基于SDF-1/CXCR4信號(hào)軸研究肺復(fù)方對(duì)肺癌A549細(xì)胞侵襲能力的影響

譚小寧，朱克儉，蔣益蘭，羅吉，羅燕，呂元，馬思靜，李勇敏

基于SDF-1/CXCR4信號(hào)軸研究肺復(fù)方對(duì)肺癌A549細(xì)胞侵襲能力的影響

譚小寧，朱克儉，蔣益蘭，羅吉，羅燕，呂元，馬思靜，李勇敏

湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，中醫(yī)腫瘤學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，抗腫瘤中藥創(chuàng)新平臺(tái)，湖南 長(zhǎng)沙 410006

觀察肺復(fù)方對(duì)肺癌A549細(xì)胞侵襲能力的影響，從SDF-1/CXCR4生物軸調(diào)控角度探討其作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)分為空白血清組（正常血清培養(yǎng)基）和肺復(fù)方低、中、高劑量組（分別加入5%、10%、15%肺復(fù)方藥物血清培養(yǎng)基），各組加入基質(zhì)衍生因子1（SDF-1）處理48 h，Transwell檢測(cè)A549細(xì)胞侵襲能力，Western blot檢測(cè)A549細(xì)胞SDF-1特異受體CXCR4、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、p-Akt、E-鈣黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）蛋白表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)A549細(xì)胞E-cadherin、Vimentin和CXCR4基因表達(dá)。與空白血清組比較，肺復(fù)方低、中、高劑量組A549細(xì)胞體外侵襲能力明顯下降（＜0.01）；與空白血清組比較，肺復(fù)方低、中、高劑量組A549細(xì)胞CXCR4、PI3K、Akt、p-Akt和Vimentin蛋白表達(dá)均有一定程度下降，E-cadherin蛋白表達(dá)上調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05，＜0.01），肺復(fù)方低、中、高劑量組A549細(xì)胞CXCR4、Vimentin mRNA表達(dá)下調(diào)，肺復(fù)方中、高劑量組A549細(xì)胞E-cadherin mRNA表達(dá)上調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05，＜0.01）。肺復(fù)方能抑制A549細(xì)胞侵襲能力、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化進(jìn)程，其作用機(jī)制可能與SDF-1/CXCR4生物軸調(diào)控PI3K-Akt通路有關(guān)。

肺癌；肺復(fù)方；SDF-1/CXCR4生物軸；上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化；A549細(xì)胞

統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，肺癌是我國(guó)發(fā)病率、死亡率第一的癌癥[1]。非小細(xì)胞肺癌（non small cell lung cancer，NSCLC）最為常見(jiàn)，約占所有肺癌的85%，NSCLC分為腺癌、鱗癌和大細(xì)胞癌3種類(lèi)型，由于缺乏特征性癥狀，大部分NSCLC患者在確診時(shí)己屬中晚期，常失去手術(shù)機(jī)會(huì)[2]。肺癌轉(zhuǎn)移是致死的主要原因之一，腫瘤微環(huán)境是腫瘤細(xì)胞的生存場(chǎng)所，在促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移中具有關(guān)鍵作用，腫瘤微環(huán)境中基質(zhì)細(xì)胞能旁分泌大量細(xì)胞因子促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[3]。腫瘤微環(huán)境中基質(zhì)細(xì)胞分泌趨化因子CXCL12又稱(chēng)基質(zhì)衍生因子-1（SDF-1）[4]，其受體CXCR4在正常組織低表達(dá)，在肺腺癌組織高表達(dá)，高表達(dá)CXCR4肺癌患者更易發(fā)生轉(zhuǎn)移[5-6]。中醫(yī)藥能改善肺癌患者癥狀、長(zhǎng)期穩(wěn)定腫塊、一定程度上防治肺癌的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移，達(dá)到延長(zhǎng)生存期的目的[7-8]。湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院經(jīng)驗(yàn)方肺復(fù)方長(zhǎng)期臨床應(yīng)用表明，其能延長(zhǎng)肺癌患者生存期，提高患者生活質(zhì)量，減輕臨床癥狀[9-10]。本研究采用高表達(dá)CXCR4受體的肺腺癌A549細(xì)胞，從SDF-1/CXCR4生物軸調(diào)控角度探討肺復(fù)方對(duì)A549轉(zhuǎn)移能力的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 細(xì)胞株

