冠心病患者miR-126、sVCAM-1水平變化及臨床意義

楊南然 王曉群 劉曉暉

[摘要] 目的 探討冠心?。–HD）患者血漿miR-126、可溶性血管細(xì)胞黏附分子-1（sVCAM-1）水平變化及臨床意義。 方法 選擇2018年2月—2019年12月在廣東省普寧市人民醫(yī)院住院的CHD患者103例，依據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)分為急性冠脈綜合征（ACS）組（58例）和穩(wěn)定型心絞痛（SAP）組（45例），另選取非CHD體檢者55例為對(duì)照組。所有患者接受冠狀動(dòng)脈造影術(shù)，并采用冠狀動(dòng)脈狹窄程度積分（Gensini）法評(píng)價(jià)冠狀動(dòng)脈狹窄，檢測(cè)血漿miR-126和sVCAM-1水平，采用Pearson相關(guān)系數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果 ACS組患者sVCAM-1水平、Genisi評(píng)分顯著高于SAP組和對(duì)照組，miR-126均低于SAP組和對(duì)照組（均P < 0.05），且SAP組miR-126水平低于對(duì)照組，Gensini評(píng)分高于對(duì)照組（均P < 0.05）;冠狀動(dòng)脈多支病變和中重度病變患者miR-126分別低于單支病變和輕度病變患者（P < 0.05），多支病變和中重度病變患者sVCAM-1分別高于單支病變和輕度病變患者（P < 0.05）;相關(guān)性分析顯示，CHD患者miR-126與病變冠狀動(dòng)脈支數(shù)（r = -0.536，P = 0.007）、Gensini評(píng)分（r = -0.574，P = 0.015）均呈負(fù)相關(guān)，sVCAM-1與病變冠狀動(dòng)脈支數(shù)（r = 0.619，P = 0.000）、Gensini評(píng)分（r = 0.644，P = 0.000）呈正相關(guān)，miR-126與sVCAM-1呈負(fù)相關(guān)（r = -0.685，P = 0.000）。 結(jié)論 CHD患者存在明顯的miR-126表達(dá)下調(diào)和sVCAM-1表達(dá)上調(diào)，且上述指標(biāo)與冠狀動(dòng)脈病變程度密切相關(guān)，或許可作為CHD診斷和治療的參考指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 冠心病;miR-126;血管細(xì)胞黏附分子-1

[中圖分類號(hào)] R541.4 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1673-7210（2020）08（b）-0041-04

[Abstract] Objective To investigate the changes and clinical significance of plasma miR-126 and soluble vascular cell adhesion molecule-1 （sVCAM-1） levels in patients with coronary artery heart disease （CHD）. Methods One hundred and three cases of CHD patients hospitalized in Puning People′s Hospital of Guangdong Province from February 2018 to December 2019 were selected. They were divided into acute coronary syndrome （ACS） of 58 cases and stable angina pectoris （SAP） of 45 cases according to the diagnostic criteria， and 55 non-CHD patients were selected as the control group. All patients underwent coronary angiography and the Gensini′s degree integral method was used to evaluate coronary artery stenosis. The plasma miR-126 and sVCAM-1 levels were measured， and Pearson correlation coefficient was used for correlation analysis. Results The levels of sVCAM-1 and Gensini′s degree integral score in ACS group were significantly higher than those of SAP group and control group， the levels of miR-126 were all lower than those of SAP group and control group （P < 0.05）. And the level of miR-126 in SAP group was lower than that of control group， the Gensini′s degree integral score was higher than that of control group （P < 0.05）. The levels of miR-126 in patients with multiple coronary artery lesions and moderate to severe disease were respectively lower than those in patients with single coronary artery lesion and mild disease （P < 0.05）. The levels of sVCAM-1 in patients with multiple coronary artery lesions and moderate to severe disease were respectively higher than those in patients with single coronary artery lesion and mild disease （P < 0.05）. Correlation analysis showed that miR-126 was negatively correlated with the number of coronary artery lesions （r = -0.536， P = 0.007） and Gensini′s degree integral score （r = -0.574， P = 0.015）. sVCAM-1 was positively correlated with the number of coronary artery lesions （r = 0.619， P = 0.000） and Gensini′s degree integral score （r = 0.644， P = 0.000）. miR-126 was negatively correlated with sVCAM-1 （r = -0.685， P = 0.000）. Conclusion There are significant down-regulation of miR-126 expression and up-regulation of sVCAM-1 expression in CHD patients， and the indexes are closely related to the degree of coronary lesions， which may be used as reference indicators for the diagnosis and treatment of CHD.

