保存時間對庫存去白細胞懸浮紅細胞血液指標變化的影響

魏 蕾

（山東省血液中心，山東 濟南 250014）

近年來，隨著我國醫(yī)學(xué)系統(tǒng)的不斷完善，我國血液中心的血液調(diào)配系統(tǒng)也得到了有效完善，但是由于最近幾年我國醫(yī)療用血量的不斷增加，導(dǎo)致在供血、調(diào)配血液時容易發(fā)生季節(jié)性、區(qū)域性等血荒情況，尤其是在存儲血液時，血液保存時間的改變可導(dǎo)致白細胞懸浮紅細胞的質(zhì)量發(fā)生變化[1]。為了提高血液的保存效率，在制備樣本過程中，應(yīng)盡可能將血液成分的庫存時間延長。懸浮紅細胞在臨床中屬于紅細胞制劑的范疇，目前懸浮紅細胞已經(jīng)在臨床中被廣泛應(yīng)用。庫存去白細胞懸浮紅細胞制劑能夠為臨床患者進行紅細胞的有效補充，促進患者循環(huán)血量的有效增加，并促進患者血液攜氧能力的進一步提高。但庫存去白懸浮紅細胞的質(zhì)量會因為保存時間的不同而發(fā)生變化[2]。為了探討保存時間與庫存去白懸浮紅細胞質(zhì)量的關(guān)系，本研究旨在分析庫存去白細胞懸浮紅細胞在不同保存時間下，對其血液指標變化的影響。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在2020年2月至2020年4月這一時間段來實施研究，研究樣本從醫(yī)院庫存去白細胞懸浮紅細胞制品中抽取，共抽取80袋。

1.2 納入與排除標準 納入標準：①全部樣本均將CPDA-1作為保養(yǎng)液成分；②全部樣本在取樣過程中均運用無菌接駁機；③全部樣本均檢測合格。排除標準：①樣本存在風險；②樣本未進行相關(guān)檢測；③樣本取樣過程中存在不規(guī)范操作。

1.3 方法 ①借助一次性普通四聯(lián)血袋開展ACD-B抗凝全血的收集，共需收集80袋血樣，每袋血樣容量為200 mL，收集完成后，醫(yī)護人員將血袋放置在（4±2）℃冰箱中進行過夜處理。②在第2天對血樣進行離心處理，離心時間設(shè)置為10 min，離心速度為3000 r/min，將離心后的上層血漿完全去除，通過MAP的增加來進行懸浮紅細胞的制備。③在（4±2）℃的條件下，根據(jù)去白細胞濾器血袋規(guī)程開展相關(guān)過濾操作，過濾完成后可獲得去白細胞懸浮紅細胞。④去白懸浮紅細胞制作完成后，對其進行保存。醫(yī)護人員選擇0、7、14、21、28、35 d這6個時間點，對血樣進行有效的血細胞計數(shù)、2，3-二磷酸甘油酸（2，3-DPG）、電解質(zhì)、葡萄糖、游離血紅蛋白（FHb）、人紅細胞膜蛋白（EMP）與人三磷酸腺苷（ATP）等指標的檢測。采用血細胞分析儀 （日本廣電，MEK-7222K型）進行血細胞計數(shù)指標的有效檢測，采用電解質(zhì)分析儀 （國產(chǎn)奧迪康A(chǔ)C9802型）進行Cl-、pH、Na+、K+電解質(zhì)的有效檢測，采用全自動生化分析儀 （日本Sysmex公司，Sysmex-800型）進行葡萄糖的有效檢測，采用分光光度法對游離血紅蛋白進行有效檢測，采用ELISA法對2，3-DPG、ATP及EMP等指標的有效檢測。

1.4 觀察指標 本研究主要觀察樣本在保存了0、7、14、21、28、35 d后的血細胞計數(shù)、2，3-DPG、電解質(zhì)、葡萄糖、FHb、EMP與ATP等指標的情況。其中血細胞計數(shù)指標中包含有MCV、Hct、WBC、Hb與RBC，電解質(zhì)指標包含有Cl-、Na+、K+、pH。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0軟件分析上述指標，上述所有指標采用t檢驗，并以（）表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察血細胞計數(shù)指標在不同保存時間的情況 MCV、Hct、WBC、Hb與RBC在保存7、14、21、28、35 d的數(shù)值，與保存0 d的數(shù)值比較無明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 觀察電解質(zhì)指標在不同保存時間的情況 樣本中Cl-、Na+、pH隨保存時間的延長而下降，K+隨保存時間的延長而上升。見表2。

