VEGF-2578A/C多態(tài)性與子宮內(nèi)膜異位癥遺傳易感性的Meta分析

羅加歡，張若鵬，王惠瑩，劉瀏，周寧，張媛媛

1.大理大學臨床醫(yī)學院，云南 大理 671000；2.大理大學第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學科，云南 大理 671000

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMT)是子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)在子宮腔以外部位的一種婦科慢性炎癥性疾病，是導致不孕及盆腔疼痛的主要原因之一[1]。研究發(fā)現(xiàn)，EMT患病率占孕齡女性的5%～10%[2]，在不孕癥女性中為25%～35%,在盆腔痛女性中達39%～59%[3]。子宮內(nèi)膜異位癥已成為了影響生育期婦女生活質(zhì)量及增加其經(jīng)濟負擔的公共健康問題之一。EMT 的發(fā)生發(fā)展是遺傳和環(huán)境等多種因素共同作用的結(jié)果[2]，但其具體發(fā)病機制尚未完全清楚。EMT 患者一級親屬的患病風險明顯增加[4]，其患病率的增加有力地表明易感基因的存在，找出影響子宮內(nèi)膜異位癥患病風險的基因有助于闡明其發(fā)病機制。近年來，國內(nèi)外有一些研究報道了關(guān)于血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)-2578A/C 多態(tài)性與EMT 遺傳易感性的關(guān)系。但其相關(guān)研究樣本量小，且沒有統(tǒng)一結(jié)論，因此，本研究以Meta 分析的方法更準確的評價VEGF-2578A/C 基因多態(tài)性和EMT 遺傳易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 納入與排除標準

1.1.1 納入標準 (1)研究類型：病例-對照研究；(2)研究對象：病例組，經(jīng)確診的EMT患者，對照組，非EMT患者；(3)暴露因素：VEGF-2578A/C位點多態(tài)性；(4)結(jié)局指標：子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病風險；(5)文獻語種：中、英文文獻。

1.1.2 排除標準 (1)非原始研究(綜述、Meta分析等)；(2)無法獲得基因分布數(shù)據(jù)的文獻；(3)重復發(fā)表的文獻，同一作者，同一單位選取最新、樣本量最大的數(shù)據(jù)。

1.2 文獻檢索策略 通過計算機全面檢索PubMed、EMbase、中國知網(wǎng)(CNKI)、中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據(jù)庫(CBM)和萬方數(shù)據(jù)庫，搜索公開發(fā)表的關(guān)于VEGF-2578 多態(tài)性與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病風險相關(guān)的病例-對照研究，檢索時間均為從建庫至2019 年10月10 日。中文檢索式：“血管內(nèi)皮生長因子”、“VEGF”、“基因多態(tài)性”、“遺傳多態(tài)性”、“SNP”、“子宮內(nèi)膜異位癥”、“EMT”。英文檢索式：“vascular endothelial growth factors”、“VEGF”、“genetic Polymorphism”、“gene polymorphism”、“genetic variation”、“SNP”、“endometriosis”、“endometrioma”、“EMT”。通過手工檢索納入文獻的相關(guān)參考文獻以提高文獻檢索范圍，納入所缺失的文獻。

1.3 數(shù)據(jù)提取 由兩位研究者按納入及排除標準篩選文獻、提取資料并交叉核對。若遇分歧，則討論解決，若仍無法解決，則與經(jīng)驗豐富的第三人協(xié)商后確定。文獻篩選時首先剔除重復文獻，然后閱讀文獻題目，在排除明顯不相關(guān)的文獻后，進一步閱讀摘要和全文以確定是否納入。如有需要，通過郵件與原始研究的作者聯(lián)系以獲取未確定但對本研究非常重要的信息。提取的資料包括：(1)基本信息：第一作者、發(fā)表時間、研究國家、種族、樣本量；(2)基因位點、基因分型及基因頻率；(3)文獻質(zhì)量評價的關(guān)鍵要素。