人肺癌A549細(xì)胞，購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)，目錄號(hào)TCHu150。

1.2 動(dòng)物

雄性SD大鼠50只，SPF級(jí)，體質(zhì)量180～200 g，湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)43004700029438。動(dòng)物飼養(yǎng)于湖南省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，溫度22～26 ℃、相對(duì)濕度40%～70%，自由攝食飲水。

1.3 藥物

肺復(fù)方[白參（蒸兌）10 g，茯苓10 g，靈芝10 g，黃芪20 g，法半夏9 g，川貝母8 g，麥冬10 g，百合 15 g，枸杞子10 g，白芍10 g，桔梗10 g，三七粉3 g，臭牡丹20 g，半枝蓮20 g，白花蛇舌草20 g，甘草5 g]，飲片均購(gòu)自湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院中藥房，并由制劑科按比例水煎濃縮后制成膏劑，按臨床等效劑量配制成含原藥材1.7 g/mL。

1.4 主要試劑與儀器

RPMI培養(yǎng)基（Hyclone公司，批號(hào)AD18379269），0.25%胰蛋白酶（Hyclone公司，批號(hào)SH30042），PBS（Hyclone公司，批號(hào)AC12557265），胎牛血清（美國(guó)Gibco公司，批號(hào)1640958），ECL發(fā)光液（Thermo，批號(hào)SF249787B），磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K，貨號(hào)20584-1-AP）、蛋白激酶B（Akt，貨號(hào)60203-2-Ig）、p-Akt（貨號(hào)66444-1-AP）、E-鈣黏蛋白（E-cadherin，貨號(hào)20874-1-AP）、波形蛋白（Vimentin，貨號(hào)10366-1-AP）、CXCR4（貨號(hào)11073-1-AP）、β-actin（貨號(hào)60008-1-Ig）均購(gòu)自Proteintech公司，SDF-1（美國(guó)R&D公司，350-NS-010），Transwell小室（Costar 3422，24孔，孔徑8.0 μm）cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Takara公司，批號(hào)RR047A），SYBR Green PCR試劑盒（Takara公司，批號(hào)RR820A）?；瘜W(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（GENE公司，型號(hào)G：BOX ChemiXRQ），熒光正置顯微鏡（德國(guó)Leica公司，型號(hào)DM4000），二氧化碳孵箱（美國(guó)Thermo Fisher，型號(hào)3141型），高速離心機(jī)（盧湘儀，型號(hào)TGL-18M），微量核酸蛋白濃度分析儀（英國(guó)BioDrop公司，型號(hào)BioDrop Duo），電泳儀（美國(guó)Bio-Rad，型號(hào)powerpac），轉(zhuǎn)膜儀（美國(guó)Bio-Rad公司，型號(hào)Mini Trans-Blot C），超凈工作臺(tái)（美國(guó)Thermo Fisher，型號(hào)Heraguard EC），熒光定量PCR儀（ROCHE，F(xiàn)AST480Ⅱ型）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 藥物血清制備

實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，隨機(jī)分為空白組和給藥組。給藥組給予肺復(fù)方膏劑10 mL/kg灌胃，按臨床等效劑量2倍，每日2次，連續(xù)3 d?？瞻捉M給予等量生理鹽水灌胃。末次給藥1 h后，腹腔注射10%水合氯醛（3 mL/kg）麻醉，腹主動(dòng)脈取血，靜置，3500 r/min離心10 min，取上清液，56 ℃滅活30 min，用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，置于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。同時(shí)以生理鹽水制備正常大鼠血清作對(duì)照。

2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組

A549細(xì)胞用含10%FBS RPMI培養(yǎng)基，于5%CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分為空白血清組（正常血清培養(yǎng)基）和肺復(fù)方低、中、高劑量組（分別加入5%、10%、15%肺復(fù)方藥物血清培養(yǎng)基），用大鼠正常血清配制成15%血清培養(yǎng)體系，每組加100 ng/mL SDF-1處理48 h。

