抗犬螨蟲(chóng)性皮膚病中藥的篩選

方可心，王海洋，楊 靜

1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林市 132109；2.吉林省牧業(yè)信息中心，吉林長(zhǎng)春 130000

犬螨蟲(chóng)病主要分為疥螨、蠕形螨和耳螨。犬螨蟲(chóng)感染是臨床中寵物常見(jiàn)的高度接觸性體外寄生蟲(chóng)病,患病犬主要表現(xiàn)為滲出性炎癥、皮膚瘙癢，被毛脫落，患病部位有膿性分泌物，嚴(yán)重影響犬生長(zhǎng)發(fā)育，同時(shí)威脅人類健康。對(duì)犬螨蟲(chóng)病的治療多采用化學(xué)藥物治療，如伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素等大環(huán)內(nèi)酯類藥物，長(zhǎng)時(shí)間使用后出現(xiàn)了一定的耐藥性，需多次使用或增加藥量方有效果?；瘜W(xué)藥物在體內(nèi)殘留時(shí)間長(zhǎng)，一旦過(guò)量易引起中毒，此類藥物無(wú)特效解毒藥，在體內(nèi)代謝速度慢，容易導(dǎo)致犬死亡。中藥具有較強(qiáng)的抗菌、抗病毒和殺滅多種寄生蟲(chóng)作用，安全性高，無(wú)副作用，不容易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，已發(fā)現(xiàn)青蒿、苦參、丁香、雷公藤、百部和魚(yú)藤等多種中藥具有較好的殺螨活性，并成功提取了殺螨藥效成分，已廣泛應(yīng)用于螨蟲(chóng)病臨床治療。肖嘯等采用小蘭杜治療犬螨蟲(chóng)效果觀察研究。陸江等應(yīng)用復(fù)方丁香提取物軟膏對(duì)犬螨蟲(chóng)性皮膚病防治的臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，復(fù)方丁香提取物軟膏對(duì)犬螨蟲(chóng)具有良好的殺滅作用。國(guó)內(nèi)對(duì)犬螨病治療多采用單味中藥治療螨病的較多，應(yīng)用多味中藥制劑對(duì)犬螨蟲(chóng)的治療研究報(bào)道較少。本試驗(yàn)選取多味中草藥，通過(guò)體外殺螨試驗(yàn)和臨床治療試驗(yàn)，對(duì)患有螨蟲(chóng)性皮膚病的病犬進(jìn)行研究，以期篩選出有效、安全的復(fù)方中藥，盡可能縮短治療時(shí)間，為犬螨蟲(chóng)病的治療藥物的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品

大風(fēng)子、苦參、地膚子、蛇床子、川椒、苦參、黃柏、百部、白鮮皮、蒼耳子、甘草等中草藥購(gòu)自吉林省吉林市百草堂中藥店；50%甘油水溶液、液體石蠟等購(gòu)自于吉林省康達(dá)動(dòng)物藥業(yè)有限公司。

1.1.2 犬螨蟲(chóng)樣本

犬疥螨10 份，蠕形螨15 份，耳癢螨5 份，分別采集于吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院臨床確診的患犬病料。

1.1.3 試驗(yàn)器材

外科手術(shù)刀、酒精燈、顯微鏡、黑紙。

1.2 方法

1.2.1 中藥提取物的制備

將10 種中藥組合成3 個(gè)組方，分別是：①百部20 g、黃柏15 g、苦參20 g、白鮮皮20 g、甘草20 g；②地膚子15 g、蛇床子15 g、川椒20 g、甘草20 g；③百部20 g、蒼耳子25 g、大風(fēng)子25 g、苦參20 g、甘草20 g。按上述劑量取 以上3 組中藥，每一組浸泡0.5 h，分別將其水煎2 次，過(guò)濾，兩次濾液合并濃縮。使生藥含量為1 000 mg/mL，然后進(jìn)行倍比稀釋，高溫滅菌之后置冰箱備用。

