雄蠶益腎方對(duì)遲發(fā)性性腺功能減退癥大鼠睪丸組織形態(tài)學(xué)改變及抗氧化作用研究

唐雪 李波男 周海亮 何清湖 周青 熊偉 高瑞松 林群芳 周興

〔摘要〕 目的 探討雄蠶益腎方對(duì)遲發(fā)性性腺功能減退癥（lateonset hypogonadism， LOH）大鼠睪丸組織形態(tài)學(xué)改變及抗氧化作用。方法 將18月齡SD雄性大鼠隨機(jī)分為模型組，丙酸睪酮組，雄蠶益腎方低、中、高劑量組，2月齡SD雄性大鼠設(shè)為正常組。雄蠶益腎方低、中、高劑量組分別給予10.4、20.8、41.6 g/kg的雄蠶益腎方配方顆粒劑灌胃;丙酸睪酮組肌注5.21 mg/kg丙酸睪酮，隔日1次;正常組和模型組給予相同體積的蒸餾水灌胃，均連續(xù)28 d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，記錄大鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間，稱體質(zhì)量、采血，ELSIA法檢測睪酮（T），睪丸組織進(jìn)行黃嘌呤氧化酶法（SOD）、紫外吸收法（CAT）、硫代巴比妥酸法（MDA）、病理及電鏡檢測。結(jié)果 與正常組比較，模型組T水平降低（P<0.05），懸尾不動(dòng)時(shí)間延長（P<0.05），睪丸組織抗氧化酶SOD、CAT降低（P<0.05）、MDA升高（P<0.05），HE染色睪丸間質(zhì)減少，電鏡示Leydig細(xì)胞線粒體數(shù)量減少、水腫明顯，均符合LOH改變。與模型組比較，雄蠶益腎方各劑量組和丙酸睪酮組均能提高T水平（P<0.05）、縮短懸尾不動(dòng)時(shí)間（P<0.05），雄蠶益腎方中、高劑量組和丙酸睪酮組均能升高SOD、CAT（P<0.05），降低MDA（P<0.05）。雄蠶益腎方各劑量組大鼠睪丸組織生精小管內(nèi)精子數(shù)量增多，睪丸間質(zhì)增加;電鏡示Leydig細(xì)胞線粒體數(shù)量明顯增多，部分可見線粒體鞘，部分線粒體嵴清晰，線粒體水腫不明顯。結(jié)論 雄蠶益腎方能提升LOH大鼠T水平、縮短懸尾不動(dòng)時(shí)間、一定程度改變睪丸組織形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)，可能與提高睪丸組織抗氧化能力有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 男性遲發(fā)性性腺功能減退癥;雄蠶益腎方;睪酮;組織形態(tài);抗氧化

〔中圖分類號(hào)〕R256.5? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2020.08.009

〔Abstract〕 Objective To study the effects of Xiongcan Yishen Recipe on testicular histomorphology and antioxidation in rats with late onset hypogonadism （LOH）. Methods The 18-month-old SD male rats were randomly divided into a model group， a testosterone propionate group， a Xiongcan Yishen Recipe low， middle and high dose group. The 2-month-old SD male rats were set as normal group. Xiongcan Yishen Recipe low， middle and high dose group were given 10.4 g/kg， 20.8 g/kg and 41.6 g/kg Xiongcan Yishen Recipe granules by gavage respectively; Testosterone propionate group was intramuscularly given 5.21 mg/kg testosterone propionate， once every other day. The normal group and the model group were given the same volume of distilled water by gavage for 28 days. At the end of the experiment， the immobility time of tail suspension experiment was recorded. They were weighed， and blood was collected. Testosterone （T） was detected by ELSIA， and xanthine oxidase method was used to detect superoxide dismutase （SOD） in testicular tissue. Ultraviolet absorption method was used to detect catalase （CAT）， and thiobarbituric acid method was used to detect malondialdehyde （MDA）， pathology and electron microscopy. Results Compared with the normal group， T level in the model group decreased （P<0.05）. Tail suspension time prolonged （P<0.05）. antioxidant enzyme SOD， CAT decreased （P<0.05） and MDA increased （P<0.05） in testicular tissue. HE staining testicular stroma decreased. Electron microscopy showed that Leydig cell mitochondria decreased， and edema was obvious， which was in line with LOH change. Compared with the model group， each dose group of Xiongcan Yishen Recipe and testosterone propionate group could increase T level （P<0.05） and shorten tail suspension time （P<0.05）， while SOD and CAT （P<0.05） increased， and MDA （P<0.05） was significantly decreased in the middle and high dose groups and testosterone propionate group. The number of sperm in the seminiferous tubules of the testis tissue of rats in each dose of Xiongcan Yishen Recipe increased， and the interstitium of the testis increased. Electron microscopy showed that the number of mitochondria in Leydig cells increased significantly， and some mitochondrial sheaths were visible. Some mitochondrial cristae were clear， and mitochondrial edema was not obvious. Conclusion Xiongcan Yishen Recipe can improve T level， reduce the time of tail suspension， and change the morphology and ultrastructure of testis to some extent， which may be related to improving the antioxidant capacity of testis.