2.3 Transwell檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力

Matrigel與無(wú)血清培養(yǎng)基按1∶2稀釋后每個(gè)小室鋪膠60 μL，置于37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)60 min使膠凝固，制備Transwell小室，然后每個(gè)小室加70 μL基礎(chǔ)培養(yǎng)基，37 ℃、30 min水化基底膜。將A549細(xì)胞用無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含5 g/L BSA）制成A549細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105/mL，吸取100 μL加至小室上室內(nèi)，下室加入含10%FBS完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h。棄去小室內(nèi)培養(yǎng)液，用濕棉簽擦盡上室面Matrigel和細(xì)胞，甲醇固定30 min，用0.5%結(jié)晶紫染色5 min，倒置顯微鏡下觀察并拍照。

2.4 Western blot檢測(cè)CXCR4、PI3K、p-Akt、E-cadherin、Vimentin蛋白表達(dá)

收集A549細(xì)胞，加200 μL RIPA裂解液和1%PMSF提取細(xì)胞總蛋白，BCA法蛋白定量后上樣SDS-PAGE電泳，PVDF轉(zhuǎn)膜，5%BSA封閉60 min，剪取對(duì)應(yīng)蛋白條帶，分別加入CXCR4（兔抗，稀釋比1∶1000）、PI3K（兔抗，稀釋比1∶1000）、p-Akt（兔抗，稀釋比1∶1000）、E-cadherin（兔抗，稀釋比1∶1000）、Vimentin（兔抗，稀釋比1∶2000）和β-actin（鼠抗，稀釋比1∶2500）一抗，4 ℃過(guò)夜，TBS-T沖洗3次×5 min，將稀釋后的二抗（用封閉液稀釋HRP標(biāo)記的二抗，稀釋比例1∶5000，二抗兔抗與一抗兔抗，二抗鼠抗與一抗鼠抗對(duì)應(yīng)）與膜共同孵育2 h，TBS-T沖洗3次×5 min，ECL顯影。將各條帶用Image J軟件進(jìn)行灰度掃描，并以β-actin為內(nèi)參計(jì)算各組平均值。

2.5 RT-PCR檢測(cè)E-cadherin、Vimentin、CXCR4 mRNA表達(dá)

收集A549細(xì)胞，提取總RNA，BCA法測(cè)定濃度，按反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行RNA反轉(zhuǎn)錄cDNA，反轉(zhuǎn)錄條件：37 ℃、30 min，85 ℃、20 s。然后以cDNA以模板，β-actin為內(nèi)參基因，SYBR Green PCR試劑盒擴(kuò)增E-cadherin、Vimentin和CXCR4，擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃變性5 s，59 ℃退火30 s，共45個(gè)循環(huán)。每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量。基因引物序列見(jiàn)表1。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

表1 PCR各基因引物序列

基因名稱(chēng)引物序列（5’～3’）產(chǎn)物長(zhǎng)度/bp E-cadherinF：CTACAACGCTGCCATCGCCTA267 R：ACTTGACCCTGATACGTGCTT VimentinF：GTCCACACGCACCTACAGTCT 159 R：AAGTCCACCGAGTCTTGAAGC CXCR4F：TCTGTGACCGCCTTTACCC269 R：ACATCCTTGCTTGATGACCC β-actinF：ACCCTGAAGTACCCCATCGAG224 R：AGCACAGCCTGGATAGCAAC

4 結(jié)果

4.1 肺復(fù)方對(duì)A549細(xì)胞侵襲能力的影響

采用鋪有人工基底膜Matrigel的Transwell小室，模擬腫瘤細(xì)胞穿過(guò)血管基底膜的過(guò)程，用穿膜細(xì)胞多少反映腫瘤細(xì)胞體外侵襲能力。與空白血清組比較，肺復(fù)方低、中、高劑量組A549細(xì)胞侵襲數(shù)顯著下降（＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組A549細(xì)胞侵襲能力比較（±s，個(gè)）

注：與空白血清組比較，**＜0.01

4.2 肺復(fù)方對(duì)A549細(xì)胞CXCR4、E-cadherin、Vimentin、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表達(dá)的影響

與空白血清組比較，肺復(fù)方低、中、高劑量組A549細(xì)胞CXCR4、Vimentin、PI3K、Akt和p-Akt蛋白表達(dá)均一定程度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05，＜0.01），E-cadherin蛋白表達(dá)明顯上調(diào)（＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)圖1、表3。

