• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    健脾理肺通便方治療功能性便秘療效及對(duì)腸道菌群的影響

    2020-10-14 06:36:38蔣天媛張秋云劉紹能張榮王東方張易從劉瑞華周文強(qiáng)
    關(guān)鍵詞:桿菌屬雙歧菌群

    蔣天媛,張秋云,劉紹能,張榮,王東方,張易從,劉瑞華,周文強(qiáng)

    論著·臨床研究

    健脾理肺通便方治療功能性便秘療效及對(duì)腸道菌群的影響

    蔣天媛1,張秋云1,劉紹能2,張榮2,王東方2,張易從2,劉瑞華2,周文強(qiáng)2

    1.首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院,北京 100069;2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院,北京 100053

    觀察健脾理肺通便方治療功能性便秘(FC)脾肺氣虛、胃腸氣滯證的療效,以及對(duì)患者腸道菌群的影響。選取2019年4-12月中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院脾胃病科門(mén)診FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證患者20例,口服健脾理肺通便方4周。記錄治療前后患者便秘癥狀分級(jí)、中醫(yī)癥狀評(píng)分;留取治療前后新鮮糞便樣本,基于16S rRNA細(xì)菌檢測(cè)技術(shù)鑒定腸道菌群,采用生物信息學(xué)分析方法對(duì)患者治療前后糞便樣本進(jìn)行測(cè)序評(píng)估與物種注釋分析、群落組成分析、組間差異性檢驗(yàn)及LEfSe多級(jí)物種差異判別分析。通便療效臨床痊愈率為50.00%(10/20),中醫(yī)療效臨床痊愈率為45.00%(9/20)。與治療前比較,患者各項(xiàng)中醫(yī)癥狀評(píng)分下降(<0.05)。測(cè)序后獲得1 687 426條有效序列,經(jīng)聚類(lèi)分析,治療前后分別有76、119個(gè)特征OTUs;治療前特征性物種在科水平為T(mén)annerellaceae和氣球菌科Aerococcaceae,在屬水平為志賀菌屬Escherichia-Shigella、副擬桿菌屬Parabacteroides、Odoribacter、Lachnospiraceae_FCS020_group、Eubacterium_brachy_group(LDA>2),其中LDA分值最高的物種為志賀菌屬Escherichia-Shigella(LDA=4.25)。治療后的特征性物種,在目水平為雙歧桿菌目Bifidobacteriales,在科水平為雙歧桿菌科Bifidobacteriaceae、紅蝽?xiàng)U菌科Coriobacteriaceae、腸球菌科Enterococcaceae,在屬水平有雙歧桿菌屬Bifidobacterium、柯林斯菌屬Collinsella、Fusicatenibacter、腸球菌屬Enterococcus、鏈球菌屬Streptococcus(LDA>2),其中LDA分值最高的物種為雙歧桿菌屬Bifidobacterium(LDA=4.17)。健脾理肺通便方可明顯改善FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證患者便秘情況,并可調(diào)節(jié)腸道菌群,治療后志賀菌屬Escherichia-Shigella豐度降低,雙歧桿菌屬Bifidobacterium豐度升高。

    健脾理肺通便方;功能性便秘;脾肺氣虛;胃腸氣滯;腸道菌群;臨床研究

    功能性便秘(functional constipation,F(xiàn)C)臨床以排便間隔延長(zhǎng)、排便費(fèi)力、便質(zhì)干硬、大便黏滯等為主要表現(xiàn),且無(wú)器質(zhì)性病變,可見(jiàn)于各個(gè)年齡段[1]。長(zhǎng)期便秘可導(dǎo)致口臭、痔瘡、肛裂,甚至增加結(jié)直腸惡性病變幾率[2],引發(fā)心血管事件[3],嚴(yán)重?fù)p害患者生存和生活質(zhì)量。有研究顯示,腸道菌群失調(diào)可能是多種慢性胃腸道疾病的發(fā)病原因,F(xiàn)C患者腸道菌群結(jié)構(gòu)與健康群體存在明顯差異[4],且腸道菌群功能與腸道動(dòng)力關(guān)系密切[5]。中醫(yī)藥治療FC具有療效明顯、不良反應(yīng)少、停藥不易反彈、費(fèi)用低等優(yōu)勢(shì)。筆者張秋云根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)制定健脾理肺通便方治療FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證取得較好療效[6]。本研究通過(guò)便秘癥狀分級(jí)和中醫(yī)癥狀評(píng)分評(píng)價(jià)健脾理肺通便方對(duì)FC患者的通便療效和中醫(yī)療效,并通過(guò)16S rRNA細(xì)菌檢測(cè)技術(shù)及生物信息學(xué)方法,分析治療前后患者腸道菌群情況,探討健脾理肺通便方對(duì)腸道菌群的影響,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2019年4-12月中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院脾胃病科門(mén)診FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證患者20例。其中男6例,女14例;年齡32~75歲,平均年齡(53.70±14.51)歲;病程最短6個(gè)月,最長(zhǎng)20年,平均病程(6.43±5.39)年;體質(zhì)量指數(shù)(BMI)19.53~25.28 kg/m2,平均(22.08±1.76)kg/m2。本研究經(jīng)中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)(2019-084-KY)。

    1.2 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)

    參照羅馬Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)[7]。排除腸道及全身器質(zhì)性因素、藥物及其他原因?qū)е碌谋忝夭⒎弦韵聵?biāo)準(zhǔn):(1)必須符合下列至少2個(gè)癥狀:①至少25%的時(shí)間排便感到費(fèi)力;②至少25%的時(shí)間排便為塊狀便或硬便(布里斯托糞便性狀量表1型、2型);③至少25%的時(shí)間排便有不盡感;④至少25%的時(shí)間排便有肛門(mén)直腸梗阻或阻塞感;⑤至少25%的時(shí)間排便需要手法輔助(如用手指協(xié)助排便、盆底支持);⑥每周自發(fā)性排便少于3次。(2)不使用瀉藥時(shí)很少出現(xiàn)稀便。(3)不符合便秘型腸易激綜合征的診斷標(biāo)準(zhǔn)。診斷之前癥狀出現(xiàn)至少6個(gè)月,且近3個(gè)月癥狀符合以上診斷標(biāo)準(zhǔn)。

