馬潔瑤 ,史思林 ,羅貞貴 ,歐陽(yáng)敏 ,李凱琳 ,蔡 偉 ,,張?jiān)谄?△
(1.湖南醫(yī)藥學(xué)院·侗醫(yī)藥研究湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖南 懷化 418000; 2.湖南醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院,湖南 懷化 418000)
馬卡列丙Duhaldea nervosa(Wallich ex Candolle)A.Anderberg為菊科旋覆花屬顯脈旋覆花的全草,又稱小黑藥、毛秀才等,廣泛分布于中國(guó)湖南、貴州、云南、廣西等地,在印度、尼泊爾、越南、緬甸等也有分布[1-2]。其常被制成食品香料,是緩解風(fēng)濕和治療跌打損傷的民間藥物,尤其在促進(jìn)骨折愈合方面有較好的功效[3]。研究表明,馬卡列丙主要由甾類、萜烯類、綠原酸和揮發(fā)性成分[4-7]組成,而揮發(fā)性成分被認(rèn)為是主要的活性成分[8-10]。本研究中采用頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜(HS-SPME-GC-MS)聯(lián)用技術(shù)分析馬卡列丙根和莖的揮發(fā)性成分?,F(xiàn)報(bào)道如下。
Trace1300-ISQ型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Thermo Scientific 公司);Supelco 固相微萃取裝置、75 μm CAR/PDMS萃取纖維頭、4mL頂空瓶(美國(guó)Supelco公司)。
馬卡列丙Duhaldea nervosa干燥根和莖于2018年12月購(gòu)于云南,經(jīng)湖南醫(yī)藥學(xué)院侗醫(yī)藥研究湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室生藥學(xué)專家汪冶教授鑒定為正品,通過基原鑒定法、性狀鑒定法、顯微鑒定法鑒定為菊科顯脈旋覆花,根(編號(hào)為2018120401)和莖(編號(hào)為2018120402)標(biāo)本存于藥學(xué)院;C7-C30飽和烷烴(各組分含量為1000μg/mL,批號(hào)為L(zhǎng)RAC0353,Sigma-Aldrich公司)。
將75 μm CAR/PDMS固相微萃取纖維頭置氣相質(zhì)譜的進(jìn)樣口,300℃老化10 min;分別取馬卡列丙根、莖粉末10 mg,精密稱定,置4 mL頂空瓶中密封,固相微萃取頭插入密封的頂空瓶上部空間,65℃暴露30 min,吸收揮發(fā)物;將萃取頭抽出,迅速插入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)進(jìn)樣口,300℃解吸揮發(fā)性化合物5 min后拔出,檢測(cè)獲得馬卡列丙根莖揮發(fā)性成分的氣相色譜和質(zhì)譜信息。采用相同GC-MS條件檢測(cè)C7-C30正構(gòu)烷烴標(biāo)準(zhǔn)品,得正構(gòu)烷烴的氣相色譜和質(zhì)譜信息。
氣相色譜條件:色譜柱為TG-5MS型5%苯基二甲基聚硅氧烷毛細(xì)管色譜柱(30 m ×0.25 mm,0.25 μm);程序升溫,初始溫度50℃(保持3min),以2℃ /min的速率升溫至170℃(保持5 min),以10℃ /min的速率升溫至280℃(保持5 min);載氣為氦氣(純度為99.999%,流速為1 mL/min);進(jìn)樣口溫度保持300℃,分流比為50 ∶1。
質(zhì)譜條件:電子電離(EI)源;電子能量為70 eV;離子源溫度為280℃;傳輸線溫度為250℃;掃描質(zhì)量范圍為 40~620 amu。
從馬卡列丙的根和莖中分別鑒定出37種和38種化學(xué)成分,根據(jù)化合物色譜峰和C7-C30正構(gòu)烷烴標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時(shí)間計(jì)算保留指數(shù)(RI)[11],采用峰面積歸一化法計(jì)算馬卡列丙根和莖揮發(fā)性成分的相對(duì)含量,分別占87.65%和89.10%,詳見表1。與質(zhì)譜NIST17庫(kù)檢索匹配,對(duì)化合物色譜峰進(jìn)行分析與鑒定,詳見圖1。
圖1 總離子流圖
馬卡列丙根和莖中揮發(fā)性成分共檢出化合物43種,包括烯烴類18種,酯類8種,芳香族類4種,醚類3種,醇類2種,醛類2種,酚類2種,酸類1種,醌類1種,雜環(huán)類1種,硅烷類1種,與文獻(xiàn)[9-10]的報(bào)道揮發(fā)油主要成分基本一致。結(jié)果表明,馬卡列丙根和莖中的主要成分為 thymol,isobutyrate thymol和 thymol 2-methylbutanoate,這3個(gè)成分均有較好的抗炎和鎮(zhèn)痛作用[12-13]。對(duì)比根和莖,3種主成分在根中的百分含量均比莖中高。Thymol 2-methylbutanoate含量比文獻(xiàn)[11]報(bào)道的高,其主要原因可能是不同采收地點(diǎn)引起的。
表1 馬卡列丙的揮發(fā)性成分
采用HS-SPME-GC-MS聯(lián)用技術(shù)分析馬卡列丙的根和莖的揮發(fā)性成分,可為進(jìn)一步研究馬卡列丙的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)奠定基礎(chǔ)。