〔Keywords〕 late onset hypogonadism in male; Xiongcan Yishen Recipe; testosterone; histomorphometric; antioxidation

隨著人口老齡化，許多與年齡相關(guān)的疾病發(fā)病率越來越高，如心腦血管疾病、高血壓病、腫瘤、前列腺增生、糖尿病等。遲發(fā)性性腺功能減退癥（lateonset hypogonadism， LOH）也屬于常見的年齡相關(guān)疾病之一，是指部分中老年男性患者由于雄激素缺乏所出現(xiàn)的一系列臨床綜合征。流行病學(xué)調(diào)查顯示國內(nèi)LOH患病率為10%～20%[1-2]。臨床指南[3]認(rèn)為，LOH診斷必須基于患者有雄激素缺乏相關(guān)的癥狀和體征（包括精神心理癥狀、心血管舒縮癥狀、體能下降癥狀、性功能障礙癥狀），同時(shí)還存在血清睪酮（testosterone， T）水平低下，兩者缺一不可。因此，睪酮補(bǔ)充治療（testosterone supplementation therapy， TST）[4]被視為LOH治療的金標(biāo)準(zhǔn)，但也存在諸多爭議[5]，包括TST的劑量和療程，尤其是TST的安全性問題，如是否增加患前列腺癌、心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)，以及警惕睡眠呼吸暫停、紅細(xì)胞增多癥發(fā)生等，這些都要在TST期間定期監(jiān)測。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，LOH病發(fā)于《素問·上古天真論》中所闡述的“六八”至“八八”階段，“天癸竭、腎臟衰”是致病之本，“腎虛肝郁”為病機(jī)關(guān)鍵。因此，臨床治療多從補(bǔ)腎助陽、滋腎柔肝、養(yǎng)心安神等方面入手[6-8]，系統(tǒng)評(píng)價(jià)[9]報(bào)道，中醫(yī)藥治療LOH臨床總體療效與TST相當(dāng)，尤其在改善LOH患者性功能減退癥狀總分、血清總T水平以及勃起障礙、潮熱盜汗等中醫(yī)證候評(píng)分方面還優(yōu)于TST（P<0.01）。

雄蠶益腎方是湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院用于治療LOH的經(jīng)典成方，組方源于國家級(jí)名老中醫(yī)譚新華教授，以“天癸竭”“乙癸同源”理論為指導(dǎo)，強(qiáng)調(diào)“腎肝同治”，組方精妙，臨床觀察證實(shí)雄蠶益腎方治療LOH療效確切[10-11]，但具體機(jī)制仍需進(jìn)一步探討。研究[12-13]證實(shí)，增齡引起的睪丸超微形態(tài)學(xué)改變以及氧化應(yīng)激損傷，與T水平低下、LOH發(fā)病密切相關(guān)。因此，本研究擬在上述研究基礎(chǔ)上，從睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)和氧化應(yīng)激角度探討雄蠶益腎方治療LOH的可能機(jī)制。

1 材料

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠（許可證號(hào)：SCXK<滬>2016-0005），15月齡，雄性，體質(zhì)量700～800 g，25只，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司;SPF級(jí)SD大鼠（許可證號(hào)：SCXK<湘>2016-0002），2月齡，雄性，體質(zhì)量180～220 g，5只，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。所有大鼠飼養(yǎng)在濕度55%～65%，溫度20～24 ℃的環(huán)境中，自由采食和飲水。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2? 實(shí)驗(yàn)藥物和試劑