    1.3 中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)

    參照《功能性便秘中西醫(yī)結(jié)合診療共識(shí)意見(jiàn)(2017年)》[1]及《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則(試行)》[8]制定脾肺氣虛、胃腸氣滯證中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)。主癥:排便間隔延長(zhǎng),排便費(fèi)力,大便干硬或大便黏滯;次癥:疲憊乏力,納呆少食,神疲懶言,腹脹;舌脈:舌淡苔薄白,脈沉細(xì)或脈細(xì)弱。具備主癥1項(xiàng),次癥2項(xiàng),參考舌脈即可辨證。

    1.4 納入標(biāo)準(zhǔn)

    ①符合上述西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)及中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn);②年齡18~75歲;③近1個(gè)月未使用抗生素、益生菌類(lèi)藥物;④近6個(gè)月經(jīng)結(jié)腸鏡檢查排除腸道器質(zhì)性病變;⑤患者對(duì)本研究知情并簽署知情同意書(shū)。

    1.5 排除標(biāo)準(zhǔn)

    ①有胃腸道手術(shù)史者;②合并心血管疾病、糖尿病、腫瘤、神經(jīng)系統(tǒng)疾病者;③妊娠或哺乳期婦女;④BMI<16.0 kg/m2或>30.0 kg/m2;⑤預(yù)計(jì)試驗(yàn)期間有外出計(jì)劃。

    1.6 治療方法

    予健脾理肺通便方(黃芪15 g,白術(shù)30 g,枳實(shí)10 g,厚樸10 g,瓜蔞30 g,虎杖10 g,當(dāng)歸10 g,苦杏仁6 g。中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院中藥房采購(gòu)飲片),水煎服,每日1劑,每次200 mL,早晚餐后30 min口服。療程4周。

    1.7 觀察指標(biāo)

    1.7.1 便秘癥狀分級(jí)

    參考相關(guān)文獻(xiàn)[7-9]及課題組專(zhuān)家意見(jiàn),進(jìn)行便秘分級(jí)。①排便間隔延長(zhǎng):<3 d排便1次為無(wú),3~4 d排便1次為輕度,5~6 d排便1次為中度,≥7 d排便1次為重度。②排便費(fèi)力:排便正常為無(wú),排便稍覺(jué)費(fèi)力為輕度,須努掙才能排出大便為中度,臨廁努掙仍不能排大便(須使用其他排便輔助方法)為重度。③大便干硬:便質(zhì)正常為無(wú),大便稍干、條狀為輕度,大便干燥成塊為中度,大便干結(jié)如羊糞狀為重度。④大便黏滯:大便通暢無(wú)黏滯為無(wú),大便稍黏滯但每次能排凈為輕度,大便黏滯且每次排便不凈為中度,大便嚴(yán)重黏滯且反復(fù)如廁為重度。

    1.7.2 中醫(yī)癥狀評(píng)分

    參考相關(guān)文獻(xiàn)[1,8]及課題組專(zhuān)家意見(jiàn)確定中醫(yī)癥狀評(píng)分。主癥:排便間隔延長(zhǎng)、排便費(fèi)力、大便干硬、大便黏滯,按癥狀無(wú)、輕、中、重分別計(jì)0、2、4、6分;次癥:疲憊乏力(癥狀無(wú)或消失為無(wú),肢體稍倦可堅(jiān)持輕體力工作為輕度,四肢乏力勉強(qiáng)進(jìn)行日常工作活動(dòng)為中度,全身無(wú)力終日不愿活動(dòng)為重度)、納呆少食(癥狀無(wú)或消失為無(wú),食欲差飯量減少1/3以?xún)?nèi)為輕度,食欲差飯量減少1/3~1/2為中度,食欲差飯量減少1/2以上為重度)、神疲懶言(癥狀無(wú)或消失為無(wú),精神略差為輕度,精神疲倦不欲言語(yǔ)為中度,精神疲倦懶于言語(yǔ)為重度)、腹脹(癥狀無(wú)或消失為無(wú),腹脹偶爾出現(xiàn)為輕度,腹脹經(jīng)常出現(xiàn)為中度,腹脹總出現(xiàn)為重度),按癥狀無(wú)、輕、中、重分別計(jì)0、1、2、3分。各項(xiàng)癥狀評(píng)分之和為中醫(yī)癥狀積分。

    1.7.3 菌群檢測(cè)及分析

    收集患者治療前后新鮮糞便樣本,取中段糞便于滅菌滅酶凍存管(Corning/康寧,規(guī)格2.0 mL),1 h內(nèi)置于-80 ℃冰箱保存待檢測(cè)。糞便樣本采用16 S rRNA細(xì)菌檢測(cè)技術(shù)鑒定腸道菌群,分析治療前后菌群結(jié)構(gòu)和差異性。

    16 S rRNA細(xì)菌檢測(cè):首先使用E.Z.N.A.?soil試劑盒(Omega Bio-tek,Norcross,GA,U.S.)對(duì)樣本進(jìn)行基因組DNA抽提,DNA濃度和純度利用NanoDrop2000進(jìn)行檢測(cè),利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA提取質(zhì)量。用338F(5’-ACTCCTACGGGA GGCAGCAG-3’)和806R(5’-GGACTACHVGGG TWTCTAAT-3’)引物對(duì)V3-V4可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增(PCR儀:ABI GeneAmp?9700型)。擴(kuò)增程序:95 ℃預(yù)變性3 min,27個(gè)循環(huán)(95 ℃變性30 s,55 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s),最后72 ℃延伸10 min。擴(kuò)增體系為20 μL,4 μL 5*FastPfu 緩沖液,2 μL 2.5 mmol/L dNTPs,0.8 μL引物(5 μmol/L),0.4 μL FastPfu聚合酶;10 ng DNA模板。使用2%瓊脂糖凝膠回收PCR產(chǎn)物,利用AxyPrep DNA Gel Extraction Kit (Axygen Biosciences,Union City,CA,USA)進(jìn)行純化,Tris-HCl洗脫,2%瓊脂糖電泳檢測(cè)。利用QuantiFluor?-ST(Promega,USA)檢測(cè)定量。根據(jù)Illumina MiSeq平臺(tái)(Illumina,San Diego,USA)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程將純化后的擴(kuò)增片段構(gòu)建PE 2*300的文庫(kù)。

