貴州金花茶花的揮發(fā)性成分分析※

●羅在柒 劉 潔 姜運力 李 蘭 田 凡 顏鳳霞

(1.貴州省林業(yè)科學研究院貴州貴陽550005；2.貴州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院貴州貴陽550001)

金花茶作為“茶族皇后”一直被世人珍愛。貴州金花茶作為金花茶屬自然分布緯度最高的物種，其分布范圍狹窄，種群數(shù)量少，加之人類的挖掘，瀕危程度的等級高，被列為國家一級保護物種[1]。

金花茶具有豐富的生物學活性和營養(yǎng)元素[2，3]，對抗癌、抗衰老、保護心臟和細胞膜、降低膽固醇、提高機體免疫功能有顯著效果[4-8]，普遍認為花朵為植株精華，營養(yǎng)成分含量高[9]。相關(guān)研究從金花茶花的乙醇提取物中分離得到13個化合物[10]，用水蒸氣蒸餾法提取金花茶葉片的揮發(fā)性成分，共分離出42個組分，鑒定了37個化合物[11]。從凹脈金花茶（Camellia impressinervis）葉中的揮發(fā)性成分共分離出54個組分，確認了其中的43個組分[12]。目前，對貴州金花茶花朵的揮發(fā)性成分的研究未見報道。本研究通過測試原產(chǎn)貴州金花茶揮發(fā)性成分，為進一步開發(fā)和利用貴州金花茶作基礎數(shù)據(jù)支撐。

1 材料和方法

1.1 材料來源

貴州金花茶（Camellia huana T.L.Ming et W.J.Zhang）的花朵材料采自貴州省羅甸縣茂井鎮(zhèn)大亭社區(qū)田壩組。

儀器HP6890/5975C氣相(色譜)-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國安捷倫公司)，手動固相微萃取裝置(美國Supelco公司)，萃取纖維為2cm-50/30mDVB/CAR/PDMS StableFlex，藥品（試劑）均為分析純。

1.2 方法

取0.3g混勻剪碎樣品，置于10mL固相微萃取儀采樣瓶中，插入裝有2cm～50/30m DVB/CAR/PDMS StableFlex纖維頭的手動進樣器，在60℃條件下頂空萃取40min時間后，移出萃取頭并立即插入氣相色譜儀進樣口(溫度250℃)中，熱解析5min進樣。

色譜柱為FB-5MSI(30cm 0.25mm 0.25m)彈性石英毛細管柱，柱溫40℃（保留2min），以2℃/min升溫至110℃，再以10℃/min升溫至280℃，運行時間：56min；汽化室溫度250℃；載氣為高純He(99.999%)；柱前壓6.98psi，載氣流量1.0mL/min；不分流進樣；溶劑延遲時間：1min。

離子源為EI源；離子源溫度230℃；四極桿溫度150℃；電子能量70eV；發(fā)射電流34.6A；倍增器電壓1518V；接口溫度280℃；質(zhì)量范圍29～500amu。

對總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜計算機數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索及核對Wiley275和Nist2005標準質(zhì)譜圖，確定了揮發(fā)性化學成分，用峰面積歸一化法測定了各化學成分的相對質(zhì)量分數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 貴州金花茶花朵TIC總離子圖特征

檢測持續(xù)時間55min，初始出峰時間1.66RT，末峰時間54.049RT，峰形對稱良好，共分析得99個峰形及對應的化合物，見圖1。

表1貴州金花朵揮發(fā)性物質(zhì)TIC總離子圖

2.2 貴州金花茶花朵揮發(fā)性物質(zhì)組分分析

經(jīng)分析，99個化合物共分為醇、烯、醛、烷、酮、酸、酯、酚、苯、吡嗪、咔唑等10類物質(zhì)，其中吡嗪類物質(zhì)比重最大，占67.41%；物質(zhì)種類的組成數(shù)量較多的有醇類物質(zhì)31個，烷烴類物質(zhì)27個，烯類物質(zhì)14個，醛類物質(zhì)11個；還有酸、酯、酮、咔唑等物質(zhì)組分，具體見表1。

表1揮發(fā)性物質(zhì)類別、數(shù)量和峰面積比重

2.3 主要化合物的生物學特征分析

檢測得到吡嗪類物質(zhì)1個，為苯并吡嗪，出峰值峰時間24.703RT，峰面積1 409 893 630，占比67.41%，匹配度僅為23-59，綜合分析2個系統(tǒng)的6個物質(zhì)，即8-(2-Hydroxyethoxymethyl)guanine（8-（2-羥基乙氧基甲基）鳥嘌呤），Urea,N-propyl-N'-[3-[trifluorom（正丙基-N'-[3-[三氟]尿素），Diphenyl Telluride（二苯基碲化物），Benzopyrazine,1,2,3,4-tetrahydro-2-oxo-3-difluoroacetylmethylene（苯并吡嗪，1,2,3,4-四氫-2-氧代-3-二氟乙酰亞甲基）等，經(jīng)分析，主要組成含2個苯環(huán)和2個N，根據(jù)出峰時間推測分子量大小在130左右，最為符合條件的為苯并吡嗪，俗稱喹喔啉（Quinoxaline）。前期研究證明，吡嗪類化合物是一類具有重要應用價值的雜環(huán)類化合物，具有多種生物活性，抗腫瘤、抗HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、抗菌、抗血凝，降血壓等功效。貴州金花茶花中富含吡嗪類化合物，賦予其多種特殊的功效，結(jié)果揭示了貴州金花茶花藥用價值高的理論基礎。

3 討論

通過GC-MS方法測試原產(chǎn)貴州的貴州金花茶花香成分組成，結(jié)果得到貴州金花茶花朵含揮發(fā)性物質(zhì)99個，主要有醇、烯、醛、烷、酮、酸、酯、酚、苯、吡嗪、咔唑等10類物質(zhì)，相對比其他物種花朵物質(zhì)成分多。如從燈盞花中揮發(fā)油組分共鑒定出了64種組分[13]；從普洱大葉種喬木茶花和普洱生茶中鑒定出揮發(fā)性成分分別為9種和67種[14]，從糠椴花中分離出52種揮發(fā)性成分，鑒定出了39種[15]，相對而言，貴州金花茶花中揮發(fā)性物質(zhì)種類較多。