注：1.空白血清組；2.肺復(fù)方低劑量組；3.肺復(fù)方中劑量組；4.肺復(fù)方高劑量組

表3 各組A549細(xì)胞CXCR4、E-cadherin、Vimentin、PI3K、Akt和p-Akt蛋白表達(dá)比較（±s）

注：與空白血清組比較，*＜0.05，**＜0.01

4.3 肺復(fù)方對(duì)A549細(xì)胞CXCR4、E-cadherin、Vimentin mRNA表達(dá)的影響

與空白血清組比較，肺復(fù)方低、中、高劑量組A549細(xì)胞CXCR4、Vimentin mRNA表達(dá)明顯降低，（＜0.05，＜0.01），肺復(fù)方高、中劑量組A549細(xì)胞E-cadherin mRNA表達(dá)明顯升高（＜0.01），肺復(fù)方低劑量組A549細(xì)胞E-cadherin mRNA表達(dá)變化不明顯（＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 各組A549細(xì)胞CXCR4、E-cadherin、Vimentin mRNA表達(dá)比較（±s）

注：與空白血清組比較，*＜0.05，**＜0.01

5 討論

肺癌屬中醫(yī)學(xué)“肺積”“肺巖”“息賁”“虛勞”等范疇。中醫(yī)認(rèn)為“肺為貯痰之器”，《太平圣惠方》“夫痰毒者，由肺臟壅熱，過(guò)飲水漿，積聚胸膈，冷熱之氣相搏，結(jié)實(shí)不消……皆由痰毒壅滯也”。蔣益蘭教授認(rèn)為肺癌發(fā)病機(jī)制為正氣先虛，邪毒乘虛而入，使肺氣閉郁，宣降失司，氣機(jī)不暢，氣滯血瘀，肺絡(luò)受阻，津液輸布不利，壅結(jié)為痰，瘀痰交阻，日久成積。本病以正虛為本，邪實(shí)為標(biāo)，虛以氣陰兩虛、脾腎虛弱最為常見(jiàn)，實(shí)則不外氣滯、血瘀、痰凝、毒聚。肺復(fù)方中白參、黃芪、靈芝、茯苓益氣健脾，培土生金；麥冬、百合、白芍養(yǎng)陰潤(rùn)肺；川貝母、桔梗、法半夏化痰宣肺，升降相因；臭牡丹、半枝蓮、白花蛇舌草清熱解毒，軟堅(jiān)散結(jié)，并制白參、黃芪、法半夏溫?zé)嶂?；腎主骨生髓，肝腎同源，枸杞子補(bǔ)益肝腎；三七活血化瘀；甘草調(diào)和諸藥。全方共達(dá)益氣養(yǎng)陰、清熱解毒、化痰散瘀、軟堅(jiān)散結(jié)、攻補(bǔ)兼施之功。

前期研究表明，肺復(fù)方對(duì)Lewis肺癌裸鼠移植瘤具有抑瘤作用及抗血管生成作用[11]，提示肺復(fù)方對(duì)肺癌生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移有一定作用。有研究顯示，腫瘤細(xì)胞大多通過(guò)與炎性細(xì)胞浸潤(rùn)相似的機(jī)制參與腫瘤的進(jìn)展和侵襲轉(zhuǎn)移，細(xì)胞浸潤(rùn)過(guò)程需趨化因子信號(hào)途徑調(diào)控[12-13]。CXCR4是唯一廣泛表達(dá)于多種腫瘤細(xì)胞表面的趨化因子受體，臨床上CXCR4高表達(dá)明顯促進(jìn)肺癌惡性進(jìn)展[14]，CXCR4是由352個(gè)氨基酸組成的具有跨膜結(jié)構(gòu)的G蛋白偶聯(lián)受體。基質(zhì)細(xì)胞衍生因子SDF-1與腫瘤細(xì)胞上的CXCR4結(jié)合后能激活異源三聚體G蛋白，Gβγ直接結(jié)合PI3K調(diào)節(jié)亞基以活化PI3K，通過(guò)PIP3的二級(jí)信使作用激活下游信號(hào)分子Akt，Akt磷酸化，最終通過(guò)PI3K/Akt途徑發(fā)揮促腫瘤轉(zhuǎn)移作用[15]。