雄蠶益腎方配方顆粒（雄蠶蛾30 g，淫羊藿15 g，熟地黃15 g，枸杞子15 g，白芍10 g，炒蒺藜15 g），由江陰天江藥業(yè)有限公司提供。丙酸睪酮注射液（寧波第二激素廠，1 mL：25 mg/支，獸藥字<2016>110251054）;T（貨號(hào)RA20653）ELISA試劑盒，購自Bioswamp生物技術(shù)有限公司;超氧化物歧化酶（superoxide Dismutase， SOD）（貨號(hào)A001-1-1）、過氧化氫酶（catalase， CAT）（貨號(hào)A007-2-1）、丙二醛（malondialdehyde， MDA）（貨號(hào)A003-1-1）生化試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。

1.3? 實(shí)驗(yàn)儀器

352型酶標(biāo)儀（芬蘭Labsystems Multiskan MS）;SmartSpecTMPlus紫外分光光度計(jì)（美國Bio-Rad）;Tanon-5200全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀（上海天能）;UC-7超薄切片機(jī)（Leica）;HT7700透射電鏡（日立）;UPT優(yōu)普特實(shí)驗(yàn)室超純水器（法國Millipore）。

2 方法

2.1? 動(dòng)物分組與給藥方法

參照J(rèn)eong HC[14]等造模方法，18月齡及以上SD雄性大鼠可直接視為LOH大鼠模型。本研究將購進(jìn)的15月齡SD雄性大鼠正常喂養(yǎng)12周后達(dá)到18月齡，則視為LOH模型復(fù)制成功。按照隨機(jī)數(shù)表法，將25只大鼠分成5組，即模型組（MG）、丙酸睪酮組（TG）、雄蠶益腎方-低劑量組（xiong can-lowdose group， XG-l）、雄蠶益腎方-中劑量組（xiong can-middledose

group， XG-m）、雄蠶益腎方-高劑量組（xiong can-highdose group， XG-h），每組5只。待LOH模型復(fù)制成功后，另取5只2月齡SD雄性大鼠設(shè)為正常組（NG）。

XG-l給予10.4 g/kg體質(zhì)量劑量的雄蠶益腎方配方顆粒劑（按60 kg體質(zhì)量成年人一天服用100 g，根據(jù)人和大鼠等效劑量換算，溶于蒸餾水制成2 g/mL濃度懸液）進(jìn)行灌胃，XG-m、XG-h分別按2倍、4倍于成人的等效劑量給藥，即20.8、41.6 g/kg體質(zhì)量劑量。XG-l、XG-m每天灌胃1次，XG-h因藥物濃度過高，每天分2次灌胃，連續(xù)28 d;TG大鼠肌注5.21 mg/kg體質(zhì)量劑量的丙酸睪酮（按60 kg體質(zhì)量成年人一次50 mg，根據(jù)人和大鼠等效劑量換算），每周3次（周1、3、5執(zhí)行），連續(xù)28 d;NG、MG給予相同體積的蒸餾水灌胃。實(shí)驗(yàn)期間MG、XG-l、XG-m、XG-h各死亡大鼠1只，TG死亡大鼠2只。

末次給藥12 h后，烏拉坦麻醉，處死所有動(dòng)物，稱質(zhì)量、采血，左側(cè)睪丸部分保存于4%多聚甲醛用于病理檢查，部分保存于2.5%戊二醛用于電鏡檢查，右側(cè)睪丸組織直接凍存于-80 ℃冰箱用于生化檢測。血液離心管分裝，3 000 r/min，10 min，分離出血清，-80 ℃冰箱保存待檢。

睪丸指數(shù)=雙側(cè)睪丸質(zhì)量（g）/體質(zhì)量（g）×100%

2.2? 大鼠懸尾實(shí)驗(yàn)[15]

