老年心力衰竭合并肺部感染患者血清lncRNA NEAT1、miR-129表達(dá)及其臨床意義

鐘聰敏，謝肖立，王肖雅，孫爽，陳兢兢，卓杰

(1.保定市第一醫(yī)院老年病科，河北 保定 071000； 2.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院消化內(nèi)科，石家莊 050000)

多種心血管疾病在終末期階段均可發(fā)展為心力衰竭，隨著年齡增長，發(fā)病率急速上升，肺部感染是心力衰竭患者的主要表現(xiàn)之一，而老年人群是肺部感染的好發(fā)人群，肺部感染會(huì)加重心力衰竭，故應(yīng)及早發(fā)現(xiàn)和治療老年心力衰竭合并肺部感染，檢測其靈敏指標(biāo)對(duì)于心力衰竭合并肺部感染具有重要意義[1-2]。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA) 核富含豐富的轉(zhuǎn)錄本1(nuclear-enriched abundant transcript 1，NEAT1)廣泛表達(dá)于真核生物體內(nèi)，參與各種生物學(xué)過程。近年來研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA 與多種心血管疾病的發(fā)病密切相關(guān)，血漿IncRNA可能成為心力衰竭的潛在生物標(biāo)志物[3-4]。lncRNA NEAT1是lncRNA家族成員之一，其表達(dá)水平在多種腫瘤疾病中存在變化[5-6]。微RNA(microRNA，miRNA/miR)是一種內(nèi)源性非編碼小分子RNA，廣泛存在于真核生物中，在調(diào)控基因表達(dá)中具有復(fù)雜性和多效性[7]。miR-129在細(xì)胞生長、發(fā)育、癌變等生命過程中有重要作用[8]，但對(duì)于lncRNA NEAT1、miR-129在老年心力衰竭合并肺部感染中的研究較少見報(bào)道。本研究旨在通過探討老年心力衰竭合并肺部感染患者血清lncRNA NEAT1、miR-129表達(dá)水平變化及意義，以期為臨床老年心力衰竭合并肺部感染臨床治療提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年9月至2019年4月保定市第一醫(yī)院老年病科收治的260例老年心力衰竭患者為研究對(duì)象，依據(jù)是否發(fā)生肺部感染分為觀察組(肺部感染，n=124)和對(duì)照組(未發(fā)生肺部感染，n=136)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合心力衰竭相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]；②60歲以上；③無嚴(yán)重肝腎疾病及免疫性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他慢性呼吸系統(tǒng)疾病者；②患有代謝性疾病者；③惡性腫瘤者；④嚴(yán)重營養(yǎng)不良者；⑤患有精神疾病者。本研究經(jīng)保定市第一醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2主要試劑與儀器 試劑包括2.5×Real Master Mix試劑(KT201)[天根生化科技(北京)有限公司]；RNA提取試劑盒(15596-026)(美國InvitRogen公司)；儀器包括卡盒式多功能酶標(biāo)儀[美谷分子儀器(上海)有限公司，型號(hào)：SpectraMax Paradigm]、低溫高速離心機(jī)(美國貝克曼庫爾特公司，型號(hào)：Allegra X-15R)、全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀(美國雅培公司，型號(hào)：Architect i2000)、全自動(dòng)生化分析儀[羅氏(中國)有限公司，型號(hào)：ABBOTT C8000]、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)分析儀[賽默飛世爾科技(中國)有限公司，型號(hào)：Applied Biosystems]、微量分光光度計(jì)[賽默飛世爾科技(中國)有限公司，型號(hào)：NanoDrop]。

1.3檢測指標(biāo)及方法 采集所有患者清晨空腹靜脈血3～5 mL，常溫下靜置待血液凝固后，以離心半徑13.5 cm，2 500 r/min離心15 min，離心后分離上層血清并儲(chǔ)存于-20 ℃待用。