1.2.2 犬螨蟲(chóng)病診斷

根據(jù)犬皮膚發(fā)癢、紅色丘疹、滲出物、惡臭等癥狀初步診斷為螨蟲(chóng)感染。用消毒手術(shù)刀片在犬的病變皮膚和健康皮膚交界處輕輕地刮取病料，一直刮到有鮮血滲出為止，將刮下的皮屑放于載玻片上，滴加50%的甘油水溶液，加蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察，如果發(fā)現(xiàn)灰白色、圓形、背部凸起呈弧形、體表有堅(jiān)韌的表皮、還具有小細(xì)紋蟲(chóng)體，同時(shí)卵內(nèi)含有不均勻的卵胚或者已經(jīng)成形的幼蟲(chóng)。由此即可確診病犬所患疾病為犬螨病。如果刮取的皮屑太厚，可以先使用NaOH 溶液溶解之后再進(jìn)行鏡檢。

1.2.3 犬螨蟲(chóng)的采集

保定犬只，觀察犬的全身，找到脫毛的患部，然后在患病部分和健康部分交界處，將犬身上比較長(zhǎng)的毛剪去之后，使用酒精燈外焰處消毒的外科手術(shù)刀在體表輕輕地刮取病料，注意手術(shù)刀與皮膚的表面垂直，反復(fù)刮取病變處表皮，直到鮮血滲出為止，取完樣本后，棉球蘸取碘酒輕輕擦拭取樣處。本試驗(yàn)采取培養(yǎng)皿內(nèi)加溫法獲得螨蟲(chóng)樣本，具體操作如下：將采集到的干燥皮屑，放于先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿內(nèi)，加上皿蓋。將培養(yǎng)皿放于35 ～40 ℃溫水的杯上，等待20 min 之后，將培養(yǎng)皿倒轉(zhuǎn)，蟲(chóng)體就會(huì)蘸附于培養(yǎng)皿的皿底，更多的皮屑則會(huì)落于皿蓋上，取出皿底檢查，如果仍有太多皮屑就反復(fù)三次可收集到于皮屑分離的干凈蟲(chóng)體。

1.2.4 體外殺蟲(chóng)試驗(yàn)

將采集到的螨蟲(chóng)樣本隨機(jī)分為5 部分，為這5個(gè)部分分為5 個(gè)小組，其中1、2、3 組滴加3 種中藥藥劑作為復(fù)方中藥試驗(yàn)組，另外一組編為4、5組分別作為對(duì)照組（滴加伊維菌素）和空白組（滴加液體石蠟）。每個(gè)樣本滴加藥液5 滴，輕輕震動(dòng)使樣本與藥液充分混合；空白組、對(duì)照組則分別滴加等量的液體石蠟與伊維菌素，同樣使其充分混合。將樣本放置于溫度為26 ～29 ℃，相對(duì)濕度為 70%～80%的保溫箱中保暖，每隔2 h 取出，在顯微鏡下觀察1 次，記錄下6 組螨蟲(chóng)的活動(dòng)情況，直到所有的螨蟲(chóng)都失去活動(dòng)能力為止。

1.2.5 臨床治療對(duì)比試驗(yàn)

依據(jù)體外殺螨蟲(chóng)試驗(yàn)的結(jié)果，取藥效最好的復(fù)方中藥進(jìn)行臨床對(duì)比治療試驗(yàn)。試驗(yàn)分為5 組，每組患病犬4 只，其中試驗(yàn)1 組僅注射伊維菌素0.06 mL/kg；試驗(yàn)2 組低劑量中藥提取液(50 g 中藥煎制)進(jìn)行藥浴治療，試驗(yàn)3 組中劑量中藥提取液（75 g 中藥煎制）進(jìn)行藥浴治療，試驗(yàn)4 組高劑量中藥提取液（100 g 中藥煎制）進(jìn)行藥浴治療,記錄病犬康復(fù)情況及時(shí)間。試驗(yàn)5 組中劑量中藥提取液（75 g 中藥煎制）加注伊維菌素0.03 mL/kg，記錄病犬康復(fù)情況及時(shí)間。

1.2.6 判定標(biāo)準(zhǔn)

體外殺螨試驗(yàn)的死亡判定標(biāo)準(zhǔn)：①螨蟲(chóng)蟲(chóng)體收縮或者變?yōu)榘胪该?；②螨蟲(chóng)蟲(chóng)體裂開(kāi)，蟲(chóng)體周圍出現(xiàn)油狀物質(zhì)；③在高倍顯微鏡下連續(xù)觀察蟲(chóng)體1 min，蟲(chóng)體或者蟲(chóng)足停止活動(dòng)者。