[Key words] Coronary artery heart disease; miR-126; Vascular cell adhesion molecule-1

冠心?。–HD）是當(dāng)今世界上死亡率最高的疾病之一，目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為CHD主要是脂質(zhì)代謝異常導(dǎo)致脂質(zhì)浸入動(dòng)脈內(nèi)膜，沉積形成脂質(zhì)斑塊，即動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）病變，引起動(dòng)脈管壁增厚、動(dòng)脈彈性降低，導(dǎo)致血流受阻、心肌缺血，表現(xiàn)為心絞痛、心肌梗死、猝死等，嚴(yán)重影響人類的生活質(zhì)量[1-2]。近年來CHD的發(fā)病率逐年上升，并且呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)。尋找一個(gè)可靠的預(yù)測(cè)因子在早期指導(dǎo)CHD的發(fā)生、發(fā)展乃至預(yù)后中具有十分重要的意義[3]。微小RNA（microRNAs，miRNA）在心血管疾病中的作用是近年來的研究熱點(diǎn)，廣泛參與體內(nèi)多種生理過程，在血漿中相對(duì)穩(wěn)定，便于檢測(cè)。miR-126是一種內(nèi)皮特異表達(dá)的miRNA，研究中發(fā)現(xiàn)其參與了AS及高血壓病的發(fā)生發(fā)展[4-5]。血管細(xì)胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）能夠促進(jìn)淋巴細(xì)胞、血小板黏附在血管內(nèi)皮上，在AS斑塊的形成中發(fā)揮了重要作用[6-7]。本研究探討CHD患者血漿miR-126和VCAM-1的變化水平及臨床意義?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年2月—2019年12月在廣東省普寧市人民醫(yī)院住院的CHD患者103例，男61例，女42例;年齡34～76歲，平均（58.23±13.25）歲。依據(jù)疾病類型分為急性冠脈綜合征（ACS）組（58例）和穩(wěn)定型心絞痛（SAP）組（45例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①接受冠狀動(dòng)脈造影術(shù)，并確診為CHD;②病歷信息完整無缺漏，完善相關(guān)檢查;③患者或家屬知情同意，簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往有心肌病、嚴(yán)重心律失常、心功能衰竭、心臟瓣膜病病史;②自身免疫性疾病、惡性腫瘤、嚴(yán)重感染;③嚴(yán)重肝腎功能不全、周圍血管病;④近期使用免疫調(diào)節(jié)藥物，如腎上腺皮質(zhì)激素、抗感染類藥物;⑤懷孕婦女。另選同期接受冠狀動(dòng)脈造影且排除CHD的55例體檢者為對(duì)照組，男35例，女20例;年齡31～75歲，平均（57.82±14.27）歲。通過病歷和詢問采集研究對(duì)象一般資料：年齡、性別、體重、身高、高血壓病、糖尿病、心腦血管疾病史、吸煙史、既往用藥史，計(jì)算體重指數(shù)（body mass index，BMI）=體重（kg）/身高的平方（m2）。本研究經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查通過。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)《急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南》[8]和《非ST段抬高型急性冠脈綜合征管理指南》[9]進(jìn)行診斷和分型。ACS包括急性心肌梗死和不穩(wěn)定型心絞痛，癥狀為典型胸痛發(fā)作，疼痛劇烈可有瀕死感，含服硝酸甘油可緩解或無緩解，心電圖可見相鄰ST段抬高或異常Q波，或ST段壓低或T波倒置，也可無ST段改變，心肌酶水平高于正常上限2倍以上，冠狀動(dòng)脈造影顯示前降支、回旋支、右冠狀動(dòng)脈中至少一支血管狹窄且狹窄≥50%。SAP是固定誘因的心絞痛發(fā)作，疼痛性質(zhì)穩(wěn)定，含服硝酸甘油可緩解，冠狀動(dòng)脈造影顯示前降支、回旋支、右冠狀動(dòng)脈中至少一支血管狹窄且狹窄至50%。對(duì)照組：無心肌缺血證據(jù)，冠狀動(dòng)脈造影未發(fā)現(xiàn)有意義的血管狹窄。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 冠狀動(dòng)脈造影術(shù) ?所有患者在入院后行冠狀動(dòng)脈造影術(shù)檢查，由至少兩名心血管內(nèi)科介入醫(yī)師采用Judkins法進(jìn)行穿刺，行冠狀動(dòng)脈造影，并進(jìn)行造影結(jié)果判定，單支血管狹窄≥50%即認(rèn)定為病變血管，記錄病變血管支數(shù)。冠狀動(dòng)脈狹窄程度評(píng)價(jià)采用Gensini法，根據(jù)冠狀動(dòng)脈血管狹窄程度分別計(jì)1、2、4、8、16、32分[10]。將各血管的狹窄程度得分乘以系數(shù)再求和得到總分。依據(jù)病變血管支數(shù)將患者分為單支病變者（病變血管支數(shù)為1）和多支病變者（病變血管支數(shù)>1），依據(jù)Gensini評(píng)分將患者分為輕度病變者（Gensini≤26分）和中重度病變者（Gensini>26分）[11]。

