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    ANA、LKM-1、AMAM2、LC-1及SLA/LP聯(lián)合檢測在乙肝病毒感染分型中的應(yīng)用研究

    2020-10-13 12:23謝璟陳建華徐榮
    中國現(xiàn)代醫(yī)生 2020年24期

    謝璟 陳建華 徐榮

    [摘要] 目的 探討ANA、LKM-1、AMA M2、LC-1及SLA/LP聯(lián)合檢測在乙肝病毒感染分型中的應(yīng)用研究。 方法 選取2015年1月~2019年5月我院傳染科35例乙肝合并自身免疫性肝病患者作為觀察組,同時選取65例乙肝病毒感染患者作為對照組。觀察兩組血清抗核抗體(ANA)、抗肝腎微粒體Ⅰ型抗體(LKM-1)、抗線粒體抗體(AMA M2)、抗肝胞漿Ⅰ型抗體(LC-1)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗體(SLA/LP)陽性率,對結(jié)果進(jìn)行分析。 結(jié)果 觀察組中ANA的陽性率(35.00%)高于對照組(21.86%),觀察組中LKM-1、AMA M2、LC-1及SLA/LP的陽性率均顯著高于對照組(P<0.05),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。對照組ANA陽性主要為核顆粒型,主要在1:100的血清稀釋度中檢出,觀察組ANA陽性主要為核均質(zhì)性,主要在1:1000的血清稀釋度中檢出,兩種核型稀釋度組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 多項自身抗體聯(lián)合檢測對乙肝及自身免疫性肝病的抗體檢測全面,ANA檢測是初篩試驗,LKM-1、AMA M2、LC-1及SLA/LP等是確證試驗,有助于臨床診斷及指導(dǎo)用藥。

    [關(guān)鍵詞] 抗核抗體;肝自身抗體;乙肝病毒感染;自身免疫性肝病

    [中圖分類號] R512.6 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-9701(2020)24-0021-03

    [Abstract] Objective To investigate the application of combined detection of ANA, LKM-1, AMA M2, LC-1 and SLA/LP in typing of hepatitis B virus infection. Methods From January 2015 to May 2019, 35 patients with hepatitis B and autoimmune liver disease in the Department of Infectious Diseases of our hospital were selected as the observation group, and 65 patients with hepatitis B virus infection were selected as the control group. The positive rates of serum anti-nuclear antibody(ANA), anti-liver and kidney microsome type I antibody(LKM-1), anti-mitochondrial antibody(AMA M2), anti-hepatic cytoplasmic type I antibody(LC-1), and anti-soluble liver antigen/ liver-pancreas(SLA/LP) autoantibody of two groups were observed. The results were analyzed. Results The positive rate of ANA in the observation group(35.00%) was higher than that in the control group(21.86%). The positive rates of LKM-1, AMA M2, LC-1 and SLA/LP in the observation group were significantly higher than those in the control group(P<0.05), and the differences were statistically significant(P<0.05). The ANA positive in the control group was mainly nuclear particle type, mainly detected at 1:100 serum dilution, and the ANA positive in the observation group was mainly nuclear homogeneity, mainly detected at 1:1000 serum dilution. The difference in two karyotype dilutions between the groups was statistically significant(P<0.05). Conclusion The combined detection of multiple autoantibodies for the detection of hepatitis B and autoimmune liver diseases is comprehensive. The ANA test is a preliminary screening test. LKM-1, AMA M2, LC-1 and SLA/LP are confirmatory tests, which are helpful for clinical diagnosis. ?And guide medication.