2.3 觀察FHb、葡萄糖、ATP、EMP與2，3-DPG在不同保存時間的情況 FHb與EMP隨著保存時間延長而提高，葡萄糖與2，3-DPG隨著保存時間延長而降低，ATP無統(tǒng)計學(xué)意義。見表3。

表1 觀察血細胞計數(shù)指標在不同保存時間的情況（）

表1 觀察血細胞計數(shù)指標在不同保存時間的情況（）

表2 觀察電解質(zhì)指標在不同保存時間的情況（）

表2 觀察電解質(zhì)指標在不同保存時間的情況（）

表3 觀察FHb、葡萄糖、ATP、EMP與2，3-DPG在不同保存時間的情況（）

表3 觀察FHb、葡萄糖、ATP、EMP與2，3-DPG在不同保存時間的情況（）

3 討論

輸血是指將篩選合格的血液通過靜脈輸血的方式為患者及時補充血容量，確?；颊呱眢w各項器官供血正常，由此可見，輸血在臨床醫(yī)學(xué)中具有重要作用。但是，在臨床輸血過程中，如果對血液樣本處理不當，會導(dǎo)致患者同種免疫性非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)及各種傳染病的發(fā)生，不僅起不到治療效果甚至還會危及患者生命[3]。王姣杰等[4]、史大川等[5]研究表明，血液中存在的白細胞是導(dǎo)致輸血失敗的根本原因之一，在處理血液制品時，需要對血液中的白細胞進行有效處理，通過去除白細胞等操作確保輸血質(zhì)量。在研究中發(fā)現(xiàn)，血液存儲時間不同對白細胞有一定的影響，因此，通過對不同存儲時間的血液樣本進行過濾、處理、檢測，并研究保存時間對庫存去白細胞懸浮紅細胞血液指標變化的影響，在臨床醫(yī)學(xué)中具有重要意義。近些年臨床血液成分分離機取得較好發(fā)展，成分制備技術(shù)也在持續(xù)發(fā)展中，血液成分制備逐漸往規(guī)范化、標準化與自動化的方向發(fā)展[6-7]。同時成分輸血近些年在臨床中取得較好的推廣效果，因為成分輸血存在純度高、治療效果優(yōu)、輸血不良癥狀較少、用血科學(xué)等優(yōu)勢，越來越多的臨床醫(yī)師開始接納疾病治療過程中運用成分輸血[8-9]。懸浮紅細胞的臨床定義是：在一個全封閉的環(huán)境中，對全血中大多數(shù)血漿進行有效分離，然后在紅細胞添加劑中增添分離后剩余的血漿，從而形成紅細胞成分血[10-12]。在制備過程中運用合理的方式過濾掉血液中的白細胞，形成去白細胞懸浮紅細胞，去白細胞懸浮紅細胞能夠避免輸血后出現(xiàn)某些不良反應(yīng)[13-14]。

上述研究表明，在血液制品中的白細胞可能會引起非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)、炎性并發(fā)癥等情況發(fā)生，為有效提高臨床用血率和醫(yī)療質(zhì)量，在對血液制品進行制備和保存時，一般可采用血站型濾器將血液制品中的白細胞和血小板基本去除后，通過保存紅細胞的方式進行存儲[15]。本文相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，血細胞計數(shù)指標在不同保存時間的情況基本沒有差異，雖然隨著保存時間的延長，紅細胞會存在不同程度的破壞現(xiàn)象，但是，MCV、Hct、WBC、Hb與RBC在保存7、14、21、28、35 d的數(shù)值，與保存0 d的數(shù)值無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。本文結(jié)果顯示，電解質(zhì)指標在不同保存時間下會發(fā)生一定的變化，樣本的Cl-、Na+、pH隨著保存時間的延長而下降，K+隨著保存時間的延長而上升，其原因可能與儲存的溫度、紅細胞逐漸衰老等因素有關(guān)。FHb、葡萄糖、ATP、EMP與2，3-DPG在不同保存時間下，發(fā)現(xiàn)FHb與EMP隨保存時間的延長而提高，葡萄糖與2，3-DPG隨保存時間的延長而降低，ATP無統(tǒng)計學(xué)意義，其原因可能是紅細胞在存儲過程中受到溫度、時間的影響，導(dǎo)致其濃度有所變化。本次研究的結(jié)果與張春榮等[16]的研究成果一致。