1.3.2 血液學(xué)指標(biāo) ?患者入院后次日清晨采集靜脈血5 mL，使用羅氏P800全自動(dòng)分析儀測(cè)定三酰甘油（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C），試劑盒購(gòu)自上海一基實(shí)業(yè)有限公司（貨號(hào)：FS15696）。另采集2 mL血液，靜置后取血漿置于-80℃冰箱備用，采用雙抗體夾心法檢查可溶性VCAM-1（sVCAM-1）的濃度，采用美國(guó)R&D公司的試劑盒（批號(hào)：20171026），嚴(yán)格按照說明書操作。采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法檢測(cè)血漿中的miR-126，使用Trizol法提取血漿標(biāo)本總RNA，使用美國(guó)Bio-Rad公司的實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄PCR試劑盒（批號(hào)：20171205）合成模板DNA，采用SYBR定量PCR試劑盒（美國(guó)賽默飛世爾科技公司，批號(hào)：20170519）檢測(cè)miR-126的表達(dá)，表達(dá)水平采用2-ΔΔCt法進(jìn)行計(jì)算，引物序列為，F(xiàn)：5′-GGGGTGGTACCGTT-3′，R：5′-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3′。內(nèi)參基因序列為，F(xiàn)：5′-GACTTCATCACCGGGTGTAAATC-3′，R：5′-TATCG-TTGTTCTCCACT-CCTTGAC-3′。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn);多組計(jì)量資料比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組一般資料比較

三組患者年齡、性別、BMI、吸煙史、高血壓病、糖尿病病史及一般生化指標(biāo)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05），ACS組sVCAM-1水平、Gensini評(píng)分顯著高于SAP組和對(duì)照組，miR-126均低于SAP組和對(duì)照組（均P < 0.05），SAP組miR-126水平低于對(duì)照組，Gensini評(píng)分高于對(duì)照組組（P < 0.05）。見表1。

2.2 冠狀動(dòng)脈病變分支與miR-126及sVCAM-1的關(guān)系

多支病變者miR-126水平低于單支病變者（P < 0.05），sVCAM-1水平高于單支病變者（P < 0.05）;中重度病變者miR-126水平低于輕度病變者（P < 0.05），sVCAM-1水平高于輕度病變者（P < 0.05）。見表2～3。

2.3 CHD患者miR-126及sVCAM-1與冠狀動(dòng)脈病變的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析顯示，miR-126與病變冠狀動(dòng)脈支數(shù)（r = -0.536，P = 0.007）、Gensini評(píng)分（r = -0.574，P = 0.015）均呈負(fù)相關(guān)，sVCAM-1與病變冠狀動(dòng)脈支數(shù)（r = 0.619，P = 0.000）、Gensini評(píng)分（r = 0.644，P = 0.000）呈正相關(guān)，miR-126與sVCAM-1呈負(fù)相關(guān)（r = -0.685，P = 0.000）。