    [Key words] Antinuclear antibody; Liver autoantibody; Hepatitis B virus infection; Autoimmune liver disease

    近些年來,我國各種肝炎的發(fā)病率呈逐年遞增趨勢,病毒性肝炎是在各種肝炎病毒對肝臟的侵害下患上的一種傳染病,有甲型、乙型、丙型、丁型及戊型五種類型,以乙型和丙型常見[1,2],其中還有部分患有自身免疫性肝病。在當(dāng)前,對自身免疫性肝病的發(fā)病原因還不是很了解,但患者有食欲消減、精神疲乏、身體無力、惡心嘔吐等臨床表現(xiàn),在B超及肝功能檢測上發(fā)現(xiàn)肝臟增大和肝功能異常,一部分患者還有關(guān)節(jié)疼痛、上呼吸道感染等臨床癥狀。對患者的身體健康安全和生活質(zhì)量有嚴(yán)重影響。所以研究乙型肝炎患者的臨床特征,并進(jìn)一步地了解其免疫情況,及時給予對癥治療是非常必要的[3,4]。本文通過研究65例乙肝病毒感染患者和35例乙肝合并自身免疫性肝病患者的不同抗體的表現(xiàn)情況,探討抗核抗體與肝自身抗體聯(lián)合檢測對乙肝感染分型應(yīng)用,現(xiàn)報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取我院2015年1月~2019年5月65例乙肝病毒感染和35例乙肝合并自身免疫性肝病患者,均為醫(yī)院傳染科門診和住院患者,前者設(shè)為對照組,男45例,女20例,年齡22~78歲,平均(45.23±6.49)歲;后者設(shè)為觀察組,男24例,女11例,年齡24~75歲,平均(46.72±5.72)歲。兩組性別、年齡等一般資料比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

    1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

    納入標(biāo)準(zhǔn):所有患者的ALT超過50 IU/L,AST超過50 IU/L,球蛋白超過30 g/L,對照組患者中相關(guān)抗原抗體指標(biāo)為陽性,觀察組及對照組中相關(guān)抗原抗體指標(biāo)為陰性。對照組患者符合2001年頒布的病毒性肝炎防治方案中乙肝診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn):患有原發(fā)性的心、肝、腎等器官疾病的患者;存在乙肝外其他病毒感染患者及其他肝臟疾病的患者;精神異常不能正常交流的患者。

    1.3 方法

    1.3.1 抗核抗體檢測 ?所有研究對象于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取5 mL靜脈血液,以3000 r/min的轉(zhuǎn)速將血液中血清分離出來,將血清以1:100、1:320和1:1000的比例稀釋,采用間接免疫熒光法檢測血清抗核抗體(ANA),將Hep-2細(xì)胞和猴肝這兩種基質(zhì)作為抗原,按照試劑盒的使用說明書操作,試劑由北京和杰創(chuàng)新生物醫(yī)學(xué)科技有限公司提供。具體步驟為:(1)待測血清用洗滌液作1:100稀釋,并加入反應(yīng)孔內(nèi);(2)將抗原片蓋在倒扣板對應(yīng)的凹槽里,確保樣本與抗原基質(zhì)接觸,室溫孵育30 min;(3)用洗滌液輕輕從一側(cè)將反應(yīng)液沖洗掉,浸泡至洗片缸內(nèi),靜置5 min后,再用蒸餾水沖洗1次;(4)在倒扣板的反應(yīng)孔內(nèi)加入ANA熒光二抗,將抗原片蓋在倒扣板對應(yīng)的凹槽里,確保樣本與抗原基質(zhì)接觸,室溫孵育30 min;(5)再次洗滌蒸餾水沖洗,在蓋玻片上滴加封片劑;(6)最后采用熒光顯微鏡觀察結(jié)果,若血清稀釋度≥1:100時細(xì)胞或組織出現(xiàn)黃綠色特異性熒光,則表明為陽性[5],并對ANA陽性者作進(jìn)一步的檢測判斷核型。