1.4 文獻質(zhì)量評價 由兩位研究者獨立采用紐卡斯爾-渥太華量表(newcastle-ottawa scale，NOS)對納入文獻進行文獻質(zhì)量評價[5]，并交叉核對結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學方法 首先對納入研究的對照組的基因型進行Hardy-Weinberg 平衡(HWE 平衡)檢驗，若P＜0.05，則對照組基因型不符合HWE 平衡。隨后分別計算5 種遺傳模型，包括等位基因模型(AvsC)、顯性模型(AA+ACvsCC)、隱性模型(AAvsAC+CC)、雜合子模型(ACvsCC)和純合子模型(AAvsCC)下的基因型分布。采用Microsoft Excel 2016 軟件統(tǒng)計數(shù)據(jù)。采用Stata 14.0軟件進行Meta分析。采用比值比(odds ratio，OR)及其95% 可信區(qū)間(confidence interval，CI)評價VEGF-2578A/C 基因多態(tài)性與EMT 之間的關(guān)聯(lián)強度。檢驗水準α=0.05。對納入研究的多個研究結(jié)果采用I2和Q 檢驗進行異質(zhì)性檢驗，當P＞0.1 且I2＜50%時，則認為異質(zhì)性可忽略，采用固定效應模型，否則認為異質(zhì)性明顯，采用隨機效應模型合并統(tǒng)計量，并對納入研究數(shù)≥4 篇的文獻按種族進行亞組分析尋找異質(zhì)性來源。通過逐一剔除單個研究的方法進行敏感性分析來評估Meta 分析合并結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性。用Egger's 和Begg's 檢驗判斷是否存在發(fā)表偏倚，P＞0.1視為不存在發(fā)表偏倚。

2 結(jié)果

2.1 文獻篩選流程及結(jié)果 粗篩獲得114 篇文獻，經(jīng)逐層篩選后納入7 個研究[6-12]，文獻篩選流程及結(jié)果見圖1。

圖1 文獻篩選流程及結(jié)果

2.2 納入文獻的基本特征和質(zhì)量評價結(jié)果 納入研究總樣本量為2 335例，包括病例組1 165例及對照組1 170例。納入文獻基本特征和質(zhì)量評價見表1。

2.3 Meta 分析 Meta 分析顯示VEGF-2578A/C多態(tài)性與EMT易感性無關(guān)聯(lián)，見表2。由于異質(zhì)性較大，根據(jù)種族進行亞組分析，結(jié)果顯示：在高加索人人群中等位基因模型、顯性模型、雜合子模型會增加EMT 發(fā)生的風險(P＜0.05)，而在亞洲人人群中等位基因模型、顯性模型會降低EMT 發(fā)生的風險(P＜0.05)，見表3、圖2和圖3。

2.4 敏感性分析 本文對上述5 個基因模型的合并效應量進行了敏感性分析，以等位基因模型敏感度分析為例，在逐一排除文獻后，Meta 分析結(jié)果無“質(zhì)”的變化，提示本研究結(jié)果穩(wěn)定，可靠性高(圖4)。