1.3.1血清腦鈉肽(brain natriuretic peptide，BNP)、降鈣素原(procalcitonin，PCT)水平測定 采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀及原裝試劑測定BNP水平；采用全自動(dòng)生化分析儀檢測PCT水平，所有操作步驟均嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.2血清lncRNA NEAT1、miR-129表達(dá)水平檢測 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測血清lncRNA NEAT1、miR-129表達(dá)水平。以RNA提取試劑盒提取樣本血清總RNA，紫外分光光度法鑒定各樣本提取的RNA純度和完整性。按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將血清RNA逆轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)DNA。LncRNA NEAT1上游引物：5′-GUCUGUGUGGAAGGAGGAATT-3′，下游引物：5′-UUCCUCCUUCCACACAGACTT-3′；3-磷酸甘油醛脫氫酶上游引物：5′-CAGCCAGGAGAAATCAAACAG-3′，下游引物：5′-GACTGAGTACCTGAACCGGC-3′。miR-129上游引物：5′-GATACTCACTTTTTGCGGTCT-3′；下游引物：5′-GTGCAGGGTCCGAGG-3′；U6上游引物：5′-CGCTTCGGCAGCACATATAC-3′，下游引物：5′-CAGGGGCCATGCTAATCTT-3′。引物序列均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系20 μL：2.5×Real MasterMix 8 μL；上下游引物各0.4 μL，熒光探針0.8 μL；MGB Taqman探針10 μL；互補(bǔ)DNA樣本2 μL；加ddH2O至20 μL。選擇定量PCR反應(yīng)程序，共40個(gè)PCR循環(huán)，定量PCR擴(kuò)增條件：42 ℃，30 min；94 ℃，5 min；94 ℃，45 s；60 ℃，80 s。以 2-△△CT法計(jì)算lncRNA NEAT1、miR-129相對(duì)表達(dá)量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料以例(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；采用Pearson法進(jìn)行相關(guān)性分析，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組一般資料比較 兩組性別、年齡、心率、高血壓及冠心病比例、心功能分級(jí)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，觀察組血清PCT、BNP水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組心力衰竭患者一般資料比較

2.2兩組血清lncRNA NEAT1、miR-129表達(dá)水平比較 觀察組血清lncRNA NEAT1表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，血清miR-129表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，見表2。

表2 兩組心力衰竭患者血清lncRNA NEAT1、miR-129表達(dá)水平比較

2.3觀察組不同心功能患者血清lncRNA NEAT1、miR-129表達(dá)水平比較 心功能Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)患者血清lncRNA NEAT1表達(dá)水平顯著高于心功能Ⅱ級(jí)患者(P<0.05)，心功能Ⅲ級(jí)與Ⅳ級(jí)患者血清lncRNA NEAT1表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；心功能Ⅳ級(jí)患者血清miR-129表達(dá)水平顯著低于心功能Ⅱ級(jí)和Ⅲ級(jí)患者(P<0.05)，見表3。

表3 觀察組不同心功能患者血清lncRNA NEAT1、miR-129表達(dá)水平比較

2.4觀察組血清lncRNA NEAT1、miR-129水平與BNP、PCT水平的相關(guān)性 Pearson法分析結(jié)果顯示，觀察組血清lncRNA NEAT1與BNP、PCT水平均呈正相關(guān)(r=0.472，P<0.001；r=0.464，P<0.001)，血清miR-129與BNP、PCT水平均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.441，P=0.001；r=-0.507，P<0.001)，見圖1～4。

lncRNA：長鏈非編碼RNA；NEAT1：核富含豐富的轉(zhuǎn)錄本1；PCT：降鈣素原

lncRNA：長鏈非編碼RNA；NEAT1：核富含豐富的轉(zhuǎn)錄本1；BNP：腦鈉肽

miRNA/miR：微RNA；PCT：降鈣素原

miRNA/miR：微RNA；BNP：腦鈉肽

3 討 論

心力衰竭是臨床常見疾病之一，主要病理特征為心排血量降低、心肌收縮能力下降等，老年人群的發(fā)病率高，肺循環(huán)淤血是老年心力衰竭的主要表現(xiàn)之一，導(dǎo)致肺部感染風(fēng)險(xiǎn)增加，肺部感染會(huì)顯著增加肺循環(huán)的阻力，并引發(fā)心肌炎癥，從而損傷心肌細(xì)胞，加重心力衰竭[10-11]。心力衰竭合并肺炎的治療難度較大，患者病死率較高，因此，臨床上應(yīng)及早發(fā)現(xiàn)和辨別心力衰竭患者是否并發(fā)肺炎[12]。