研究表明，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是腫瘤轉(zhuǎn)移的一大特征，與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[16]。此過(guò)程中上皮細(xì)胞失去極性而細(xì)胞間黏附能力下降，同時(shí)獲得間質(zhì)細(xì)胞表型以及運(yùn)動(dòng)和侵襲能力，表現(xiàn)為細(xì)胞表面上皮標(biāo)志物E-cadherin下調(diào)，間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin上調(diào)。PI3K/Akt信號(hào)通路是EMT的常見(jiàn)通路之一，有研究證實(shí)激活的PI3K誘導(dǎo)其下游信號(hào)分子Akt磷酸化，促進(jìn)EMT[17]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，A549細(xì)胞加入SDF-1后SDF-1/CXCR4生物軸活化，模擬肺癌微環(huán)境中基質(zhì)細(xì)胞分泌SDF-1作用于腫瘤細(xì)胞，設(shè)置5%、10%、15%肺復(fù)方藥物血清處理A549細(xì)胞后，肺復(fù)方各劑量組較空白血清組均能下調(diào)CXCR4和PI3K、p-Akt蛋白表達(dá)，上調(diào)E-cadherin表達(dá)，間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin下調(diào)明顯，同時(shí)肺復(fù)方中、高劑量組能降低CXCR4、Vimentin的mRNA表達(dá)，升高E-cadherin 的mRNA表達(dá)?；赟DF-1/CXCR4生物軸下游信號(hào)傳導(dǎo)通路之一是PI3K-Akt信號(hào)通路，PI3K-Akt通路是影響EMT的通路之一，本研究結(jié)果表明，肺復(fù)方抑制肺癌轉(zhuǎn)移與通過(guò)下調(diào)A549 CXCR4蛋白和mRNA表達(dá)，一定程度上使SDF-1/CXCR4生物軸失活，抑制PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路活化，抑制EMT進(jìn)程有關(guān)。肺復(fù)方通過(guò)調(diào)控SDF-1/CXCR4生物軸抑制肺癌侵襲轉(zhuǎn)移是直接還是間接通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路，抑制EMT進(jìn)程是否還存在其他信號(hào)通路，需要將PI3K/Akt信號(hào)通路激活或抑制后作進(jìn)一步研究。

[1] 王寧,劉碩,楊雷,等.2018全球癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告解讀[J].腫瘤綜合治療電子雜志,2019,5(1)：87-97.

[2] MILLER K D, SIEGEL R L, LIN C C, et al. Cancer treatment and survivorship statistics, 2016[J]. CA A Cancer Journal for Clinicians,2016,66(4)：271-289.

[3] FANG T, LV H, LV G, et al. Tumor-derived exosomal miR-1247-3p induces cancer-associated fibroblast activation to foster lung metastasis of livercancer[J]. Nat Commun,2018,9(1)：191.

[4] GIL M, SESHADRI M, KOMOROWSKI M P, et al. Targeting CXCL12/CXCR4 signaling with oncolytic virotherapy disrupts tumor vasculature and inhibits breast cancer metastases[J]. Proc Natl Acad Sci USA,2013,110(14)：E1291-E1300.

[5] YU T, WU Y Y, HELMAN J I, et al. CXCR4 promotes oral squamous cell carcinoma migration and invasion through inducing expression of MMP-9 and MMP-13 via the ERK signaling pathway[J]. Molecular Cancer Research：MCR,2011,9(2)：161-172.

[6] FUKUNAGA S, MAEDA K, NODA E, et al. Association between expressioni of vascuLar endothelial growth factor C, chemokine receptor CXCR4 and lymph node metastasis in colorectal cancer[J]. Oncology,2006,71(3)：204-211.

[7] 黃爭(zhēng)榮,林浩,林錦培,等.益胃化濁湯對(duì)肺癌患者化療后免疫功能及細(xì)胞因子水平的影響[J].光明中醫(yī),2019,34(22)：3390-3392.

[8] 封佳莉,李和根,周曉輝,等.中醫(yī)藥干預(yù)874例晚期非小細(xì)胞肺癌的生存分析[J].安徽中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2019,38(6)：10-14.