    1.3.2 肝自身抗體檢測 ?采用免疫印跡法檢查4項組合的肝自身抗體,包括抗肝腎微粒體Ⅰ型抗體(LKM-1)、抗線粒體M2型(AMA M2)、抗肝溶質(zhì)抗原Ⅰ型抗體(LC-1)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗體(SLA/LP),取稀釋后的血清,按照說明書嚴(yán)格執(zhí)行操作,檢測中所使用的試劑為歐蒙公司生產(chǎn),儀器為全自動免疫印跡儀,具體步驟為:(1)將待檢血清和血漿標(biāo)本用標(biāo)本緩沖液1:101稀釋;(2)將實驗?zāi)l放入溫育槽中溫育5 min,之后吸去溫育槽中的液體;(3)在溫育槽中分別加入1.5 mL已稀釋血清于室溫溫育30 min;(4)吸去溫育槽中的液體并在搖擺搖床上用1.5 mL清洗緩沖液清洗膜條3次,每次5 min;(5)在溫育槽中加入1.5 mL已稀釋的酶結(jié)合物(堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人IgG),于室溫溫育30 min;(6)吸去溫育槽中的液體并在搖擺搖床上用1.5 mL清洗緩沖液清洗膜條3次,每次5 min;(7)在溫育槽中分別加入1.5 mL底物液, 于室溫溫育10 min;(8)吸去溫育槽中的液體,用蒸餾水清洗膜條3次,每次1 min。觀察著色帶的著色強(qiáng)度判斷相關(guān)抗體是否為陽性[6]。

    1.4 觀察指標(biāo)

    觀察對照組和觀察組的ANA、LKM-1、AMA M2、LC-1、SLA/LP的陽性率;不同稀釋度血清的ANA檢出情況及ANA者的核型情況[7]。

    1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

    采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析。計數(shù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,組間比較采用t檢驗,計數(shù)資料以%表示,采用χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各組研究對象抗體陽性率比較

    觀察組中ANA的陽性率(35.00%)高于對照組(21.86%),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組中LKM-1、AMA M2、LC-1及SLA/LP的陽性率分別為20.00%、35.00%、10.00%及20.00%,對照組中LKM-1、LC-1及SLA/LP的陽性率為0,AMA M2的陽性率為6.51%,觀察組各項陽性率顯著高于對照組,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

    2.2 各組研究對象不同血清稀釋度ANA比較

    對照組中ANA陽性患者中核顆粒型有20例(42.55%),核均質(zhì)性有14例(29.79%),主要以核顆粒型為主,兩組核型主要在1:100的血清稀釋度中檢出,觀察組中ANA陽性患者中核顆粒型有2例(28.57%),核均質(zhì)性有5例(71.43%),主要以核均質(zhì)型為主,兩種核型主要在1:1000的血清稀釋度中檢出,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

    3 討論

    據(jù)2017年9月統(tǒng)計結(jié)果顯示,我國乙肝病毒攜帶者超過9000萬人次,其中有2800萬人次為慢性乙肝患者,每年大約有33萬人次應(yīng)為乙肝或丙肝引發(fā)的肝癌或肝硬化死亡[8]。根據(jù)2014年北京市乙肝新發(fā)的發(fā)病率表明10萬人中有3例患病,比2013年有所下降,但仍能發(fā)現(xiàn)我國是乙肝大國[9]。根據(jù)相應(yīng)的研究發(fā)現(xiàn),自身抗體是機(jī)體在各種因素作用下,致使B淋巴細(xì)胞以自身組織為抗原產(chǎn)生相應(yīng)抗體,對機(jī)體正常組織存在攻擊性,使患者出現(xiàn)相應(yīng)的生理、病理改變,表現(xiàn)出相應(yīng)的癥狀,而乙肝病毒感染可加大機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng),刺激多種抗體產(chǎn)生,且抗體的種類與數(shù)量和疾病嚴(yán)重程度有關(guān)[10,11]。當(dāng)今對乙肝患者和AIH患者分別應(yīng)用干擾素和免疫抑制劑治療,干擾素以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞生成達(dá)到抗病毒目的,而免疫抑制劑抑制B細(xì)胞或T細(xì)胞增殖達(dá)到降低免疫反應(yīng)目的,兩種藥物的藥理相反,若給予相反的藥物會加重疾病病情[12,13],所以,自身抗體檢測對肝炎患者是很重要的。

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