血清BNP、PCT是臨床中常用的診斷和評(píng)估老年心力衰竭合并肺部感染的檢測指標(biāo)之一。BNP由心肌細(xì)胞合成并分泌，存在心力衰竭合并肺部感染時(shí)，肺部缺血、缺氧及心力衰竭同時(shí)作用于心室，加重心肌損傷，導(dǎo)致BNP水平明顯升高，對(duì)心力衰竭合并肺部感染的診治具有重要意義[13]。PCT是一種由116個(gè)氨基酸組成的多肽，是降鈣素的前體物質(zhì)，當(dāng)機(jī)體存在細(xì)菌感染時(shí)，外周血PCT水平顯著升高，與感染程度呈正相關(guān)，可作為判斷病情、預(yù)后和療效觀察的可靠指標(biāo)，被認(rèn)為是新型的炎癥標(biāo)志物。相關(guān)研究表明，老年心力衰竭合并肺部感染患者血清PCT、BNP水平明顯升高[14-15]。本研究結(jié)果顯示，觀察組血清BNP、PCT水平顯著高于對(duì)照組，與非感染患者相比，機(jī)體感染時(shí)，肺部損傷加重，老年心力衰竭合并肺部感染患者血清BNP、PCT水平均明顯升高，可作為心力衰竭合并肺部感染的敏感檢測指標(biāo)。

LncRNA是一種非編碼RNA，在真核細(xì)胞內(nèi)被普遍轉(zhuǎn)錄，其表達(dá)具有組織特異性，與動(dòng)脈粥樣硬化、慢性心力衰竭等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，并且在人體血漿中已成功檢測到lncRNA，是檢測心力衰竭的潛在生物學(xué)標(biāo)志物[16-17]。LncRNA NEAT1是一個(gè)長的多聚腺苷酸RNA轉(zhuǎn)錄本。本研究結(jié)果顯示，觀察組血清lncRNA NEAT1表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，表明老年心力衰竭合并肺部感染患者血清lncRNA NEAT1表達(dá)水平明顯升高，提示血清lncRNA NEAT1可能在老年心力衰竭合并肺部感染的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色。進(jìn)一步Pearson法分析結(jié)果顯示，觀察組患者血清lncRNA NEAT1與BNP、PCT水平均呈正相關(guān)，提示血清lncRNA NEAT1可能作為監(jiān)測老年心力衰竭合并肺部感染的新的生物指標(biāo)。

目前，血清miRNA檢測與分析被認(rèn)為是一種特異性高、可操作性強(qiáng)的技術(shù)，具有表達(dá)特異性及穩(wěn)定性，可能成為新一代的潛在生物標(biāo)志物。隨著研究的深入，miR-129在炎癥反應(yīng)中的重要作用逐漸被發(fā)現(xiàn)，具有潛在的疾病監(jiān)測價(jià)值[18-19]。本研究結(jié)果顯示，觀察組血清miR-129表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組，表明miR-129可能參與老年心力衰竭合并肺部感染的炎癥反應(yīng)過程，但具體作用機(jī)制尚不清楚。進(jìn)一步行Pearson相關(guān)性分析顯示，血清miR-129與BNP、PCT水平均呈負(fù)相關(guān)，提示血清miR-129可能作為新的老年心力衰竭合并肺部感染的臨床檢測指標(biāo)。本研究存在樣本量小、病例來源局限等不足，研究結(jié)果仍需大樣本、多中心試驗(yàn)研究的進(jìn)一步確定。

綜上所述，老年心力衰竭合并肺部感染患者血清lncRNA NEAT1表達(dá)水平升高，血清miR-129表達(dá)水平降低，可能對(duì)老年心力衰竭合并肺部感染患者的臨床治療具有一定指導(dǎo)意義。