于末次給藥后進(jìn)行。將大鼠尾端2 cm的部位用膠帶固定在一水平金屬桿上，大鼠倒掛后金屬桿高度要使大鼠鼻子距離水平地面20～25 cm。懸掛兩側(cè)用隔板擋開視線，避免同時(shí)實(shí)驗(yàn)時(shí)受到其他大鼠干擾，但要保證大鼠在懸掛時(shí)不能碰觸到隔板。大鼠為克服不正常的體位而掙扎活動(dòng)，活動(dòng)一定時(shí)間后，會(huì)出現(xiàn)間斷性“不動(dòng)”，顯示“失望”狀態(tài)，如此反復(fù)。計(jì)算6 min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間。此實(shí)驗(yàn)?zāi)芤欢ǔ潭确从炒笫蟮囊钟舫潭取?/p>

2.3? 睪丸組織形態(tài)學(xué)觀察

取相同部位睪丸組織經(jīng)4%多聚甲醛固定24 h，常規(guī)脫水、浸蠟、石蠟包埋、切片（4 μm）、固定，HE染色后，Motic光學(xué)顯微鏡下觀察。

2.4? 睪丸間質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察

取相同部位睪丸組織塊約1 mm×1 mm×3 mm，2.5%戊二醛固定、丙酮梯度脫水、浸泡、包埋、固化，Leica UC-7超薄切片機(jī)切片50～100 nm，3%醋酸鈾以及硝酸鉛雙染色，日立HT7700透射電鏡觀察、拍片。

2.5? 大鼠血清T含量檢測

按照Bioswamp生物技術(shù)有限公司提供的T ELISA試劑盒的詳細(xì)過程要求，檢測大鼠血清中T的含量。

2.6? 大鼠睪丸組織SOD、CAT、MDA檢測

取相同部位睪丸組織，按照南京建成生物工程研究所黃嘌呤氧化酶法（SOD）、紫外吸收法（CAT）、硫代巴比妥酸法（MDA）試劑盒的要求，將睪丸組織制成10%的勻漿液，分光光度計(jì)計(jì)算SOD、CAT、MDA的活力。

2.7? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 20.0進(jìn)行分析，符合正態(tài)分布及方差齊性的多組定量資料采用One-Way ANOVA test，方差不齊資料采用Tamhanes T2 test;不符合正態(tài)分布及方差齊性的多組定量資料采用Kruskal Wallis test方法進(jìn)行比較。

3 結(jié)果

3.1? 雄蠶益腎方對(duì)LOH大鼠睪丸指數(shù)的影響

與NG比較，睪丸指數(shù)顯著降低（P<0.05）。

與MG比較，TG、雄蠶益腎方各組睪丸指數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。說明上述藥物干預(yù)并不能影響LOH大鼠睪丸指數(shù)。見表1。

3.2? 雄蠶益腎方對(duì)LOH大鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響

與NG比較，MG懸尾不動(dòng)時(shí)間顯著延長（P<0.05），反映LOH大鼠出現(xiàn)抑郁狀態(tài)，符合臨床LOH出現(xiàn)精神神經(jīng)異常和體能下降要求。

與MG比較，TG、雄蠶益腎方各組懸尾不動(dòng)時(shí)間顯著縮短（P<0.05），說明上述各藥物干預(yù)組均能縮短LOH大鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間。

與TG比較，XG-l、XG-m懸尾不動(dòng)時(shí)間顯著縮短（P<0.05），XG-h差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。說明XG-l、XG-m在降低LOH大鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間方面優(yōu)于TG。見表2。

3.3? 雄蠶益腎方對(duì)LOH大鼠血清T的影響

與NG比較，MG血清T水平顯著降低（P<0.05），符合LOH大鼠血清T水平低下的特點(diǎn)，滿足LOH模型要求。

與MG比較，TG、雄蠶益腎方各組血清T水平顯著升高（P<0.05），說明上述各藥物干預(yù)組均能改善LOH大鼠血清T水平。

與TG比較，XG-l、XG-h血清T水平顯著降低（P<0.05），XG-m差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。說明XG-m改善LOH大鼠睪酮水平與TG相當(dāng)。見表2。

3.4? 雄蠶益腎方對(duì)LOH大鼠睪丸組織SOD、CAT、MDA的影響

與NG比較，MG SOD、CAT水平顯著降低（P<0.05），MDA水平顯著升高（P<0.05），說明LOH大鼠睪丸組織發(fā)生氧化應(yīng)激損傷。

與MG比較，TG、XG-h、XG-m各組SOD、CAT水平顯著升高（P<0.05）、MDA水平顯著降低（P<0.05），XG-lSOD、CAT、MDA差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。說明TG、XG-h、XG-m能改善LOH大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)。