    生物信息學(xué)分析:先對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行過(guò)濾處理并得到優(yōu)化序列;在去除嵌合體序列后,進(jìn)行OTU聚類(lèi)分析并對(duì)OTU的代表序列作分類(lèi)學(xué)分析。基于OTU聚類(lèi)分析結(jié)果及分類(lèi)學(xué)信息,對(duì)各分類(lèi)水平上的群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析?;诿兰镌破脚_(tái)(https://cloud.majorbio.com/)分別進(jìn)行物種注釋與評(píng)估、物種組成分析、組間差異性檢驗(yàn)、LEfSe多級(jí)物種差異判別分析。

    1.8 療效標(biāo)準(zhǔn)

    1.8.1 通便療效標(biāo)準(zhǔn)

    參考相關(guān)文獻(xiàn)[8-9]及課題組專(zhuān)家意見(jiàn)制定通便療效標(biāo)準(zhǔn)。臨床痊愈:排便時(shí)間恢復(fù)正常且排便感及便質(zhì)無(wú)異常;顯效:至少1個(gè)便秘癥狀減輕2個(gè)級(jí)度以上或至少1個(gè)恢復(fù)正常,排便間隔時(shí)間72 h內(nèi);有效:至少1個(gè)便秘癥狀減輕1個(gè)級(jí)度以上,即由重度降為中度,或由中度降為輕度;無(wú)效:排便情況無(wú)改善。

    1.8.2 中醫(yī)療效標(biāo)準(zhǔn)

    參考相關(guān)文獻(xiàn)[8]及課題組專(zhuān)家意見(jiàn)制定中醫(yī)療效標(biāo)準(zhǔn)。療效指數(shù)(N)=(治療前積分-治療后積分)÷治療前積分×100%。臨床痊愈:主癥、次癥消失或基本消失,N≥95%;顯效:70%≤N<95%;有效:30%≤N<70%;無(wú)效:N<30%。

    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    2 結(jié)果

    2.1 通便療效及中醫(yī)療效

    通便療效臨床痊愈率為50.00%(10/20),中醫(yī)療效臨床痊愈率為45.00%(9/20),見(jiàn)表1。

    表1 FC患者通便療效及中醫(yī)療效(例)

    項(xiàng)目例數(shù)臨床痊愈顯效有效無(wú)效 通便療效2010820 中醫(yī)療效20 9650

    2.2 中醫(yī)癥狀評(píng)分比較

    與治療前比較,治療后中醫(yī)癥狀評(píng)分降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.05)。見(jiàn)表2。

    表2 FC患者治療前后中醫(yī)癥狀評(píng)分比較(±s,分)

    2.3 測(cè)序質(zhì)量評(píng)估及物種注釋分析

    測(cè)序數(shù)據(jù)經(jīng)優(yōu)化后,共獲得1 687 426條有效序列,有效序列范圍為26 836~54 155條,平均42 186條。由OUT水平和屬水平上的Shannon指數(shù)可看出,樣本腸道菌群多樣性指數(shù)均大于2.23,實(shí)際OTUs數(shù)目均大于300,且稀釋曲線(xiàn)趨于平緩,表明測(cè)序結(jié)果可反映當(dāng)前樣本所包含的多樣性,繼續(xù)增加測(cè)序深度已無(wú)法檢測(cè)到尚未發(fā)現(xiàn)的新OTUs。見(jiàn)圖1、圖2。

    圖1 各樣本OTU水平Shannon稀釋性曲線(xiàn)

    圖2 各樣本屬水平Shannon稀釋性曲線(xiàn)

    基于物種組成分析,對(duì)2組樣本進(jìn)行聚類(lèi),得到OTUs水平和屬水平差異韋恩圖。在OTUs水平2組樣本共有621個(gè)相同OTUs,治療前有76個(gè)特征OTUs,治療后有119個(gè)特征OTUs。在屬水平,共有225個(gè)相同菌屬,治療前有30個(gè)特征菌屬,治療后有19個(gè)特征菌屬。

    2.4 腸道菌群組成結(jié)構(gòu)分析

    統(tǒng)計(jì)2組樣本在門(mén)水平、屬水平豐度>1.00%的物種,并繪制柱狀圖。在門(mén)水平,2組樣本的優(yōu)勢(shì)菌門(mén)均為厚壁菌門(mén)Firmicutes、擬桿菌門(mén)Bacteroidetes、變形菌門(mén)Proteobacteria、放線(xiàn)菌門(mén)Actinobacteria,其中厚壁菌門(mén)占比最高,治療前后分別為59.00%、61.23%,見(jiàn)圖3。在屬水平,菌落結(jié)構(gòu)依次為擬桿菌屬Bacteroides、糞桿菌屬Faecalibacterium、Agathobacter、Blautia、志賀菌屬Escherichia- Shigella、[Eubacterium]_hallii_ group、Subdoligranulum、普雷沃菌屬Prevotella_9、羅斯菌屬Roseburia、雙歧桿菌屬Bifidobacterium等,見(jiàn)圖4。

    圖3 基于門(mén)水平2組樣本腸道微生物群落結(jié)構(gòu)

    圖4 基于屬水平2組樣本腸道微生物群落結(jié)構(gòu)

    在屬分類(lèi)水平上,對(duì)前20位的物種進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用群落熱圖展示治療前后不同菌屬的豐度變化。治療后,豐度相對(duì)升高的菌屬有Faecalibacterium、普雷沃菌屬Prevotella_9、雙歧桿菌屬Bifidobacterium等;相對(duì)降低的菌屬有Lachnoclostridium、瘤胃球菌屬[Ruminococcus]_torques_group、志賀菌屬Escherichia-Shigella等。見(jiàn)圖5。

    圖5 基于屬水平2組樣本腸道微生物群落熱圖

    2.5 物種差異性分析

    采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn),對(duì)2組樣本屬水平物種進(jìn)行差異性分析,結(jié)果提示,治療后雙歧桿菌屬Bifidobacterium豐度升高,志賀菌屬Escherichia-Shigella豐度降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.05)。見(jiàn)圖6。

