檢測(cè)抗繆勒氏管激素的方法學(xué)性能驗(yàn)證報(bào)告

張瑩 王曉芳 徐進(jìn)

【摘要】目的 分析康潤(rùn)公司的酶聯(lián)免疫法（ELISA）定量檢測(cè)抗繆勒氏管激素（anti-mullerian hormone，AMH）的方法學(xué)性能，評(píng)價(jià)其是否與試劑盒說(shuō)明書(shū)中性能質(zhì)量結(jié)果相一致。方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可準(zhǔn)則和美國(guó) CLIA88 性能驗(yàn)證文件，選取河南省人民醫(yī)院生殖中心患者血清，分別用羅氏E601型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀器和DS-2全自動(dòng)酶免疫儀檢測(cè)患者血清AMH水平，比較同一份標(biāo)本用兩種方法檢測(cè)的精密度、正確度、可報(bào)告范圍和線(xiàn)性范圍。結(jié)果 康潤(rùn)酶聯(lián)免疫法的抗繆勒氏管激素定量檢測(cè)試劑盒批內(nèi)精密度、批間精密度、正確度、可報(bào)告范圍和線(xiàn)性范圍等均符合要求。結(jié)論 康潤(rùn)公司的酶聯(lián)免疫法檢測(cè)AMH的試劑盒的性能較好，與試劑說(shuō)明書(shū)中性能質(zhì)量結(jié)果相一致，適用于開(kāi)展臨床應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】抗繆勒氏管激素、電化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法

【中圖分類(lèi)號(hào)】R122.1 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ? ?【文章編號(hào)】2107-2306（2020）03-278-02

抗繆勒氏管激素（anti-mullerian hormone，AMH）是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β（TGF-β）超家族中的二聚體糖蛋白，參與調(diào)節(jié)組織生長(zhǎng)和分化1，又稱(chēng)為繆勒氏管抑制物。在女性體內(nèi)，AMH主要由卵巢顆粒細(xì)胞分泌，于初級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞最早開(kāi)始表達(dá)，并持續(xù)整個(gè)卵泡的發(fā)育過(guò)程，AMH在卵巢的卵泡發(fā)育中發(fā)揮重要作用2。本研究探討電化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法定量檢測(cè)AMH結(jié)果的重復(fù)性、精密度、正確度、可報(bào)告范圍和線(xiàn)性區(qū)間，以滿(mǎn)足臨床檢測(cè)和認(rèn)可組織的要求，報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1一般資料隨機(jī)選取河南省人民醫(yī)院生殖中心患者血清。入選標(biāo)準(zhǔn)：按各性能指標(biāo)要求選入血清樣本，要求全部為新鮮血清樣本，選取的樣本檢測(cè)值盡量覆蓋全線(xiàn)性范圍，每例樣本需至少500μl，評(píng)估精密度的樣本需至少1000μl。避免溶血、脂血及黃疸樣本。本研究經(jīng)河南省倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 分別用羅氏E601型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀器及羅氏配套AMH試劑和DS-2全自動(dòng)酶免儀及廣州康潤(rùn)生物科技有限公司抗繆勒氏管激素（AMH）定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）檢測(cè)患者血清AMH水平，均按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.2.2批內(nèi)精密度分析：批內(nèi)精密度是指同一樣品的多個(gè)復(fù)管在一次測(cè)定中的重現(xiàn)性，變異系數(shù)（CV）小于10%。按照實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程，低值（L）、中值（M）AMH質(zhì)控品（或樣本）各1例，檢測(cè)2個(gè)水平的質(zhì)控品（或樣本），每個(gè)質(zhì)控品（或樣本）重復(fù)檢測(cè)20次，分別計(jì)算高低兩個(gè)濃度質(zhì)控品（或樣本）檢測(cè)的CV值，變異系數(shù)（CV）=標(biāo)準(zhǔn)差SD/均數(shù)x100%。

1.2.3批間精密度分析：批間精密度是指同一樣品在多批測(cè)定間的重現(xiàn)性，CV%小于15%。按照實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程，低值（L）、中值（M）AMH質(zhì)控品（或樣本）各1例，檢測(cè)2個(gè)水平的質(zhì)控品（或樣本），每個(gè)質(zhì)控品（或樣本）重復(fù)檢測(cè)4次，復(fù)孔檢測(cè)，連續(xù)檢測(cè)5日，分別計(jì)算高低兩個(gè)濃度質(zhì)控品（或樣本）檢測(cè)的CV值。

1.2.4 ?正確度驗(yàn)證：目前常用的正確度驗(yàn)證方法為統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)室參加室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)的成績(jī)，比較回報(bào)靶值和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算偏差及偏倚，絕對(duì)值后統(tǒng)計(jì)平均值平均偏倚《1/2，允許總誤差（TEa）。

