ANA、LKM-1、AMAM2、LC-1及SLA/LP聯(lián)合檢測在乙肝病毒感染分型中的應(yīng)用研究

謝璟 陳建華 徐榮

[摘要] 目的 探討ANA、LKM-1、AMA M2、LC-1及SLA/LP聯(lián)合檢測在乙肝病毒感染分型中的應(yīng)用研究。 方法 選取2015年1月～2019年5月我院傳染科35例乙肝合并自身免疫性肝病患者作為觀察組，同時選取65例乙肝病毒感染患者作為對照組。觀察兩組血清抗核抗體（ANA）、抗肝腎微粒體Ⅰ型抗體（LKM-1）、抗線粒體抗體（AMA M2）、抗肝胞漿Ⅰ型抗體（LC-1）、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗體（SLA/LP）陽性率，對結(jié)果進(jìn)行分析。 結(jié)果 觀察組中ANA的陽性率（35.00%）高于對照組（21.86%），觀察組中LKM-1、AMA M2、LC-1及SLA/LP的陽性率均顯著高于對照組（P<0.05），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。對照組ANA陽性主要為核顆粒型，主要在1：100的血清稀釋度中檢出，觀察組ANA陽性主要為核均質(zhì)性，主要在1：1000的血清稀釋度中檢出，兩種核型稀釋度組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 多項自身抗體聯(lián)合檢測對乙肝及自身免疫性肝病的抗體檢測全面，ANA檢測是初篩試驗，LKM-1、AMA M2、LC-1及SLA/LP等是確證試驗，有助于臨床診斷及指導(dǎo)用藥。

[關(guān)鍵詞] 抗核抗體;肝自身抗體;乙肝病毒感染;自身免疫性肝病

[中圖分類號] R512.6 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-9701（2020）24-0021-03

[Abstract] Objective To investigate the application of combined detection of ANA， LKM-1， AMA M2， LC-1 and SLA/LP in typing of hepatitis B virus infection. Methods From January 2015 to May 2019， 35 patients with hepatitis B and autoimmune liver disease in the Department of Infectious Diseases of our hospital were selected as the observation group， and 65 patients with hepatitis B virus infection were selected as the control group. The positive rates of serum anti-nuclear antibody（ANA）， anti-liver and kidney microsome type I antibody（LKM-1）， anti-mitochondrial antibody（AMA M2）， anti-hepatic cytoplasmic type I antibody（LC-1）， and anti-soluble liver antigen/ liver-pancreas（SLA/LP） autoantibody of two groups were observed. The results were analyzed. Results The positive rate of ANA in the observation group（35.00%） was higher than that in the control group（21.86%）. The positive rates of LKM-1， AMA M2， LC-1 and SLA/LP in the observation group were significantly higher than those in the control group（P<0.05）， and the differences were statistically significant（P<0.05）. The ANA positive in the control group was mainly nuclear particle type， mainly detected at 1：100 serum dilution， and the ANA positive in the observation group was mainly nuclear homogeneity， mainly detected at 1：1000 serum dilution. The difference in two karyotype dilutions between the groups was statistically significant（P<0.05）. Conclusion The combined detection of multiple autoantibodies for the detection of hepatitis B and autoimmune liver diseases is comprehensive. The ANA test is a preliminary screening test. LKM-1， AMA M2， LC-1 and SLA/LP are confirmatory tests， which are helpful for clinical diagnosis. ?And guide medication.

[Key words] Antinuclear antibody; Liver autoantibody; Hepatitis B virus infection; Autoimmune liver disease

近些年來，我國各種肝炎的發(fā)病率呈逐年遞增趨勢，病毒性肝炎是在各種肝炎病毒對肝臟的侵害下患上的一種傳染病，有甲型、乙型、丙型、丁型及戊型五種類型，以乙型和丙型常見[1，2]，其中還有部分患有自身免疫性肝病。在當(dāng)前，對自身免疫性肝病的發(fā)病原因還不是很了解，但患者有食欲消減、精神疲乏、身體無力、惡心嘔吐等臨床表現(xiàn)，在B超及肝功能檢測上發(fā)現(xiàn)肝臟增大和肝功能異常，一部分患者還有關(guān)節(jié)疼痛、上呼吸道感染等臨床癥狀。對患者的身體健康安全和生活質(zhì)量有嚴(yán)重影響。所以研究乙型肝炎患者的臨床特征，并進(jìn)一步地了解其免疫情況，及時給予對癥治療是非常必要的[3，4]。本文通過研究65例乙肝病毒感染患者和35例乙肝合并自身免疫性肝病患者的不同抗體的表現(xiàn)情況，探討抗核抗體與肝自身抗體聯(lián)合檢測對乙肝感染分型應(yīng)用，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年1月～2019年5月65例乙肝病毒感染和35例乙肝合并自身免疫性肝病患者，均為醫(yī)院傳染科門診和住院患者，前者設(shè)為對照組，男45例，女20例，年齡22～78歲，平均（45.23±6.49）歲;后者設(shè)為觀察組，男24例，女11例，年齡24～75歲，平均（46.72±5.72）歲。兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者的ALT超過50 IU/L，AST超過50 IU/L，球蛋白超過30 g/L，對照組患者中相關(guān)抗原抗體指標(biāo)為陽性，觀察組及對照組中相關(guān)抗原抗體指標(biāo)為陰性。對照組患者符合2001年頒布的病毒性肝炎防治方案中乙肝診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有原發(fā)性的心、肝、腎等器官疾病的患者;存在乙肝外其他病毒感染患者及其他肝臟疾病的患者;精神異常不能正常交流的患者。