    圖6 基于屬水平2組樣本腸道微生物物種豐度比較

    采用LEfSe多級(jí)物種差異判別分析尋找治療前后的特征性物種(LDA>2表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[10]),LDA分值越大,代表物種豐度對(duì)差異效果影響越大。結(jié)果顯示,治療前的特征性物種,在科水平為T(mén)annerellaceae和氣球菌科Aerococcaceae,在屬水平為志賀菌屬Escherichia-Shigella、副擬桿菌屬Parabacteroides、Odoribacter、Lachnospiraceae_ FCS020_group、Eubacterium_brachy_group,其中LDA分值最高的物種為志賀菌屬Escherichia-Shigella(LDA=4.25)。治療后的特征性物種,在目水平為雙歧桿菌目Bifidobacteriales,在科水平為雙歧桿菌科Bifidobacteriaceae、紅蝽?xiàng)U菌科Coriobacteriaceae、腸球菌科Enterococcaceae,在屬水平有雙歧桿菌屬Bifidobacterium、柯林斯菌屬Collinsella、Fusicatenibacter、腸球菌屬Enterococcus、鏈球菌屬Streptococcus,其中LDA分值最高的物種為雙歧桿菌屬Bifidobacterium(LDA=4.17)。見(jiàn)圖7。

    圖7 LEfSe分析LDA柱形圖

    3 討論

    FC的病理機(jī)制復(fù)雜多樣,主要包括遺傳學(xué)特征(飲食、腸道微生態(tài)等)、動(dòng)力/腸道傳輸異常、內(nèi)臟敏感性降低、腸神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等[11]。有研究顯示,F(xiàn)C多伴有腸道菌群結(jié)構(gòu)和豐度改變。較早有學(xué)者發(fā)現(xiàn)FC患者糞便中雙歧桿菌屬和乳酸桿菌屬含量顯著降低,潛在致病菌和/或真菌增多[12]。2017年一項(xiàng)大樣本研究顯示,F(xiàn)C患者腸道菌群以擬桿菌屬、羅斯菌屬、糞球菌屬含量相對(duì)減少,普拉梭菌屬含量相對(duì)增多為特點(diǎn)[13]。

    健脾理肺通便方中黃芪、白術(shù)為君,健脾肺之氣、推動(dòng)氣機(jī)升降;枳實(shí)、厚樸、虎杖為臣,通降腸腑,助運(yùn)大腸,其中虎杖既能泄?jié)嵬ń?,又無(wú)澀腸之弊;當(dāng)歸、瓜蔞、苦杏仁為佐藥,當(dāng)歸合黃芪、白術(shù),取“血能生氣”,補(bǔ)血以助補(bǔ)氣之用,且有潤(rùn)腸通便之能,杏仁苦溫宣肺,梳理肺腸氣機(jī),助大腸傳導(dǎo),合瓜蔞潤(rùn)腸以增通便之效。全方通補(bǔ)兼顧,祛邪而不傷正,共奏補(bǔ)氣、泄?jié)帷⑼ū阒?。用藥劑量大體遵循《中華人民共和國(guó)藥典》[14]要求,大劑量使用白術(shù)可達(dá)補(bǔ)氣健脾通便之用[15]。有研究發(fā)現(xiàn),高劑量白術(shù)配方顆??娠@著升高小鼠腸道菌群中雙歧桿菌豐度,降低致病菌含量[16]。體外研究表明,黃芪水提液可有效提高雙歧桿菌含量[17]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),納米級(jí)中藥黃芪可促進(jìn)大鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌﹑乳酸桿菌含量上升,并降低腸球菌﹑腸桿菌含量,使大鼠腸道菌群比例恢復(fù)正常[18]。臨床研究顯示,枳術(shù)黃芪湯可增加腸道厭氧菌(雙歧桿菌、乳酸)數(shù)量,降低需氧菌(腸桿菌、腸球菌)數(shù)量,進(jìn)而改善氣虛便秘患者的癥狀[19]。本研究顯示,該方對(duì)FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證患者便秘情況具有改善作用;與治療前比較,患者治療后排便間隔縮短,排便費(fèi)力程度、大便干硬、大便黏滯程度減輕,疲憊乏力、納呆少食、神疲懶言、腹脹等癥狀改善。

    治療前后門(mén)水平上組間物種差異性分析提示,擬桿菌門(mén)Bacteroidetes、厚壁菌門(mén)Firmicutes、變形菌門(mén)Proteobacteria構(gòu)成比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(>0.05)。在屬水平,熱圖提示治療后Faecalibacterium、雙歧桿菌屬Bifidobacterium、普雷沃菌屬Prevotella_9豐度上升,與既往文獻(xiàn)[20]相符。通過(guò)LEfSe多級(jí)物種差異判別分析發(fā)現(xiàn),志賀菌屬Escherichia-Shigella是治療前的特征性菌屬,雙歧桿菌屬Bifidobacterium為治療后的特征性菌屬,提示二者可能對(duì)治療有重要意義。

    雙歧桿菌是現(xiàn)已認(rèn)識(shí)到的人體重要的益生菌之一,也是人體腸道正常菌群中的優(yōu)勢(shì)菌種,粘附和定植于腸道黏膜上皮細(xì)胞后,發(fā)揮營(yíng)養(yǎng)、抗感染、免疫調(diào)節(jié)等多種作用,也對(duì)排便活動(dòng)正常進(jìn)行有重要意義。有研究通過(guò)檢測(cè)大鼠小腸肌電活動(dòng)發(fā)現(xiàn)了特定菌群與腸道動(dòng)力間的關(guān)系,Bifidobacterium bifidum可縮短遷移性肌電復(fù)合體周期[21],促進(jìn)腸道蠕動(dòng),推進(jìn)排便活動(dòng)。Bifidobacterium lactis HN019可增強(qiáng)腸道推進(jìn)性收縮的振幅,抑制非推進(jìn)性收縮,調(diào)節(jié)結(jié)腸運(yùn)動(dòng)模式[22],促進(jìn)排便活動(dòng)。結(jié)腸??黏蛋白(層)被覆于腸上皮表面,是腸屏障重要組成部分,可作為潤(rùn)滑劑協(xié)助糞團(tuán)通過(guò),而黏蛋白減少、黏液層厚度降低可見(jiàn)于便秘患者或模型動(dòng)物[5],研究發(fā)現(xiàn),含有Bifidobacteria的VSL#3益生菌配方可以促進(jìn)大鼠結(jié)腸??黏蛋白2??基因??表達(dá),促進(jìn)黏蛋白??分泌[23],推進(jìn)糞便排出。另外,雙歧桿菌的代謝產(chǎn)物中含有多種有機(jī)酸[24],主要為乙酸、乳酸和甲酸,可刺激人體腸道壁,促進(jìn)腸道蠕動(dòng),利于排便。同時(shí)有機(jī)酸含量升高可增加腸道內(nèi)滲透壓,利于水分由低滲透壓處進(jìn)入腸道內(nèi)高滲透壓處,產(chǎn)生通便效果[25]。