2.5 發(fā)表偏倚 采用Egger’s 和Begg’s 檢驗評價發(fā)表偏倚，顯示5 種遺傳模型中均不存在發(fā)表偏倚(P＞0.1，見表2)。

表1 納入研究的基本特征及質(zhì)量評價

表2 VEGF-2578A/C多態(tài)性與EMT遺傳易感性的Meta分析

圖2 VEGF-2578A/C的等位基因模型(A vs C)與EMT遺傳易感性的亞組分析

表3 VEGF-2578A/C多態(tài)性與EMT遺傳易感性的亞組分析

圖3 VEGF-2578A/C的顯性模型(AA+AC vs CC)與EMT遺傳易感性的亞組分析

圖4 VEGF-2578A/C的等位基因模型(A vs C)與EMT遺傳易感性的敏感性分析

3 討論

本Meta分析共納入了7個研究，發(fā)現(xiàn)VEGF-2578A/C基因多態(tài)性與EMT 易感性無關(guān)，與MéAR 等[13]的結(jié)論基本一致，由于他們的研究僅納入了英文文獻，且并未進行異質(zhì)性來源的分析，其結(jié)論是否受種族、地域的影響無法得知。由于本次Meta 分析納入研究的異質(zhì)性較大，按種族進行亞組分析發(fā)現(xiàn)在高加索人人群中VEGF-2578A/C 的等位基因模型、顯性模型、雜合子模型是EMT 的易感因素，而在亞洲人亞組中VEGF-2578A/C的等位基因、顯性模型是EMT的保護因素。該結(jié)論與LI 等[14]的研究VEGF-2578A/C 多態(tài)性是EMT的保護因素的結(jié)論不完全相同，可能的原因是本次研究對病例組的納入標準更為嚴苛，KANG等[15]的研究不符合本次研究的納入標準故未被納入，且LI等[14]納入的研究數(shù)量少，本研究是在其研究的基礎上的更新性研究，本研究更具說服力。

有研究認為在EMT 中子宮內(nèi)膜細胞的轉(zhuǎn)移和種植與局部新生血管的形成有關(guān)[16-17]，而VEGF因子具有促進內(nèi)皮細胞遷移、血管通透性增加及新生血管形成的作用[18]。EMT 作為一種慢性雌激素依賴性婦科疾病，雌激素對VEGF 釋放具有促進作用[19]。而且在EMT 中miR-33b 的下調(diào)可增強子宮內(nèi)膜增殖以及VEGF 的釋放[20]，由此可見VEGF 對EMT 的進展及惡化具有一定促進作用。

VEGF基因定位于染色體6p21.3，全長14 kb，由8個外顯子、7 個內(nèi)顯子組成[21]。該基因具有高度多態(tài)性，雖然大多數(shù)基因位點多態(tài)性是無功能性的，但功能性基因位點多態(tài)性可能導致VEGF調(diào)控的變化，進一步的研究發(fā)現(xiàn)VEGF的轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平取決于生長因子、細胞因子和缺氧等[22]。在EMT中促炎性細胞因子分泌例如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)將作用于VEGF 基因，促進VEGF 蛋白的表達[23]。本研究表明VEGF-2578A/C 的突變?yōu)楣δ苄酝蛔儯捎绊慥EGF 的表達，但該基因突變可能在不同人種存在差異。在高加索人群中，VEGF-2578A/C 的突變將導致VEGF 表達進一步增加，為EMT 的易感因素，而在亞洲人群中，該基因位點的突變將導致VEGF 表達降低，為EMT的保護因素。

通過敏感性分析發(fā)現(xiàn)所有的結(jié)果穩(wěn)定，可靠性高。但本研究仍存在一定的局限性：(1)部分研究未直接提供所有數(shù)據(jù)，部分數(shù)據(jù)利用已知數(shù)據(jù)間接計算得出，與其真實值可能存在一定出入；(2)本研究由于語言的限制，僅納入了中、英文文獻，導致資料收集不全面，可能造成語言偏倚；(3)該研究僅研究了一種基因位點，未考慮其他基因?qū)λ芯炕虻挠绊?，所以可能會對證據(jù)的質(zhì)量產(chǎn)生一定影響。故使用本文結(jié)論應謹慎。

綜上所述，本研究表明VEGF-2578A/C 突變在高加索人人群中是EMT的易感因素，在亞洲人人群則為EMT的保護因素。本研究旨在完善EMT的基因機制網(wǎng)絡，同時也可為從基因多態(tài)性角度考慮EMT的預測靶標提供一定的參考。由于納入研究的局限性，上述結(jié)論尚需國內(nèi)外進一步開展多中心、高質(zhì)量的臨床試驗予以驗證。