1.3 方法

1.3.1 抗核抗體檢測 ?所有研究對象于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取5 mL靜脈血液，以3000 r/min的轉(zhuǎn)速將血液中血清分離出來，將血清以1：100、1：320和1：1000的比例稀釋，采用間接免疫熒光法檢測血清抗核抗體（ANA），將Hep-2細(xì)胞和猴肝這兩種基質(zhì)作為抗原，按照試劑盒的使用說明書操作，試劑由北京和杰創(chuàng)新生物醫(yī)學(xué)科技有限公司提供。具體步驟為：（1）待測血清用洗滌液作1：100稀釋，并加入反應(yīng)孔內(nèi);（2）將抗原片蓋在倒扣板對應(yīng)的凹槽里，確保樣本與抗原基質(zhì)接觸，室溫孵育30 min;（3）用洗滌液輕輕從一側(cè)將反應(yīng)液沖洗掉，浸泡至洗片缸內(nèi)，靜置5 min后，再用蒸餾水沖洗1次;（4）在倒扣板的反應(yīng)孔內(nèi)加入ANA熒光二抗，將抗原片蓋在倒扣板對應(yīng)的凹槽里，確保樣本與抗原基質(zhì)接觸，室溫孵育30 min;（5）再次洗滌蒸餾水沖洗，在蓋玻片上滴加封片劑;（6）最后采用熒光顯微鏡觀察結(jié)果，若血清稀釋度≥1：100時細(xì)胞或組織出現(xiàn)黃綠色特異性熒光，則表明為陽性[5]，并對ANA陽性者作進(jìn)一步的檢測判斷核型。

1.3.2 肝自身抗體檢測 ?采用免疫印跡法檢查4項組合的肝自身抗體，包括抗肝腎微粒體Ⅰ型抗體（LKM-1）、抗線粒體M2型（AMA M2）、抗肝溶質(zhì)抗原Ⅰ型抗體（LC-1）、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗體（SLA/LP），取稀釋后的血清，按照說明書嚴(yán)格執(zhí)行操作，檢測中所使用的試劑為歐蒙公司生產(chǎn)，儀器為全自動免疫印跡儀，具體步驟為：（1）將待檢血清和血漿標(biāo)本用標(biāo)本緩沖液1：101稀釋;（2）將實驗?zāi)l放入溫育槽中溫育5 min，之后吸去溫育槽中的液體;（3）在溫育槽中分別加入1.5 mL已稀釋血清于室溫溫育30 min;（4）吸去溫育槽中的液體并在搖擺搖床上用1.5 mL清洗緩沖液清洗膜條3次，每次5 min;（5）在溫育槽中加入1.5 mL已稀釋的酶結(jié)合物（堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人IgG），于室溫溫育30 min;（6）吸去溫育槽中的液體并在搖擺搖床上用1.5 mL清洗緩沖液清洗膜條3次，每次5 min;（7）在溫育槽中分別加入1.5 mL底物液， 于室溫溫育10 min;（8）吸去溫育槽中的液體，用蒸餾水清洗膜條3次，每次1 min。觀察著色帶的著色強(qiáng)度判斷相關(guān)抗體是否為陽性[6]。

1.4 觀察指標(biāo)

觀察對照組和觀察組的ANA、LKM-1、AMA M2、LC-1、SLA/LP的陽性率;不同稀釋度血清的ANA檢出情況及ANA者的核型情況[7]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析。計數(shù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料以%表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組研究對象抗體陽性率比較

觀察組中ANA的陽性率（35.00%）高于對照組（21.86%），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。觀察組中LKM-1、AMA M2、LC-1及SLA/LP的陽性率分別為20.00%、35.00%、10.00%及20.00%，對照組中LKM-1、LC-1及SLA/LP的陽性率為0，AMA M2的陽性率為6.51%，觀察組各項陽性率顯著高于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2 各組研究對象不同血清稀釋度ANA比較

對照組中ANA陽性患者中核顆粒型有20例（42.55%），核均質(zhì)性有14例（29.79%），主要以核顆粒型為主，兩組核型主要在1：100的血清稀釋度中檢出，觀察組中ANA陽性患者中核顆粒型有2例（28.57%），核均質(zhì)性有5例（71.43%），主要以核均質(zhì)型為主，兩種核型主要在1：1000的血清稀釋度中檢出，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

據(jù)2017年9月統(tǒng)計結(jié)果顯示，我國乙肝病毒攜帶者超過9000萬人次，其中有2800萬人次為慢性乙肝患者，每年大約有33萬人次應(yīng)為乙肝或丙肝引發(fā)的肝癌或肝硬化死亡[8]。根據(jù)2014年北京市乙肝新發(fā)的發(fā)病率表明10萬人中有3例患病，比2013年有所下降，但仍能發(fā)現(xiàn)我國是乙肝大國[9]。根據(jù)相應(yīng)的研究發(fā)現(xiàn)，自身抗體是機(jī)體在各種因素作用下，致使B淋巴細(xì)胞以自身組織為抗原產(chǎn)生相應(yīng)抗體，對機(jī)體正常組織存在攻擊性，使患者出現(xiàn)相應(yīng)的生理、病理改變，表現(xiàn)出相應(yīng)的癥狀，而乙肝病毒感染可加大機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)，刺激多種抗體產(chǎn)生，且抗體的種類與數(shù)量和疾病嚴(yán)重程度有關(guān)[10，11]。當(dāng)今對乙肝患者和AIH患者分別應(yīng)用干擾素和免疫抑制劑治療，干擾素以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞生成達(dá)到抗病毒目的，而免疫抑制劑抑制B細(xì)胞或T細(xì)胞增殖達(dá)到降低免疫反應(yīng)目的，兩種藥物的藥理相反，若給予相反的藥物會加重疾病病情[12，13]，所以，自身抗體檢測對肝炎患者是很重要的。