滅菌方式為高溫高壓蒸汽滅菌，106 ℃保溫60 min 后升溫至121 ℃滅菌120 min。滅菌后接種，接種料溫（23±2）℃，接種量每袋5～8 g。空氣相對濕度50%～60%，25 ℃避光培養(yǎng)30 d。出菇期環(huán)境參數(shù)為溫度19～21 ℃，空氣相對濕度90%～95%，光照強(qiáng)度300 lx，二氧化碳濃度≤1 000 mg/mL，內(nèi)循環(huán)風(fēng)35～40 Hz。子實體葉片最外緣生長點消失，葉片背面菌管明顯時采收。計算發(fā)菌速度、出菇時間和單產(chǎn)，比較子實體品質(zhì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試灰樹花菌株的菌絲生長情況

2.1.1 PDA平板培養(yǎng)基上供試菌株菌絲生長表現(xiàn)

由表1可見，H1、H2和H5為菌絲生長速度較快的三個菌株，并與慶1菌株差異顯著。但H2的菌絲長勢偏弱且較稀疏，呈絨毛狀。菌株H1 與H5 的菌絲生長速度并未呈現(xiàn)顯著性差異。因此菌株H1 和H5可能是最適用于實際生產(chǎn)所使用的菌株。

表1 PDA平板上供試灰樹花菌株的菌絲生長表現(xiàn)

2.1.2 三角瓶培養(yǎng)基上供試灰樹花菌株菌絲生長表現(xiàn)

在三角瓶菌種培養(yǎng)基上，培養(yǎng)第21 天時，H1 的菌絲吃料速度最快，其次是H5、慶1、H2，菌絲長勢同平板菌種基本一致（表2）。就菌絲生長速度而言，H1和H5可能更適合用于工廠化栽培。

表2 供試灰樹花菌株在三角瓶培養(yǎng)基上生長情況

2.2 供試灰樹花菌株栽培結(jié)果

栽培試驗結(jié)果：H1生長速度最快，其與H5菌絲顏色為濃白色，菌絲強(qiáng)壯；4 個菌株的出菇時間無明顯差異，H1 為5 d，其他三個菌株為6 d；子實體的成熟時間，H1 最短為 13 d，其次為慶1、H5、H2 最長為21 d，相對應(yīng)H1 的整個栽培周期也較短為43 d；菌株H1 的平均袋產(chǎn)量最高，顯著高于其他菌株，生物轉(zhuǎn)化率為H1＞慶1＞H5＞H2（表3）。

表3 供試灰樹花菌株的栽培結(jié)果

圖3 供試灰樹花菌株子實體

2.3 供試灰樹花菌株子實體品質(zhì)比較

子實體顏色：菌株H1 的子實體呈淺褐色為最優(yōu)，其次是菌株H5 的子實體呈淺黃褐色；葉片展開率：菌株H5 的子實體葉片展開率最高，其次是菌株H1 的子實體；葉片形狀：菌株 H1、H2 和 H5 的子實體葉片形狀最優(yōu)呈扇形或匙形，其次是慶1 的子實體；子實體氣味：H1和H2的子實體松蕈樣芳香味最濃郁，其次是菌株慶1 和H5 的子實體；葉片大小：4個菌株的子實體均較優(yōu)，但H2 的子實體的葉片大小更為均勻，其次是H1的子實體（圖3，表4）。綜合考慮，H1 菌株的子實體品質(zhì)相對最好，其次是菌株H5，更具商業(yè)化栽培的價值。

表4 供試灰樹花菌株子實體品質(zhì)

3 小結(jié)

通過對比試驗，供試菌株H1 菌絲濃白，致密，在平板培養(yǎng)基及三角瓶培養(yǎng)基中生長速度最快，出菇期菌絲恢復(fù)最快，原基形成最早，表明該菌株生長周期短，單產(chǎn)統(tǒng)計結(jié)果其產(chǎn)量也最高。因此工廠化栽培該菌株增加單位時間內(nèi)茬數(shù)并獲得更多的產(chǎn)量，可大幅提高廠房利用率，降低生產(chǎn)成本，增加企業(yè)收益。此外，H1子實體品質(zhì)也相對優(yōu)于其他菌株，因此菌株H1 更適宜作為工廠化栽培的灰樹花菌株，今后需在實際生產(chǎn)中進(jìn)一步驗證，并細(xì)化生產(chǎn)、工藝，逐步推廣應(yīng)用。