1.2.5臨床可報(bào)告范圍：選用高限值（H）和低限值樣本（L），在已知線(xiàn)性區(qū)間內(nèi)選擇1個(gè)高濃度水平樣本和一個(gè)低濃度水平樣本，采用康潤(rùn)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)，已知低濃度樣本的檢測(cè)結(jié)果為0.06ng/mL，高濃度樣本的檢測(cè)結(jié)果為15.77ng/mL，按低濃度樣本與高濃度樣本以5：0、4：1、3：2、2：3、1：4、0：5的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)♂尯蟮臉?biāo)本分別編號(hào)為1、2、3、4、5、6，每個(gè)濃度水平的樣本重復(fù)測(cè)定2次，在1天之內(nèi)完成。將2次測(cè)定結(jié)果取平均值并與稀釋后的預(yù)期值相比較，采用線(xiàn)性回歸分析，理論值為Y，理論值為已知高低值根據(jù)倍比稀釋系數(shù)得出的數(shù)值，實(shí)測(cè)均值為X，均值為檢測(cè)值1和檢測(cè)值2的總和/2，得線(xiàn)性方程Y=aX+b。a為斜率，b為Y軸截距，R2為相關(guān)系數(shù)的平方，判斷其是否線(xiàn)性。

1.3 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)算精密度、多元方程、回歸系數(shù)等，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 ?結(jié)果

2.1 精密度

驗(yàn)證所得兩個(gè)濃度水平批內(nèi)CV%均小于廠家聲明的10%，批間CV%均小于廠家聲明的15%，表明該方法的精密度可達(dá)到要求。

2.2 ?正確度驗(yàn)證

2.3 ?根據(jù)預(yù)測(cè)值和實(shí)測(cè)均值繪制回歸曲線(xiàn)見(jiàn)圖1，R2=0.9957> 0.99，符合要求。

三、討論

3.1 AMH 參與調(diào)節(jié)卵泡的生長(zhǎng)與發(fā)育，對(duì)卵巢微環(huán)境產(chǎn)生影響，可用于評(píng)估女性生殖能力。AMH水平增高可反映非梗阻性無(wú)精子癥患者睪丸內(nèi)生殖細(xì)胞庫(kù)的耗竭，是睪丸外分泌功能整體受損的標(biāo)志3 。因此，檢測(cè)AMH的方法顯得尤為重要，本研究中，AMH分別應(yīng)用康潤(rùn)和羅氏的AMH試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，康潤(rùn)公司研發(fā)的AMH試劑盒采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定，羅氏公司研發(fā)的AMH試劑盒采用電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定。，本研究旨在評(píng)估康潤(rùn)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)AMH試劑盒的精密度、正確度、可報(bào)告范圍、線(xiàn)性范圍，是否與試劑說(shuō)明書(shū)中性能質(zhì)量結(jié)果相一致。

3.2結(jié)果顯示AMH 低、高濃度時(shí)，批內(nèi)精密度CV分別是2.64%和2.77%，批間精密度CV分別為7.8%和5.99%，電化學(xué)發(fā)光法的批內(nèi)CV%為2.77%和2.60%;批間CV%為5.56%和7.0%，均小于判定標(biāo)準(zhǔn)，表明兩種試劑盒方法的穩(wěn)定性和重復(fù)性良好，精密度屬于可接受范圍。正確度驗(yàn)證偏倚均小于 1/ 2Tea，表明該試劑盒檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。

3.3 按照NCCLS的EP-6A文件評(píng)價(jià)AMH的分析測(cè)量范圍，與羅氏電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行樣本一致性比對(duì)后，各自樣本均落在各自的參考區(qū)間內(nèi)，結(jié)果一致;線(xiàn)性評(píng)價(jià)中實(shí)測(cè)值與理論值相關(guān)性較好，根據(jù)預(yù)測(cè)值和實(shí)測(cè)均值繪制直線(xiàn)回歸曲線(xiàn)，相關(guān)系數(shù)R2=0.9957> 0.99，驗(yàn)證在試劑盒線(xiàn)性區(qū)間內(nèi)AMH在不同濃度時(shí)檢測(cè)結(jié)果與理論值呈線(xiàn)性分布，符合要求。

綜上所述，應(yīng)用康潤(rùn)公司AMH檢測(cè)試劑盒檢測(cè)AMH，精密度高，正確度好，具有良好的線(xiàn)性測(cè)量范圍，驗(yàn)證和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)符合，保證AMH檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠，可用于臨床AMH血清樣本的常規(guī)檢測(cè)，值得推廣應(yīng)用。

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