血液在完成離體反應(yīng)后，雖然會在血液中增加抗凝保養(yǎng)液等成分，但血液在完成收集、離心、分離、成分制備與儲存等操作后，血液紅細胞會受到一定的機械性損傷。同時血液外環(huán)境也會出現(xiàn)一定的變化，紅細胞在4 ℃環(huán)境下進行儲存，紅細胞的代謝水平會出現(xiàn)明顯下降，但紅細胞不會停止代謝。在長時間儲存中，紅細胞的結(jié)構(gòu)與功能均會出現(xiàn)較大變化，這就會對紅細胞的攜氧能力造成比較大的影響。臨床能夠應(yīng)用2，3-DPG含量對紅細胞釋放氧的能力進行評估，紅細胞中增多的2，3-DPG和Hb發(fā)生有效結(jié)合，能夠明顯有助于Hb的空間構(gòu)象保持穩(wěn)定，使Hb對氧氣的親和力顯著下降，Hb與氧氣盡快發(fā)生解離。當人體中的血液流經(jīng)組織的時候，紅細胞中2，3-DPG增多可以使氧氣的釋放量得到進一步增多。EMP與FHb指標能夠?qū)t細胞膜損傷以及溶血情況進行合理評估，ATP、葡萄糖、K+、Na+指標能夠?qū)t細胞的能量代謝情況進行合理評估[17-18]。

葡萄糖在血液保存液中具有十分重要的作用，其在紅細胞中能夠發(fā)揮營養(yǎng)保護作用。紅細胞在進行代謝的時候，其ATP會持續(xù)減少，為了確保紅細胞在儲存環(huán)節(jié)中能夠有足夠的能量供應(yīng)，可以借助無氧酵解葡萄糖來獲得足夠的ATP能量，使患者機體生理功能能夠得到良好維持。無氧酵解消耗了一部分葡萄糖，導(dǎo)致血液中的葡萄糖濃度會明顯降低，同時無氧酵解反應(yīng)還會形成乳酸，在一定程度上促進了血液酸性的增加，使得血液pH值發(fā)生明顯降低。紅細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、胞外酸堿度、細胞膜流動特性、細胞膜變形能力與血紅蛋白攜氧能力之間存在著較為緊密的聯(lián)系，紅細胞流變學(xué)特性在出現(xiàn)變化時，會對其體內(nèi)攜氧功能造成一定影響[19-20]。如果紅細胞的胞外pH值達不到6.3時，則會導(dǎo)致紅細胞膜曲率為負數(shù)，導(dǎo)致細胞形態(tài)與細胞膜流變學(xué)特性均會受到一定影響。如果保養(yǎng)液的pH值能夠達到6.8或超過6.8，則能夠說明紅細胞存在著良好的微黏度與偏振度，同時還存在著良好的流動性。若紅細胞外pH值達不到6.8，則會使紅細胞膜形態(tài)出現(xiàn)一定的變化，同時還會出現(xiàn)細胞聚集的情況。本次研究中的pH值隨著保存時間的延長而不斷下降，保存35 d后的pH值處在6.3～6.8，這表明保存時間會對紅細胞的攜氧功能造成影響。Hb對氧親和力發(fā)生一定變化，能夠幫助2，3-DPG進行Hb氧釋放的調(diào)節(jié)，紅細胞中的2，3-DPG含量出現(xiàn)持續(xù)降低，這說明紅細胞釋放氧的能力在不斷下降[21]。

紅細胞膜與膜蛋白發(fā)生損傷后，且葡萄糖在細胞中不斷被消耗后，ATP供能會發(fā)生明顯減少。ATP的減少會對K+、Na+濃度產(chǎn)生一定影響，且ATP酶功能還不能夠取得正常發(fā)揮，使得細胞內(nèi)K+會出現(xiàn)逸出的情況，導(dǎo)致細胞外K+濃度出現(xiàn)持續(xù)上升的情況。隨著保存時間的延長，紅細胞膜的脆性會不斷下降，此時紅細胞膜會出現(xiàn)程度不一的損傷，F(xiàn)Hb與EMP會在紅細胞外懸浮液中進行有效釋放，所以FHb與EMP的濃度會出現(xiàn)升高。本研究結(jié)果數(shù)據(jù)表明，ATP濃度初始呈現(xiàn)為上升趨勢，但14 d后，ATP濃度又開始發(fā)生下降，這主要是因為成熟紅細胞通過無氧酵解作用生成ATP，生成的ATP能夠幫助保持離子平衡 。與王紅蘋和夏培元[22]報道相一致。

綜上所述，庫存去白細胞懸浮紅細胞的血細胞指數(shù)不會隨保存時間的變化而發(fā)生變化，在不同保存時間下，血液中的血細胞計數(shù)不會發(fā)生明顯變化，Cl-、Na+、pH、葡萄糖與2，3-DPG隨著保存時間的延長而下降，K+、FHb與EMP隨著保存時間的延長而上升[22-23]。因此，臨床可借助血液指標的變化來合理評估保存時間。