與TG比較，XG-hSOD水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），XG-hCAT顯著升高（P<0.05），XG-h、XG-m MDA均顯著升高（P<0.05）。提示XG-h升高SOD水平與TG相當(dāng)，改善CAT水平優(yōu)于TG，而降低MDA水平，TG優(yōu)于XG-h、XG-m。見表3。

3.5? 雄蠶益腎方對(duì)大鼠睪丸組織形態(tài)學(xué)影響

NG大鼠睪丸各級(jí)生精細(xì)胞發(fā)育正常，層次清晰，睪丸間質(zhì)豐富;MG大鼠睪丸生精細(xì)胞數(shù)量減少，大量吞噬細(xì)胞，精子少，睪丸間質(zhì)稀少;TG大鼠睪丸生精小管水腫，睪丸間質(zhì)萎縮;雄蠶益腎方各組大鼠睪丸生精小管內(nèi)精子數(shù)量增多，睪丸間質(zhì)增多明顯。見圖1。

3.6? 雄蠶益腎方對(duì)大鼠Leydig細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)影響

NG Leydig細(xì)胞線粒體數(shù)量多，聚集成線粒體鞘，線粒體嵴清晰，無水腫;MG線粒體數(shù)量明顯減少，線粒體水腫明顯，線粒體嵴不清晰，出現(xiàn)水腫擴(kuò)張，空泡樣變;TG較雄蠶益腎方各組、NG線粒體減少，部分線粒體水腫，部分線粒體嵴清晰;雄蠶益腎方各組線粒體數(shù)量明顯增多，部分可見線粒體鞘，部分線粒體嵴清晰，線粒體水腫不明顯。見圖2。

4 討論

40歲以后男性體內(nèi)血清T水平將以每年0.8%～2%的速度緩慢下降[4]，T水平低下是LOH發(fā)病的核心病機(jī)[16]，本研究中LOHMG大鼠血清T水平顯著低于NG（P<0.05），說明該模型完全符合LOH病理要求。Leydig cell是T合成的主要場所，因此在增齡導(dǎo)致T水平低下、LOH發(fā)病相關(guān)研究中，Leydig細(xì)胞是研究的關(guān)鍵點(diǎn)。許多研究[16-17]認(rèn)為，隨著年齡的增長，Leydig細(xì)胞數(shù)量減少和儲(chǔ)備功能下降是主要原因之一。一方面增齡導(dǎo)致Leydig細(xì)胞數(shù)量減少。Neaves W B等[12]研究顯示，與青年組（20～48歲）相比，老年組（50～76歲）Leydig細(xì)胞核數(shù)量減少了44%、核質(zhì)平均總?cè)萘繙p少了40%，并且都與年齡呈負(fù)相關(guān)。同時(shí)Leydig細(xì)胞在形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)方面也會(huì)發(fā)生改變，鄧春華等[18]研究報(bào)道，老年大鼠（20月齡）HE染色提示Leydig細(xì)胞體積變小，胞質(zhì)濃縮，染色加深，細(xì)胞核固縮，可見雙核、三核細(xì)胞;電鏡提示Leydig細(xì)胞胞質(zhì)含量減少，部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)出現(xiàn)水腫，常見線粒體嵴脫落，脂滴多而大，胞核異染色質(zhì)增多。本研究中18月齡LOH大鼠睪丸組織HE染色示睪丸間質(zhì)減少，Leydig細(xì)胞電鏡示線粒體數(shù)量減少，水腫明顯，并伴有空泡樣變，與上述報(bào)道存在有一致性（見圖1-2）。雄蠶益腎方干預(yù)后，LOH大鼠睪丸間質(zhì)明顯增多，電鏡示線粒體數(shù)量增加、水腫減輕，說明雄蠶益腎方能一定程度改善LOH大鼠睪丸組織形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)。