[9] 蔣益蘭,潘敏求,蔡美.肺復(fù)方治療中晚期老年非小細(xì)胞肺癌多中心臨床研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,35(10)：712-720.

[10] 侯公瑾,蔣益蘭.肺復(fù)方聯(lián)合化癥回生口服液對(duì)晚期老年非小細(xì)胞肺癌患者PFS及生存率的影響[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2014,20(4)：7-9.

[11] 章慧,沈慧蕓,王億君.肺復(fù)方對(duì)Lewis肺癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用及抗血管生成的機(jī)制研究[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2015,12(6)：111-114.

[12] ARVELO F, SOJO F, COTTE C. Tumour progression and metastasis[J]. Ecancermedical Science,2016,10：617.

[13] SELMA R F, ALFONSO S A, SILVANA P B, et al. Role of chemokines in nonsmall cell lung cancer：angiogenesis and inflammation[J]. J Cancer,2015,6(10)：938-952.

[14] ZHU Q, LUO R, GU J, et al. High CXCR4 expression predicts a poor prognosis in resected lung adenosquamous carcinoma[J]. J Cancer,2020,11(4)：810-818.

[15] SOBOLIK T, SU Y J, WELLS S, et al. CXCR4 drives the metastatic phenotype in breast cancer through induction of CXCR2 and activation of MEK and PI3K pathways[J]. Mol Biol Cell,2014,25(5)：566-582.

[16] XU W T, YANG Z, LU N H. A new role for the PI3K/Akt signaling pathway in the epithelial-mesenchymal transition[J]. Cell Adh Migr,2015,9(4)：317-324.

[17] ZHU W B, XIAO N, LIU X J. Dietary flavonoid tangeretin induces reprogramming of epithelial to mesenchymal transition in prostate cancer cells by targeting the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway[J]. Oncol Lett,2018,15(1)：433-440.

Effects ofon Lung Cancer A549 Cells Invasion Based on SDF-1/CXCR4 Axis

TAN Xiaoning, ZHU Kejian, JIANG Yilan, LUO Ji, LUO Yan, LYU Yuan, MA Sijing, LI Yongmin

To observe the effects ofon the invasion ability of lung cancer A549 cells; To explore the mechanism of action from the perspective of SDF-1/CXCR4 biological axis regulation.The experiment was divided into blank serum group (normal serum medium) andlow-, medium-, and high-dosage groups (adding 5%, 10% and 15%serum medium respectively). Each group was treated with matrix derived factor 1 (SDF-1) for 48 h. Transwell was used to detect the invasion ability of A549 cells. Western Blot was used to detect the expressions of SDF-1 specific receptor CXCR4, phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K), protein kinase B (Akt), p-Akt, E-cadherin and Vimentin in each group. The gene expression levels of E-cadherin, Vimentin and CXCR4 were detected by RT-PCR.Compared with the blank serum group, the invasion ability of A549 cells inlow-, medium- and high-dosage groups was significantly reduced (<0.01). Compared with the blank serum group, the protein expressions of CXCR4, PI3K, Akt, p-Akt and Vimentin of A549 cells in thelow-, medium- and high-dosage groups all decreased to a certain extent, and the protein expression of E-cadherin was up-regulated, with statistical significance (<0.05,<0.01); the mRNA expressions of CXCR4 and Vimentin in A549 cells were down-regulated inlow-, medium-, and high-dosage groups, while the expression of E-cadherin mRNA in A549 cells inmedium- and high-dosage groups was up-regulated, with statistical significance (<0.05,<0.01).can inhibit the invasion ability and the epithelial-mesenchymal transition process of A549 cells, and the mechanism may be related to the biological axis regulation of SDF-1/CXCR4 on PI3K/Akt pathway.

lung cancer;; SDF-1/CXCR4 biological axis; epithelial-mesenchymal transition; A549 cell

R285.5

A

1005-5304(2020)09-0058-05

10.3969/j.issn.1005-5304.202003132

國(guó)家自然科學(xué)基金（81503452、81803787）；湖南省中醫(yī)藥研究院重點(diǎn)項(xiàng)目（201804）

李勇敏，E-mail：lym0937@126.com

（2020-03-05）

（2020-03-19；編輯：華強(qiáng)）