    志賀菌屬Escherichia-Shigella作為治療前的特征性菌群,屬條件致病菌,主要來(lái)源于胃腸道。有研究表明,F(xiàn)C患者經(jīng)合生元治療后,屬水平上,F(xiàn)aecalibacterium、Prevotella_9豐度增加,Escherichia- Shigella豐度降低,與患者便秘癥狀改善結(jié)果一致[26]。有研究通過(guò)檢測(cè)小腸肌電活動(dòng)發(fā)現(xiàn),該菌屬可延長(zhǎng)MMC周期,對(duì)腸道蠕動(dòng)產(chǎn)生明顯抑制作用,可導(dǎo)致排便異常[20]。

    綜上,健脾理肺通便方對(duì)改善FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證患者便秘癥狀和其他伴隨癥狀有較好效果,并對(duì)患者腸道菌群有一定調(diào)節(jié)作用,可使雙歧桿菌屬Bifidobacterium豐度升高、志賀菌屬Escherichia- Shigella豐度降低。本研究初步探索了健脾理肺通便方治療FC脾肺氣虛、胃腸氣滯證的療效及治療前后的特征性菌屬,但存在一定局限性,如樣本量過(guò)少、研究中心少,今后應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量,增加研究中心,以期得出更可靠的研究結(jié)果。

    [1] 李軍祥,陳誩,柯曉.功能性便秘中西醫(yī)結(jié)合診療共識(shí)意見(jiàn)(2017年)[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2018,26(1):18-26.

    [2] GUéRIN A, MODY R, FOK B, et al. Risk of developing colorectal cancer and benign colorectal neoplasm in patients with chronic constipation[J]. Aliment Pharmacol Ther,2014,40(1):83-92.

    [3] BASSOTTI G. Being constipated:a bad omen for your cardiovascular system?[J]. Atherosclerosis,2016,245:240-241.

    [4] ZHU L, LIU W, ALKHOURI R, et al. Structural changes in the gut microbiome of constipated patients[J]. Physiol Genomics,2014, 46(18):679-686.

    [5] DIMIDI E, CHRISTODOULIDES S, SCOTT S M, et al. Mechanisms of action of probiotics and the gastrointestinal microbiota on gut motility and constipation[J]. Adv Nutr,2017,8(3):484-494.

    [6] 蔣天媛,張秋云.張秋云用健脾理肺法治療功能性便秘經(jīng)驗(yàn)[J].北京中醫(yī)藥,2019,38(10):1015-1017.

    [7] 柯美云,方秀才,侯曉華.羅馬Ⅳ功能性胃腸病——腸-腦互動(dòng)異常[M].北京:科學(xué)出版社,2017:643-644.

    [8] 鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則(試行)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2002:29-31.

    [9] 劉紹能,劉慧敏,李游,等.益氣潤(rùn)腸方治療功能性便秘的臨床療效觀察[J].北京中醫(yī)藥,2013,32(4):287-289.

    [10] 王海瑜,錢(qián)唐亮,康天倫,等.腸道菌群與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎寒熱證型的相關(guān)性研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2020,27(6):44-49.

    [11] LANGILLE M G, ZANEVELD J, CAPORASO J G, et al. Predictive functional profiling of microbial communities using 16S rRNA marker gene sequences[J]. Nat Biotechnol,2013,31(9):814-821.

    [12] KHALIF I L, QUIGLEY E M, KONOVITCH E A, et al. Alterations in the colonic flora and intestinal permeability and evidence of immune activation in chronic constipation[J]. Dig Liver Dis,2005, 37(11):838-849.

    [13] MANCABELLI L, MILANI C, LUGLI G A, et al. Unveiling the gut microbiota composition and functionality associated with constipation through metagenomic analyses[J]. Sci Rep,2017,7(1):9879.

    [14] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015.

    [15] 章慧.生白術(shù)與枳實(shí)配伍治療慢傳輸型便秘的臨床研究[D].南京:南京中醫(yī)藥大學(xué),2017.

    [16] 鄢偉倫,王帥帥,任霞.白術(shù)對(duì)小鼠腸道菌群調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].山東中醫(yī)雜志,2011,30(6):417-419.

    [17] 戴宇青,蔣月,張燕,等.黃芪對(duì)雙歧桿菌生長(zhǎng)的影響及其抗黑色素瘤作用研究[J].藥物生物技術(shù),2017,24(3):200-205.

    [18] 孫立群,梁金花,高月娟.探討納米級(jí)中藥黃芪對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸道菌群失調(diào)的調(diào)整作用[J].中國(guó)中醫(yī)急癥,2012,21(8):1263-1265.

    [19] 李巧霞.枳術(shù)黃芪湯對(duì)消渴病便秘(氣虛證)患者腸道菌群的影響[J].湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2018,35(4):86-88.

    [20] 黃林生,祝琦,高仁元,等.合生元治療慢性功能性便秘的療效及對(duì)腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2018,21(8):908-913.

    [21] HUSEBYE E, HELLSTR?M P M, SUNDLER F, et al. Influence of microbial species on small intestinal myoelectric activity and transit in germ-free rats[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2001,280(3):G368-380.

    [22] DALZIEL J E, ANDERSON R C, PETERS J S, et al. Promotility action of the probiotic bifidobacterium lactis HN019 extract compared with prucalopride in isolated rat large intestine[J]. Front Neurosci,2017,11:20.