3 討論

CHD的主要原因是AS，它形成的過程是一個(gè)慢性炎癥過程，而細(xì)胞黏附分子是調(diào)節(jié)單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生黏附，觸發(fā)早期血管炎癥的關(guān)鍵因子。當(dāng)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)到內(nèi)皮細(xì)胞時(shí)，又會(huì)激活內(nèi)皮細(xì)胞分泌各種細(xì)胞因子，加速局部炎癥反應(yīng)，形成粥樣斑塊，這是介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)黏附的關(guān)鍵[12-14]。VCAM-1是細(xì)胞黏附分子的一種，主要在血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)，使循環(huán)中的白細(xì)胞與激活的血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密結(jié)合，當(dāng)炎癥激活血管內(nèi)皮細(xì)胞后，大量分泌VCAM-1，促進(jìn)淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞黏附在血管內(nèi)皮上，并可加速白細(xì)胞穿透內(nèi)皮細(xì)胞間的空隙向血管內(nèi)皮下浸潤(rùn)，進(jìn)而轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞，加速血管內(nèi)皮損傷[15-16]。這一過程可以給淋巴細(xì)胞提供抗原，誘導(dǎo)局部免疫反應(yīng)，釋放多種炎性細(xì)胞因子，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞表型改變，形成纖維斑塊[17-18]。sVCAM-1是由內(nèi)皮上脫落的VCAM-1溶解于血漿中形成的，其濃度可反映內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的VCAM-1含量，并且在冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)與外周血中的濃度幾乎一致，可通過檢測(cè)sVCAM-1代替VCAM-1[19]。本研究結(jié)果顯示，ACS組患者sVCAM-1水平顯著高于SAP組和對(duì)照組，提示sVCAM-1與心肌缺血嚴(yán)重程度有關(guān);進(jìn)一步對(duì)不同病變支數(shù)和不同Gensini評(píng)分患者sVCAM-1的相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示sVCAM-1與病變冠狀動(dòng)脈支數(shù)、Gensini評(píng)分呈正相關(guān)，提示sVCAM-1與冠心病患者冠狀動(dòng)脈病變程度有關(guān)，對(duì)于評(píng)價(jià)冠心病嚴(yán)重性具有積極意義。

miRNA是一類高度保守的非編碼小分子RNA，在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，因其廣泛存在于血液中，近年來將其作為新型標(biāo)志物在心血管疾病、腫瘤、糖尿病中都進(jìn)行了大量研究[20-22]。miR-126參與調(diào)控血管炎癥過程，能夠抑制VCAM-1的表達(dá)[23-24]。本研究結(jié)果顯示miR-126與sVCAM-1呈負(fù)相關(guān)，SAP組miR-126水平高于ACS組，多支病變患者miR-126低于單支病變患者，中重度病變患者miR-126低于輕度病變患者，提示miR-126與冠狀動(dòng)脈病變有關(guān)。相關(guān)性分析也顯示miR-126與病變冠狀動(dòng)脈支數(shù)及Gensini評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)，提示miR-126可能是冠狀動(dòng)脈病變程度的保護(hù)因子。有研究通過敲除小鼠miR-126基因，發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，證實(shí)miR-126具有抵抗AS進(jìn)展的作用[25]。

綜上所述，CHD患者存在明顯的miR-126表達(dá)下調(diào)和sVCAM-1表達(dá)上調(diào)，且上述指標(biāo)與冠狀動(dòng)脈病變程度密切相關(guān)，或許可作為CHD診斷和治療的參考指標(biāo)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] ?申文祥，李琚平，牛鎖成，等.阿托伐他汀治療冠心病前后患者血漿黏附因子濃度變化的觀察[J].臨床醫(yī)學(xué)，2017， 37（1）：17-18.

[2] ?王彩蕊，任鳳學(xué)，劉祎秀，等.冠心病患者冠狀動(dòng)脈病變進(jìn)展的相關(guān)危險(xiǎn)因素的探討[J].心肺血管病雜志，2020， 39（1）：14-18.

[3] ?陳秋霞，姜醒華.冠心病生物標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2015，21（2）：222-224.

[4] ?馮曉敏，劉玉薇，萬楠.miR-126與冠心病關(guān)系研究進(jìn)展[J].臨床軍醫(yī)雜志，2018，46（7）： 848-850.

