液相色譜法測定筍制品中阿斯巴甜的含量

王朝杰，陳艷茹，張友青，趙佳麗，陳睿軒，張惠君

(浙江省杭州市臨安區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心，浙江 臨安 311300)

阿斯巴甜(Aspartame)是由天冬氨酸和苯丙氨酸結(jié)合而成的縮二氨酸的甲基酯，作為新型甜味劑逐漸被人們所熟悉，且其在體內(nèi)迅速代謝為天冬氨酸、苯丙氨酸和甲醇，甲醇在體內(nèi)代謝為甲醛，進(jìn)而氧化為甲酸，以甲酸形態(tài)在體內(nèi)停留時(shí)間最長，因此被認(rèn)為是甲醇毒性的作用機(jī)理，但是阿斯巴甜中含有苯丙胺酸，不適用于苯丙酮尿癥患者，因此采取科學(xué)方法準(zhǔn)確測定食品中阿斯巴甜的含量至關(guān)重要[1]。

目前行業(yè)內(nèi)對阿斯巴甜的檢測，已經(jīng)有比較多的報(bào)道，有對阿斯巴甜單獨(dú)的研究[2]，也有針對多種甜味劑的檢測方法[3-6]，本文針對自身實(shí)驗(yàn)室實(shí)情與臨安地區(qū)筍制品的抽檢情況，結(jié)合國標(biāo)[7]開發(fā)一種快速、節(jié)約、環(huán)保的方法，提高工作效率的同時(shí)，盡量減少了有機(jī)試劑的使用，并且取得良好的效果，使本方法具有一定的使用價(jià)值。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀器和設(shè)備

LC-20AD液相色譜儀，配光電二極管陣列紫外可見光檢測器；HC-3018高速離心機(jī)；Think-lab超純水機(jī)，METTLER TOLEDO電子天平，F(xiàn)LUKO均質(zhì)器。

1.2 試 劑

阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(97.7%)，阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1 mg/mL)；阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)使用液系列濃度為5、10、25、50、100 mg/L；乙腈(色譜純)；乙酸銨(色譜純)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

醬腌菜類筍制品：取適量樣品經(jīng)組織搗碎機(jī)打碎后，稱取5 g打碎樣品至100 mL離心管中(精確至0.001)，加入50 mL超純水，用均質(zhì)器打成勻漿狀態(tài)，離心取上清液過濾，濾液經(jīng)0.45 μm水系濾膜過濾后上機(jī)分析。

筍干制品：取適量樣品剪成顆粒狀后混勻，稱取5 g混勻樣品至100 mL離心管(精確至0.001)，加入50 mL超純水，蓋上蓋子過夜泡脹，然后用均質(zhì)器打成勻漿狀態(tài)，離心取上清液過濾，濾液經(jīng)0.45 μm水系濾膜過濾后上機(jī)分析。

1.3.2 高效液相色譜條件

色譜柱：納譜分析ChromCore C18-P柱(5 μm，4.6×250 mm)；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量10 μL；流速0.8 mL/min；流動(dòng)為乙腈：20 mmol/L乙酸銨(20:80)；檢測波長210 nm。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

本實(shí)驗(yàn)采用光電二極管紫外可見光檢測器，在波長190～400 nm范圍內(nèi)對阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)系列使用液進(jìn)行掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在210 nm處，達(dá)到最高響應(yīng)值。

2.2 流動(dòng)相的選擇

考慮到甲醇和乙腈的價(jià)格和國標(biāo)中甲醇-水(40:60)和乙腈-水(20:80)的比例，以及乙腈作為流動(dòng)相，阿斯巴甜保留時(shí)間更早，綜合計(jì)算下還是乙腈-水更加節(jié)約有機(jī)試劑和成本。

在使用乙腈-水流動(dòng)相中，發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)室色譜柱有峰寬過寬以及拖尾的問題，故選擇加入緩沖鹽改善峰形，查閱相關(guān)文獻(xiàn)[7]和實(shí)際試用后，以及考慮到檢測醬腌菜中其它添加劑指標(biāo)的便利性，最終選擇20 mmol/L的乙酸銨溶液作為緩沖液流動(dòng)相。

此色譜條件下，阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)圖譜如圖1所示。

圖1 阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度5 μg/mL)在210 nm波長下的色譜圖Fig.1 Chromatogram of aspartame standard solution (concentration 5 μg/mL) at 210 nm wavelength

2.3 樣品前處理方法的選擇

阿斯巴甜是一種易溶于水的甜味劑。筍制品打碎后稱樣至離心管中，再進(jìn)行勻漿處理，即可均勻提取出阿斯巴甜，相比較國標(biāo)，去除了甲醇的使用，該處理方法快速環(huán)保，處理液也可以繼續(xù)上機(jī)做醬腌菜的其它添加劑指標(biāo)，大大節(jié)約了人力物力。

2.4 線性范圍、精密度和檢出限

在本實(shí)驗(yàn)色譜條件下對一系列不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列使用液進(jìn)行上機(jī)測定，以各組分的峰面積(A)對質(zhì)量濃度(C(μg/mL))繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性關(guān)系、相關(guān)系數(shù)、檢出限(RSN=3)和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表1。結(jié)果表明，阿斯巴甜在5～100 μg/mL范圍內(nèi)有良好線性，可以滿足定量分析的需要。

表1 線性關(guān)系、精密度和檢出限Table 1 Linearity, precision and detection limit

2.5 樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

筍制品和筍干制品各取適量陰性樣品制樣，做加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，各加3個(gè)濃度，每個(gè)濃度做3個(gè)平行，結(jié)果見表2。結(jié)果顯示該方法回收率范圍在94.2%～98.6%，RSD為1.39%，可以適用于日常筍制品中阿斯巴甜的檢測。

表2 陰性樣品加標(biāo)回收率Table 2 Recovery rate of negative sample

2.6 實(shí)際樣品的測定

隨機(jī)抽檢臨安地區(qū)上市的筍制品20個(gè)批次，其中阿斯巴甜檢出2個(gè)批次，較多檢出甜蜜素和糖精鈉，添加量都在GB 2760-2014規(guī)定的限量值以內(nèi)。

3 結(jié) 論

本方法測定筍制品中的阿斯巴甜，相對于國標(biāo)對阿斯巴甜的檢測，具有快速、節(jié)約、環(huán)保的優(yōu)點(diǎn)，處理液也可進(jìn)行其它添加劑指標(biāo)的測定，節(jié)省了人力物力。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明，該方法具有較好的線性和較高的準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度，能夠滿足筍制品的國內(nèi)市場監(jiān)管和進(jìn)出口檢測要求，此方法的應(yīng)用具有一定的實(shí)用價(jià)值。