    [23] CABALLERO-FRANCO C, KELLER K, DE SIMONE C, et al. The VSL#3 probiotic formula induces mucin gene expression and secretion in colonic epithelial cells[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2007,292(1):G315-322.

    [24] SCOTT K P, MARTIN J C, DUNCAN S H, et al. Prebiotic stimulation of human colonic butyrate-producing bacteria and bifidobacteria, in vitro[J]. FEMS Microbiol Ecol,2014,87(1):30-40.

    [25] VAN DER WERF M J, VENEMA K. Bifidobacteria:genetic modification and the study of their role in the colon[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,2001,49(1):378-383.

    [26] HUANG L S, KONG C, GAO R Y, et al. Analysis of fecal microbiota in patients with functional constipation undergoing treatment with synbiotics[J]. Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37(3):555-563.

    Efficacy ofPrescription for Functional Constipation and Effects on Intestinal Flora

    JIANG Tianyuan1, ZHANG Qiuyun1, LIU Shaoneng2, ZHANG Rong2, WANG Dongfang2,ZHANG Yicong2, LIU Ruihua2, ZHOU Wenqiang2

    To investigate the clinical efficacy ofPrescription in the treatment of functional constipation with TCM syndrome differentiation of spleen-lung qi deficiency and stomach-bowel qi stagnation, and effects on intestinal flora.Totally 20 patients diagnosed as FC with spleen-lung qi deficiency and stomach-bowel qi stagnation who admitted to Guang’anmen Hospital from April 2019 to December 2019 were selected as study subjects. All patients were treated withPrescription for 4 weeks. Constipation symptoms degrees and TCM syndrome scores were recorded before and after treatment. Biological analysis methods were used to carry out sequencing evaluation and species annotation analysis, community composition analysis, group difference test, LEfSe multi-level species difference discriminant analysis before and after treatment.The clinical cure rate of laxative effect was 50.00% (10/20), and the clinical cure rate of TCM was 45.00% (9/20). Compared with before treatment, TCM symptom scores were significantly reduced (<0.05). After sequencing, 1 687 426 effective sequences were obtained. After cluster analysis, there were 76 and 119 characteristic OTUs before and after treatment respectively. The characteristic species before treatment were Tannerellaceae and Aerococcaceae at the family level, and Escherichia-Shigella, Parabacteroides, Odoribacter, Lachnospiraceae_FCS020_group, Eubacterium_brachy_group at the genus level (LDA>2). Among them, the species with the highest LDA score was Escherichia-Shigella (LDA=4.25). The characteristic species after treatment were Bifidobacteriales at the order level, Bifidobacteriaceae, Coriobacteriaceae, and Enterococcaceae at the family level, and Bifidobacterium, Collinsella, Fusicatenibacter, Enterococcus, and Streptococcus at the genus level (LDA>2), among which the species with the highest LDA score was Bifidobacterium (LDA=4.17).Prescription can significantly relieve constipation in patients of FC with spleen-lung qi deficiency and stomach-bowel qi stagnation and regulate intestinal flora. The abundance of Escherichia-Shigella has decreased and the abundance of Bifidobacterium has increased after treatment, which may play an important role in the treatment.

    Prescription; functional constipation; spleen-lung qi deficiency; stomach-bowel qi stagnation; intestinal flora; clinical study

    R259.74

    A

    1005-5304(2020)09-0028-07

    10.3969/j.issn.1005-5304.202001328

    張秋云,E-mail:zhangqiuyun8202@aliyun.com

    (2020-01-27)