另一方面，增齡導(dǎo)致Leydig細(xì)胞儲(chǔ)備功能減退。形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的異?？赡苁遣G酮合成酶系整體功能衰退的表象。睪酮的合成涉及一系列的酶促反應(yīng)與過程，主要與類固醇合成酶系（CYP11A1、HSD3B、CYP17A1、HSD17B）和膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)（StAR、TSPO）密切相關(guān)[19-20]。增齡將影響上述酶的活性或表達(dá)，直接導(dǎo)致Leydig細(xì)胞中類固醇合成通路上出現(xiàn)多重缺陷。目前對(duì)于這一改變的機(jī)制研究還存在許多不確定性，但有證據(jù)顯示Leydig細(xì)胞內(nèi)氧化還原反應(yīng)失衡肯定參與其中。因?yàn)榧?xì)胞內(nèi)各種促氧化劑與抗氧化劑的失衡，將導(dǎo)致DNA、蛋白質(zhì)和/或脂質(zhì)損傷，進(jìn)而導(dǎo)致功能障礙[21]。

活性氧（ROS）是正常細(xì)胞代謝過程中的產(chǎn)物，而在Leydig細(xì)胞中ROS產(chǎn)生會(huì)更高，因?yàn)槌司€粒體電子傳遞鏈過程產(chǎn)生ROS，CYP11A1羥基化類固醇過程中還會(huì)產(chǎn)生ROS。隨著年齡增加，ROS在Leydig細(xì)胞內(nèi)蓄積，將導(dǎo)致Leydig細(xì)胞凋亡增加[22]、線粒體功能紊亂[23]，同時(shí)ROS還可介導(dǎo)c-JUN信號(hào)通路抑制Nr77轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而降低睪酮合成酶基因表達(dá)[24]。SOD、CAT是機(jī)體內(nèi)最主要的抗氧化酶，是生物體防御氧化應(yīng)激的第一道防線。SOD將體內(nèi)產(chǎn)生的ROS分解生成H2O2和O2，CAT再催化H2O2生成H2O和O2，通過清除超氧陰離子，進(jìn)而保護(hù)細(xì)胞免受損傷，維持正常生理功能。MDA是脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物，它反映了機(jī)體受氧化損傷的程度。本研究顯示，LOH大鼠睪丸組織SOD、CAT含量顯著降低，提示增齡誘發(fā)的大量活性氧自由基產(chǎn)生，并得不到有效清除，使抗氧化酶SOD、CAT活性受到抑制，機(jī)體受到氧化損傷，脂質(zhì)過氧化程度加劇，因此，作為脂質(zhì)過氧化作用代謝產(chǎn)物的MDA含量就會(huì)增加。本研究中TG、XG-m、XG-h均能改善LOH氧化應(yīng)激指標(biāo)，以XG-h升高SOD、CAT最明顯，說明雄蠶益腎方能提高睪丸組織抗氧化酶活性，并呈明顯劑量依賴關(guān)系。

T在體內(nèi)以3種形式存在，即游離睪酮（FT，2%）、白蛋白結(jié)合睪酮（Alb-T，54%）、與性激素結(jié)合球蛋白結(jié)合睪酮（44%），前兩者才是具有生物活性的睪酮（Bio-T）[25]。本研究TG、雄蠶益腎方各組均能提高LOH大鼠血清T水平，以TG改善最明顯。但在降低LOH大鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間方面，XG-m、XG-l又明顯優(yōu)于TG。這也正是中醫(yī)藥治療LOH的優(yōu)勢(shì)所在，一方面能提高T水平，另一方面，更能有效緩解LOH臨床癥狀，并優(yōu)于TST[9]。

綜上所述，本研究證實(shí)了雄蠶益腎方能提高LOH大鼠血清T水平，降低懸尾不動(dòng)時(shí)間，影響睪丸組織形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)，并通過增加睪丸組織抗氧化酶SOD、CAT活性、降低MDA含量，提升睪丸組織抗氧化能力。但本研究還存在一定局限性，因?yàn)椴G酮水平的下降，除了與睪丸本身有關(guān)，也與下丘腦-垂體-睪丸軸內(nèi)分泌相關(guān)，但本研究還未涉及;另外雄蠶益腎方是否會(huì)影響睪酮合成酶系和/或膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)酶的活性與表達(dá)，是否會(huì)影響Leydig細(xì)胞自噬，這都需要接下來的進(jìn)一步研究。

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（本文編輯? 賀慧娥）