犬疥螨病治愈判定標(biāo)準(zhǔn)為犬只癢感消失，即停止蹭癢，患部結(jié)痂脫落，有新的被毛長(zhǎng)出。蠕形螨病治愈標(biāo)準(zhǔn)為毛囊周圍隆起平復(fù)及膿皰消失、浮腫消退、膿性皮炎炎癥消退以及有新的被毛長(zhǎng)出。

2 結(jié)果與分析

2.1 中藥對(duì)體外犬螨蟲(chóng)生存情況的影響

由表1 可見(jiàn)，第1 組殺滅所有螨蟲(chóng)所耗時(shí)間為8 h，第2 組為16 h，第3 組為6 h，對(duì)照組伊維菌素為6 h，空白組在20 h 之后螨蟲(chóng)仍然沒(méi)有徹底死亡，說(shuō)明第3 組復(fù)方中藥作用與伊維菌素的殺螨效果無(wú)差別，用時(shí)最短。

表1 中藥對(duì)體外犬螨蟲(chóng)生存情況的影響

2.2 臨床治療效果比較

表2 臨床治療效果比較

由表2 可見(jiàn)，試驗(yàn)1 組，即常規(guī)伊維菌素注射組治愈率為100%，治療時(shí)間為15 d；低濃度中藥藥浴治愈率只有75%，而且治療時(shí)間長(zhǎng)達(dá)29 d，中等濃度中藥藥浴治愈率100%，治療時(shí)間為12 d；高濃度中藥藥浴治愈率也是100%，治療時(shí)間為12 d，與注射伊維菌素組比治療時(shí)間短；試驗(yàn)5 組中藥與伊維菌素合用治療后，康復(fù)為8 d，療效顯著，效果優(yōu)于各藥物單獨(dú)使用，可用于臨床。

3 討論

蒼耳子是菊科植物蒼耳帶總苞的成熟果實(shí)，是一種野生中草藥，其主要成分含有水溶性苷類，揮發(fā)油、酚酸類及脂肪酸等成分，具有抗菌、抗病毒、抗炎和抗過(guò)敏等作用。吳輝生研究表明，蒼耳子能夠抑制寧都黃雞消化道大腸桿菌的增長(zhǎng)與繁殖的作用。百部的主要活性成分為百部生物堿，具有抗菌、殺蟲(chóng)、抗病毒等作用。百部臨床外用于治療螨蟲(chóng)病、疥瘡和真菌性感染等。鄧云夏等研究發(fā)現(xiàn)對(duì)葉百部堿具有體外殺螨活性，對(duì)兔疥螨具有殺死作用。在本試驗(yàn)中，百部、蒼耳子與大風(fēng)子的組合方劑體外抗螨蟲(chóng)病效果較好，優(yōu)于其他兩組中藥組合方劑，本試驗(yàn)體外殺螨效果與楊海燕等研究報(bào)道的結(jié)果相一致。蒼耳子有小毒，所以在藥浴時(shí)要注意不要讓犬飲用藥液，局部藥浴后可給患犬戴伊麗莎白圈，防止舔食造成中毒，幼齡犬根據(jù)病情可適當(dāng)減少局部藥浴的次數(shù)。

治療試驗(yàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，犬在感染螨蟲(chóng)之后，其皮膚免疫力下降，部分患犬易出現(xiàn)繼發(fā)葡萄球菌感染，因此在臨床治療過(guò)程中，可先對(duì)繼發(fā)感染細(xì)菌進(jìn)行分離鑒定，然后通過(guò)藥敏試驗(yàn)篩選最為敏感藥物進(jìn)行對(duì)癥治療，預(yù)防出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)疾病，延長(zhǎng)治療時(shí)間。復(fù)方中藥（百部、蒼耳子、大風(fēng)子、苦參、甘草）可單獨(dú)用于犬螨蟲(chóng)性皮膚病的臨床治療，同時(shí)配合伊維菌素可有效縮短治療時(shí)間。

參考文獻(xiàn)：略