    (2020-03-19;編輯:季巍?。?/p>

    猜你喜歡
    桿菌屬雙歧菌群
    潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群分布特征分析
    “云雀”還是“貓頭鷹”可能取決于腸道菌群
    中老年保健(2022年2期)2022-08-24 03:20:50
    “水土不服”和腸道菌群
    科學(xué)(2020年4期)2020-11-26 08:27:06
    養(yǎng)豬微生物發(fā)酵床芽胞桿菌空間生態(tài)位特性
    肉牛剩余采食量與瘤胃微生物菌群關(guān)系
    咽部菌群在呼吸道感染治療中的臨床應(yīng)用
    雙歧桿菌三聯(lián)活菌聯(lián)合多潘立酮治療新生兒喂養(yǎng)不耐受40例
    類(lèi)芽孢桿菌屬β-葡萄糖苷酶在大腸桿菌中可溶性重組表達(dá)的優(yōu)化
    Vitek-2 Compact和MALDI TOF MS對(duì)棒狀桿菌屬細(xì)菌鑒定能力評(píng)估
    產(chǎn)細(xì)菌素雙歧桿菌的篩選及其分泌條件研究
    男人舔女人下体高潮全视频| 男女之事视频高清在线观看| 99riav亚洲国产免费| 亚洲一区高清亚洲精品| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 99久久国产精品久久久| 中文字幕av电影在线播放| 精品国产亚洲在线| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 十八禁人妻一区二区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 看片在线看免费视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 美女大奶头视频| 免费高清视频大片| 久久九九热精品免费| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产精品野战在线观看| 精品电影一区二区在线| 国产精品日韩av在线免费观看 | 黄色 视频免费看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 国产乱人伦免费视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久久久久久午夜电影| 午夜老司机福利片| netflix在线观看网站| 悠悠久久av| 国产精品免费一区二区三区在线| 丝袜人妻中文字幕| 久久午夜综合久久蜜桃| 女同久久另类99精品国产91| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 99riav亚洲国产免费| 国产激情久久老熟女| 在线观看舔阴道视频| 久久久久久人人人人人| 黄色视频不卡| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品高清国产在线一区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲五月天丁香| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 搡老熟女国产l中国老女人| 精品电影一区二区在线| 成在线人永久免费视频| 国产单亲对白刺激| 日韩国内少妇激情av| 精品人妻1区二区| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 两性夫妻黄色片| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲 国产 在线| 国产精品九九99| av福利片在线| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 悠悠久久av| 国产亚洲精品第一综合不卡| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产不卡一卡二| 国产精品久久久人人做人人爽| 女性生殖器流出的白浆| av视频在线观看入口| 久久久久九九精品影院| 亚洲人成电影免费在线| 午夜久久久在线观看| 不卡av一区二区三区| 亚洲伊人色综图| 久久久国产精品麻豆| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产99久久九九免费精品| 国产午夜福利久久久久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 热99re8久久精品国产| 脱女人内裤的视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲午夜理论影院| 欧美日本亚洲视频在线播放| 日本免费a在线| 在线av久久热| 天天一区二区日本电影三级 | 亚洲第一电影网av| 亚洲精品中文字幕在线视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产亚洲精品av在线| 日韩欧美国产一区二区入口| 极品教师在线免费播放| www.精华液| 一级a爱视频在线免费观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久精品成人免费网站| 脱女人内裤的视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 51午夜福利影视在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 丁香欧美五月| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲国产精品久久男人天堂| 身体一侧抽搐| 国产精品精品国产色婷婷| 成人国语在线视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| av欧美777| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产精品国产高清国产av| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 色播亚洲综合网| 国产av一区在线观看免费| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美黑人欧美精品刺激| 免费在线观看亚洲国产| 老司机在亚洲福利影院| 天堂动漫精品| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 在线观看舔阴道视频| 美女免费视频网站| 一本久久中文字幕| 看免费av毛片| 久久久久亚洲av毛片大全| 搡老妇女老女人老熟妇| 最近最新中文字幕大全电影3 | av在线播放免费不卡| 1024视频免费在线观看| 国产精品野战在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产亚洲av嫩草精品影院| 成人欧美大片| 精品国产一区二区三区四区第35| 久久久久九九精品影院| 午夜福利影视在线免费观看| 国产一卡二卡三卡精品| 免费在线观看亚洲国产| 在线观看免费视频日本深夜| 一个人免费在线观看的高清视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲专区国产一区二区| videosex国产| 国产精品永久免费网站| 韩国精品一区二区三区| 色精品久久人妻99蜜桃| 色播在线永久视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 波多野结衣一区麻豆| 午夜日韩欧美国产| 在线永久观看黄色视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 老司机在亚洲福利影院| 91精品三级在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 两个人看的免费小视频| 天堂影院成人在线观看| 深夜精品福利| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产精品精品国产色婷婷| 久久中文字幕人妻熟女| 丝袜美腿诱惑在线| 国产三级黄色录像| 两个人视频免费观看高清| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产成人影院久久av| 视频在线观看一区二区三区| 国产麻豆69| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 精品一品国产午夜福利视频| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲人成77777在线视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 色精品久久人妻99蜜桃| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲人成电影免费在线| 男人操女人黄网站| 国产极品粉嫩免费观看在线| 大码成人一级视频| 国产在线观看jvid| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美激情 高清一区二区三区| 免费在线观看完整版高清| 亚洲精品美女久久av网站| 夜夜爽天天搞| 在线av久久热| www.熟女人妻精品国产| 黑人操中国人逼视频| 看免费av毛片| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 校园春色视频在线观看| 丁香六月欧美| 激情视频va一区二区三区| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产成+人综合+亚洲专区| 超碰成人久久| 在线观看免费视频日本深夜| 老司机靠b影院| 村上凉子中文字幕在线| 又紧又爽又黄一区二区| 岛国在线观看网站| 久久香蕉精品热| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 欧美不卡视频在线免费观看 | 免费高清在线观看日韩| 麻豆av在线久日| 国产麻豆成人av免费视频| 精品久久久久久成人av| 国产激情欧美一区二区| 99国产精品一区二区三区| 少妇粗大呻吟视频| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产av一区二区精品久久| 日韩大码丰满熟妇| 超碰成人久久| 久久精品人人爽人人爽视色| 天堂影院成人在线观看| 国产xxxxx性猛交| 给我免费播放毛片高清在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲中文av在线| 成人三级做爰电影| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 午夜福利视频1000在线观看 | 母亲3免费完整高清在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 色在线成人网| 女警被强在线播放| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 露出奶头的视频| svipshipincom国产片| ponron亚洲| 亚洲av熟女| 久久青草综合色| 免费少妇av软件| 久久九九热精品免费| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲精品粉嫩美女一区| 级片在线观看| 欧美在线黄色| 国产97色在线日韩免费| 午夜福利高清视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 97人妻天天添夜夜摸| 国产一区二区在线av高清观看| 成人三级做爰电影| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产国语露脸激情在线看| 国语自产精品视频在线第100页| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产亚洲欧美精品永久| 午夜免费成人在线视频| 波多野结衣一区麻豆| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 叶爱在线成人免费视频播放| 可以在线观看毛片的网站| 精品人妻在线不人妻| e午夜精品久久久久久久| 久久精品91蜜桃| 国产伦人伦偷精品视频| 热re99久久国产66热| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 身体一侧抽搐| 久久久久国内视频| 欧美激情久久久久久爽电影 | 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲人成77777在线视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 久热这里只有精品99| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 少妇粗大呻吟视频| 成年人黄色毛片网站| 手机成人av网站| 90打野战视频偷拍视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 中文字幕久久专区| 1024香蕉在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 国产真人三级小视频在线观看| av福利片在线| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 久久人妻av系列| 久久人人精品亚洲av| 成年人黄色毛片网站| 国产乱人伦免费视频| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 