河南商丘地區(qū)豬偽狂犬病野毒感染和免疫情況調(diào)查

喬 波

（商丘市動物疫病預(yù)防控制中心，河南商丘 476000）

偽狂犬是由偽狂犬病毒（Psudorabies Virus，PRV）引起的一種急性、多種動物共患的、高度接觸性傳染病[1]。豬是PRV的傳染源和自然宿主，豬感染PRV后引起發(fā)熱、母豬流產(chǎn)、仔豬神經(jīng)癥狀、高死亡率，中大豬呼吸道癥狀等臨床表現(xiàn)[2]。我國將豬偽狂犬病列為二類動物傳染病，該病在我國廣泛存在，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失[3]。我國廣泛使用的Bartha株基因缺失疫苗為gE基因缺失，對經(jīng)典的PRV免疫保護(hù)效果較好，但隨著2011年后PRV強(qiáng)毒株出現(xiàn)，免疫保護(hù)效果明顯下降[4]。根據(jù)病毒基因遺傳進(jìn)化分析，PRV野毒株屬于基因Ⅱ型，而Bartha株屬于基因I型，所以如果疫苗中病毒效價(jià)沒有足夠高，就會因免疫交叉保護(hù)不足而失去保護(hù)效果[5]。

為了解河南商丘地區(qū)PRV野毒株感染情況和免疫情況，采集養(yǎng)殖場、屠宰企業(yè)和無害化處理廠樣品，檢測PRV野毒感染情況和免疫抗體水平，為本地區(qū)豬偽狂犬病的防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血清和組織樣品

樣品來自商丘地區(qū)部分規(guī)模養(yǎng)豬場、生豬屠宰企業(yè)和無害化處理廠，共23家養(yǎng)豬場，17家生豬屠宰企業(yè)和3家無害化處理廠。樣品分為兩部分：第一部分為養(yǎng)豬場生豬和生豬屠宰企業(yè)調(diào)運(yùn)的待宰生豬血液樣品，分離得到血清1518份。第二部分為生豬屠宰企業(yè)生豬和無害化處理廠病死豬組織樣品：采集肺臟、扁桃體、淋巴結(jié)、脾臟和肝臟等內(nèi)臟組織冷凍保存，研磨后取上清，共520份。采樣時(shí)間為2020年上半年，具體采樣情況見表1。

表1 樣品采集情況

1.2 血清學(xué)檢測方法

PRV野毒株抗體檢測使用gE 抗體鑒別診斷ELISA試劑盒，免疫抗體檢測使用gB-ELISA檢測試劑盒，試劑盒購自洛陽萊普生信息科技有限公司，具體操作按照試劑盒說明書。

1.3 病原學(xué)檢測方法

組織樣品檢測使用PRV（gE基因）實(shí)時(shí)熒光PCR檢測試劑盒，購自北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司。

2 檢測結(jié)果與分析

2.1 PRV gE抗體檢測結(jié)果

共檢測血清樣品1518份，其中9個種豬場和17個規(guī)模免疫豬場均免疫Bartha株疫苗。結(jié)果顯示：9個種豬場中有3個PRVgE抗體陽性，場點(diǎn)陽性率33.33%；17個免疫豬場中7個gE抗體陽性，場點(diǎn)陽性率41.18%；9個未免疫豬場中有5個gE抗體陽性，場點(diǎn)陽性率55.56%；17個生豬屠宰企業(yè)的17個批次待宰生豬中11批次gE抗體陽性，陽性率64.71%。種豬場的237份樣品中有77個gE抗體陽性，陽性率32.49%；免疫豬場的505份樣品中有112個gE抗體陽性，陽性率22.18%；未免疫場的266份樣品中有61個gE抗體陽性，陽性率22.93%；調(diào)運(yùn)的待宰生豬510頭有183個gE抗體陽性，陽性率35.88%。本地生豬1008份血清中g(shù)E抗體陽性250份，總體陽性率24.80%，結(jié)果見表2。

表2 PRV gE-ELISA檢測結(jié)果

2.2 免疫場PRV gB-ELISA檢測結(jié)果

17個免疫豬場的505份血清使用gB-ELISA和gE-ELISA檢測。結(jié)果，在17個免疫場中g(shù)B抗體陽性17個，場點(diǎn)陽性率100%，其中328份血清陽性，免疫抗體陽性率66.93%。與gE抗體檢測對比結(jié)果如表3。

表3 免疫豬場gE-EILISA和gB-ELISA檢測結(jié)果

2.3 組織樣品檢測結(jié)果

組織樣品520份，采用熒光PCR方法檢測，結(jié)果3份PRVgE基因陽性，分別為2份屠宰企業(yè)樣品和1份無害化處理廠樣品。結(jié)果如圖1。

圖1 組織樣品熒光PCR檢測擴(kuò)增曲線

3 討論

通過此次調(diào)查商丘地區(qū)當(dāng)前部分規(guī)模養(yǎng)豬場的PRV-gE抗體場點(diǎn)陽性率42.86%，低于屠宰企業(yè)調(diào)運(yùn)生豬的66.67%。豬偽狂犬病在本地規(guī)模養(yǎng)豬場中已經(jīng)得到高度重視，規(guī)模場普遍接種了疫苗，但免疫豬場個體免疫合格率不高，分析原因可能是隱性帶毒豬免疫效果不佳，或者豬場感染變異株影響免疫效果，也可能是免疫程序不合理。熒光PCR檢測結(jié)果顯示，周邊地區(qū)和本地豬群中已存在野毒株感染，陽性率較低可能是由于隱性感染和取樣部位病毒含量較低。

防控豬偽狂犬病最根本的措施是實(shí)施病源凈化，即“淘汰清群”方案，有條件的豬場可采用。對于大多數(shù)陽性豬場，可通過強(qiáng)化免疫，淘汰陽性種豬，培育或引進(jìn)陰性后備母豬群，逐步實(shí)現(xiàn)凈化。從檢測結(jié)果看，商丘地區(qū)仍需要采取積極地防控措施，有針對性的制定免疫程序，逐步實(shí)現(xiàn)場點(diǎn)凈化和區(qū)域凈化。