[5] ?曾萍，楊簡(jiǎn).miRNA在冠心病檢測(cè)中的研究新進(jìn)展[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2017，37（1）：233-235.

[6] ?楊莉，何燕，楊文慧，等.雙源螺旋CT結(jié)合外周血管超聲和炎性標(biāo)志物評(píng)價(jià)老年2型糖尿病合并冠心病患者冠脈斑塊的穩(wěn)定性[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2015，35（7）：1747-1749.

[7] ?梁芳，馬玉梅，魏德芝，等.穩(wěn)消方對(duì)頸動(dòng)脈粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊MCP-1、VCAM-1表達(dá)、脂質(zhì)代謝、踝臂指數(shù)的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，24（22）：2400-2402，2427.

[8] ?中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)，中華心血管病雜志編輯委員會(huì).急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南[J].中華心血管病雜志，2015，38（8）：675-690.

[9] ?Amsterdam EA，Wenger NK，Brindis RG，et al. 2014 AHA/ACC guideline for the management of patients with non-ST-elevation acute coronary syndromes：a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines [J]. Circulation，2014，130（25）：e344-e426.

[10] ?中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)，中華心血管病雜志編輯委員會(huì).中國(guó)心血管病預(yù)防指南[J].柳州醫(yī)學(xué)，2012，5（4）：263-279.

[11] ?朱小莉，周云，孫曉靖.冠心病危險(xiǎn)因素分析及其與冠狀動(dòng)脈狹窄程度的關(guān)系[J].中國(guó)循證心血管醫(yī)學(xué)雜志，2017，9（12）：1513-1515.

[12] ?金鵬，周琪，康美麗，等.高遷移率族蛋白B1與冠心病病變程度和斑塊易損性相關(guān)性[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志，2017，31（6）：574-576.

[13] ?王陽(yáng)，米樹華，楊關(guān)林.動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥，2017，12（4）：619-623.

[14] ?田海萍，趙冠南，鄭俊華，等.脂聯(lián)素、血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子1和同型半胱氨酸水平與冠心病患者冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊類型的相關(guān)性研究[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志，2018，26（1）：22-26.

[15] ?耿馳，陶夢(mèng)醒，劉瑩.血管細(xì)胞黏附分子-1在心血管疾病中的研究進(jìn)展[J].心血管病學(xué)進(jìn)展，2019，40（2）：222-226.

[16] ?方葉青，謝培益，王磊，等.冠心病患者循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞變化及功能的研究[J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志，2019，27（8）：694-699.

[17] ?Brown RA，Shantsila E，Varma C，et al. Current Understanding of Atherogenesis [J]. Am J Med，2017，130（3）：268-282.

[18] ?趙雨軒，徐赟晟，倪晶宇，等.血管細(xì)胞黏附分子-1與動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制的研究現(xiàn)狀[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2018，34（12）：1481-1483.

[19] ?周立賓，薛紅，劉娟.冠心病患者外周血miR-126與sVCAM-1表達(dá)及相關(guān)性研究[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2019，18（9）：923-926.

[20] ?Lu TX，Rothenberg ME. MicroRNA [J]. J Allergy Clin Immunol，2018，141（4）：1202-1207.

[21] ?Feinberg MW，Moore KJ. MicroRNA Regulation of Ather-osclerosis [J]. Circ Res，2016，118（4）：703-720.

[22] ?李亞麗，姜皓，艾麗萍，等.循環(huán)microRNAs在冠心病中的診斷作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2018，22（9）：1665-1667.

[23] ?Wu H，Zhang J. miR-126 in Peripheral Blood Mononuclear Cells Negatively Correlates with Risk and Severity and is Associated with Inflammatory Cytokines as well as Intercellular Adhesion Molecule-1 in Patients with Coronary Artery Disease [J]. Cardiology，2018，139（2）：110-118.

[24] ?李云，宋銀宏，呂云波.miR-126與血管的研究進(jìn)展[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2015，35（2）：257-261.

[25] ?Tian HS，Zhou QG，Shao F. Relationship between arterial atheromatous plaque morphology and platelet-associated miR-126 and miR-223 expressions [J]. Asian Pac J Trop Med，2015，8（4）：309-314.

（收稿日期：2020-05-19）