久9热在线精品视频| 老司机在亚洲福利影院| 大型av网站在线播放| 色综合婷婷激情| 免费在线观看完整版高清| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 欧美+亚洲+日韩+国产| 黄片大片在线免费观看| 一级a爱视频在线免费观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 精品高清国产在线一区| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 91大片在线观看| 一区福利在线观看| 亚洲avbb在线观看| 免费少妇av软件| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产精品野战在线观看| av天堂在线播放| 午夜a级毛片| 国产精品精品国产色婷婷| 91国产中文字幕| 午夜久久久久精精品| 精品国产亚洲在线| 男女下面进入的视频免费午夜 | 女同久久另类99精品国产91| 国产成人欧美| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 一区在线观看完整版| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲成a人片在线一区二区| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 动漫黄色视频在线观看| 88av欧美| 久9热在线精品视频| 欧美日韩精品网址| 黄色视频不卡| 婷婷丁香在线五月| 欧美一区二区精品小视频在线| 色播亚洲综合网| 久久久久久久久中文| 国产高清激情床上av| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 欧美一级a爱片免费观看看 | bbb黄色大片| 亚洲色图综合在线观看| 在线观看www视频免费| 精品久久久久久久毛片微露脸| 两性夫妻黄色片| 午夜精品在线福利| 国产精品亚洲av一区麻豆| 精品国产乱子伦一区二区三区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产主播在线观看一区二区| a级毛片在线看网站| 中文字幕久久专区| 欧美激情久久久久久爽电影 | 老汉色av国产亚洲站长工具| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 电影成人av| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久久精品欧美日韩精品| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| www.自偷自拍.com| 久久亚洲真实| 精品熟女少妇八av免费久了| 中文字幕色久视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 黄色 视频免费看| 91av网站免费观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久中文看片网| 午夜精品久久久久久毛片777| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 日韩视频一区二区在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 在线观看66精品国产| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲熟女毛片儿| videosex国产| 中出人妻视频一区二区| av免费在线观看网站| 无遮挡黄片免费观看| 黄色视频,在线免费观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 一级毛片精品| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲国产欧美一区二区综合| 成人18禁在线播放| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产免费av片在线观看野外av| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久亚洲真实| 久久影院123| 精品国产亚洲在线| 久久中文看片网| 国产97色在线日韩免费| av免费在线观看网站| 两个人免费观看高清视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 无限看片的www在线观看| 日韩欧美三级三区| 国产97色在线日韩免费| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 搡老妇女老女人老熟妇| 日日爽夜夜爽网站| 日本 av在线| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日韩av在线大香蕉| 欧美日本视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 日韩大码丰满熟妇| 国产精品综合久久久久久久免费 | 不卡一级毛片| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲成a人片在线一区二区| 搡老岳熟女国产| 午夜久久久在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久热在线av| 90打野战视频偷拍视频| www日本在线高清视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 在线观看www视频免费| 99精品久久久久人妻精品| 久久久久亚洲av毛片大全| 老司机午夜福利在线观看视频| 日本 av在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 色综合站精品国产| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲人成电影观看| 午夜视频精品福利| 女人被狂操c到高潮| 精品一品国产午夜福利视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 在线国产一区二区在线| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久香蕉精品热| 99香蕉大伊视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美国产日韩亚洲一区| 少妇 在线观看| 精品国产国语对白av| 亚洲第一青青草原| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲全国av大片| 一区在线观看完整版| 妹子高潮喷水视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 激情在线观看视频在线高清| 91成年电影在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 99re在线观看精品视频| 国产97色在线日韩免费| 久久人人97超碰香蕉20202| 日韩有码中文字幕| 最好的美女福利视频网| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产私拍福利视频在线观看| 中文字幕高清在线视频| 午夜亚洲福利在线播放| 国语自产精品视频在线第100页| 国产亚洲av嫩草精品影院| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲国产中文字幕在线视频| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美乱码精品一区二区三区| 午夜福利在线观看吧| 亚洲精品中文字幕在线视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产成人欧美在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久国产精品人妻蜜桃| 午夜福利免费观看在线| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产精品影院久久| 国产亚洲欧美精品永久| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 91在线观看av| 亚洲精品久久国产高清桃花| 少妇粗大呻吟视频| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产91精品成人一区二区三区| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 日韩中文字幕欧美一区二区| x7x7x7水蜜桃| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 成人精品一区二区免费| 亚洲国产精品成人综合色| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 丁香六月欧美| 色播亚洲综合网| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 少妇的丰满在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| 日日爽夜夜爽网站| 国产成人精品久久二区二区91| 国产一区二区三区视频了| 极品人妻少妇av视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲 欧美一区二区三区| 日韩欧美免费精品| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美日韩一级在线毛片| 国产精品久久久av美女十八| 久久热在线av| 制服丝袜大香蕉在线| 久热爱精品视频在线9| 在线观看免费午夜福利视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 一级毛片精品| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久午夜亚洲精品久久| 黄色 视频免费看| 久久性视频一级片| 老司机在亚洲福利影院| 久久精品成人免费网站| 亚洲一区中文字幕在线| 国产精品精品国产色婷婷| 久久 成人 亚洲| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产高清videossex| 日韩精品免费视频一区二区三区| 十分钟在线观看高清视频www| 一边摸一边做爽爽视频免费| а√天堂www在线а√下载| 亚洲精品av麻豆狂野| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲精品国产一区二区精华液| av天堂在线播放| 日韩有码中文字幕| 999久久久国产精品视频| 精品欧美国产一区二区三| 国产视频一区二区在线看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 曰老女人黄片| 久久久久国内视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 无人区码免费观看不卡| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产成人啪精品午夜网站| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产高清激情床上av| svipshipincom国产片| av视频免费观看在线观看| 老司机福利观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美一级毛片孕妇| 婷婷精品国产亚洲av在线| 很黄的视频免费| 男人舔女人的私密视频| 香蕉国产在线看| 国产99白浆流出| 国产色视频综合| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 老鸭窝网址在线观看| 国语自产精品视频在线第100页| 51午夜福利影视在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久久久久久午夜电影| 韩国av一区二区三区四区| 90打野战视频偷拍视频| 不卡av一区二区三区| 久久精品91无色码中文字幕| 一区二区三区高清视频在线| 久久久久国内视频| 在线观看www视频免费| 欧美日韩一级在线毛片| 色在线成人网| 伦理电影免费视频| www.999成人在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久久国产精品麻豆| 亚洲国产欧美网| 久久中文字幕人妻熟女| 欧美性长视频在线观看| 十八禁人妻一区二区| 自线自在国产av| 夜夜夜夜夜久久久久| 日韩成人在线观看一区二区三区| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产高清激情床上av| 精品第一国产精品| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 免费搜索国产男女视频| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 日日夜夜操网爽| 欧美成人午夜精品| 99riav亚洲国产免费| 成人亚洲精品一区在线观看| 精品久久久精品久久久| 久久精品91无色码中文字幕| 日韩中文字幕欧美一区二区| 可以在线观看的亚洲视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 成人18禁在线播放| 99热只有精品国产| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 在线国产一区二区在线|